乳腺癌组织中Bmi－1蛋白表达与病理学特征的相关性研究

王晓亮，李绍刚，李赛飞，康旭，汪亚航，王军，王东海，金来伦

（奉化市人民医院，奉化 315500）

Bmi－1（B cellspecific moloney murine leukemia virus insertion site1）是多梳基因家族（Polycomb group，PcG）成员中的转录抑制因子，参与细胞增殖调控［1］。本研究通过检测Bmi－1在乳腺浸润性导管癌组织中的表达，探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

随机选择2001年1月～2005年12月符合美国癌症联合委员会（AJCC）乳腺癌分期（第6版）的女性乳腺浸润性导管癌病例60例。全部病例术前均无放疗、化疗及其他治疗病史，年龄25～87岁，平均年龄 （55±12.9）岁。Luminal A 型 29 例，Luminal B型11例，HER2过表达型6例，Basallike型14例；肿块大小（3.22±1.39）cm，T1 18例，T2 38例，T3 4例；淋巴结N0 35例，N1 15例，N2 10例；TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期36例，Ⅲ期10例；远处转移12例，随访期间死亡9例。

1.2 试剂与方法

乳腺癌组织标本均经免疫组织化学检测雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）、E－cadherin、P120和Ki－67，每例乳腺癌组织病理切片均由两位专家确认诊断为乳腺浸润性导管癌。癌旁乳腺组织取自上述60例标本距癌组织3cm以上乳腺组织。

鼠抗人单克隆抗体Bmi－1购自美国SantaCruz公司，ER、C－erbB－2、PR、E－cadherin、P120和 Ki－67均购自福州迈新生物开发公司。

采用免疫组织化学SP法。将标本连续切片，常规脱蜡、水化，经3%的H2O2消解内源性过氧化物酶后，高压抗原修复，一抗（鼠抗人 Bmi－1、C－erbB－2、ER、PR单克隆抗体）、二抗（生物素标记）作用后，用DAB显色，苏木精复染后脱水透明，常规中性树胶封固后显微镜下观察。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 免疫组织化学结果判定

Bmi－1蛋白阳性表达主要表现为细胞核内呈现棕黄色或棕褐色颗粒，也有少量胞质内呈现棕黄色颗粒。随机取5个高倍视野，每个视野分别计数100个细胞，计算阳性细胞所占百分率。染色结果根据阳性细胞所占比率分为4个等级，阴性：无阳性细胞或阳性细胞数＜5%；弱阳性：阳性细胞数为5%～25%；中阳性：阳性细胞数为26%～50%；强阳性：阳性细胞数＞50%。根据这4个等级（阴性＝－；弱阳性＝＋；中阳性＝＋＋；强阳性＝＋＋＋）的表达水平评分。

1.4 统计学处理

所有数据均经SPSS 17.0软件进行统计分析。计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，并采用Spearman相关性分析，显著性水准a＝0.05。

2 结果

2.1 Bmi－1蛋白在癌旁乳腺组织和乳腺癌组织中的表达

乳腺癌组织中Bmi－1蛋白阳性表达主要表现为细胞核内呈现棕黄色或棕褐色颗粒（见图1），也有少量胞质内呈现棕黄色颗粒。在60例癌旁乳腺组织中，Bmi－1蛋白阳性表达10例；在60例乳腺癌组织中，Bmi－1蛋白阳性表达53例。Bmi－1蛋白的阳性表达率在癌旁乳腺组织中和乳腺癌组织中分别为16.7%和88.3%，两者表达差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 Bmi－1蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系

60例乳腺癌标本，Bmi－1蛋白阳性表达率在淋巴结N0、N1、N2中差异有统计学意义（P＜0.05，R＝0.339）；Bmi－1蛋白阳性表达率在 T1、T2、T3分别为72.2%、94.7%、100%，差异有统计学意义（P＜0.05，R＝0.431）；Bmi－1 蛋白阳性表达率在TNM分期Ⅰ期64.3%、Ⅱ期94.5%、Ⅲ期100%，差异有统计学意义（P＜0.05，R＝0.360）；Bmi－1蛋白阳性表达率在无远处转移组和远处转移组中分别为85.4%、100%，差异有统计学意义（P＜0.05，R＝0.302）；而Bmi－1蛋白阳性表达在乳癌相关基因ER、PR、CerbB－2中，差异无统计学意义（见表1）。

表1 Bmi－1蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系

图1 乳腺癌组织中Bmi－1蛋白阳性表达

3 讨论

Bmi－1是PcG家族成员之一，调控细胞的增殖［1］，对哺乳动物的骨骼、神经发育及造血有重要作用［2］。研究［3－5］表明 Bmi－1 在恶性肿瘤如胃癌、肺癌、宫颈癌中高表达，提示Bmi－1的高表达与多种肿瘤的发生、发展关系密切。因此，高表达Bmi－1的细胞被认为是“肿瘤干细胞”，确定Bmi－1的调控机制及其在肿瘤发生、发展中的作用对诊治恶性肿瘤有重要意义。

Bmi－1调控机制可能为：1）Bmi－1协同c－myc基因作用于肿瘤细胞，使其逃逸凋亡［6］；2）Bmi－1的下游靶 点 是INK4a－ARF 位 点［7］，Bmi－1 通过抑制 p 16INK4a的肿瘤抑制通路促进肿瘤细胞增殖［8］；3）Bmi－1激活肿瘤细胞的端粒酶促使肿瘤细胞扩增［9］。

文献［10］报道Bmi－1会诱导乳腺上皮永生化，本研究发现乳腺癌组织中Bmi－1蛋白高表达，其阳性表达率为88.3%，明显高于癌旁组织，与冯艳等［11］报道相符。同时，发现Bmi－1蛋白的高表达与乳腺癌原发癌肿大小呈正相关（P＜0.05，R＝0.431），并与乳腺癌TNM分期之间呈正相关，即乳腺癌TNM分期越高，Bmi－1蛋白阳性表达就越显著。这说明Bmi－1作为癌基因，通过各种调控机制对乳腺癌的发生发展起重要作用，提示Bmi－1可能成为诊断乳腺癌的新分子标志物。

浸润转移是乳腺癌的恶性生物学行为，也是导致患者死亡的主要原因。本研究发现乳腺癌Bmi－1蛋白阳性表达与淋巴结转移之间呈正相关，Bmi－1蛋白阳性表达越显著，淋巴结转移越多，与文献［1］报道的乳腺癌Bmi－1的高表达与腋窝淋巴结转移显著相关的结论一致；同时，本研究发现乳腺癌Bmi－1蛋白在远处转移组的阳性表达明显高于无远处转移组，表明乳腺癌患者中Bmi－1的高表达与乳腺癌的远处转移呈正相关，即转移进展越快，Bmi－1蛋白阳性表达就越显著。淋巴结转移、远处转移提示乳腺癌预后不良，本研究发现当乳腺癌出现淋巴结转移越多、远处转移越快时，其Bmi－1蛋白表达就越显著，说明Bmi－1在乳腺癌的浸润转移过程中起重要作用，提示Bmi－1可能成为预测乳腺癌转移风险的新分子标志物。

综上所述，Bmi－1蛋白的高表达在乳腺癌的发生发展和浸润转移中起重要作用，提示Bmi－1可能成为乳腺癌的诊断及预测乳腺癌转移风险的新标志物。

［1］Kim JH，Yoom SY，Jeong SH，et al.Overexpression of Bmi－1 oncoprotein correlates with axillary lymph node metastases in invasive ductal breast cancer［J］.Breast，2004，13（5）：383－388.

［2］Jacobs JJ，Scheijen B，Voncken JW，et al.Bmi－1collaborates with c－myc in tumorigenesis by inhibiting c－Myc－induced apoptosia via INK4a／ARF［J］.Genes Dev，1999，13（20）：2678－2690.

［3］赵晶，罗祥东，达春丽，等.Bmi－1在正常胃组织和胃癌及其癌前病变中的表达及意义［J］.中国肿瘤临床，2009，36（1）：42－45.

［4］Hu Z，Hu Y，Zhu Y.Preliminary investigation on expression of Bmi－1in non－small－cellular lung cancer［J］.Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2008，11（1）：107－109.

［5］Zhang X，Wang CX，Zhu CB，et al.Overexpression of Bmi－1in uterine cervical cancer：correlation with clinicopathology and prognosis［J］.Int J Gynecol Cancer，2010，20（9）：1597－1603.

［6］Park IK，Morrison SJ，Clarke MF.Bmi－1，stem cells，and senescence regulation［J］.J Clin Invest，2004，113（2）：175－179.

［7］Jacobs JJ，Kieboom LK，Marino S，et al.The oncogene and Polycomb－group gene Bmi－1regulates cell proliferation and senescence through the ink4alocus［J］.Nature，1999，397（6715）：164－168.

［8］Dhawan S，Tschen SI，Bhushan A.Bmi－1regulates the Ink4a／Arf locus to control pancreatic beta－cell proliferation［J］.Genes Dev，2009，23（8）：906－911.

［9］Song LB，Zeng MS，Liao WT，et al.Bmi－1is a novel molecular marker of nasopharyngeal carcinoma progression and immortalizes primary human nasopharyngeal epithelial ce1ls［J］.Cancer Res，2006，66（12）：6225－6232.

［10］Dimri GP，Martinez JL，Jacobs JJ，et al.The Bmi－1oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells［J］.Cancer Res，2002，62（16）：4736－4745.

［11］冯艳，宋立兵，郭宝红，等.Bmi－l在乳腺癌组织中的表达及意义［J］.癌症，2007，26（2）：154－157.