房 芳,尤如华,尤瑞琪,,高春国,杨祖云,郭荣富*
(1. 云南省动物营养与饲料重点实验室 云南农业大学,云南 昆明 650201;2.云南省曲靖市畜禽改良工作站,云南 曲靖 655000)
哺乳仔猪健康状况及生长性能对断奶仔猪的生长有重要影响。博落回提取物(Cordatd extract ,MCE)具有明显的抗菌和抗氧化作用,能促进初生仔猪对饲料养分的吸收,改善血清抗氧化指标,增强机体免疫力,对断奶仔猪的健康起到积极作用。Vieira等[1]研究报道,在火鸡饲粮中添加32.8 mg含有MCE的饲料添加剂能提高火鸡采食量。饶华等[2]、蔡鹏等[3]研究表明,MCE能降低料重比,改善断奶仔猪生长性能。满意等[4]研究表明,MCE能显著改善断奶仔猪生长性能、血清生化指标及免疫参数。博落回在我国资源丰富,其主要有效成分血根碱和白屈菜红碱具有良好的杀菌、抑菌活性。MCE作为抗生素的一种替代品使用,是改善仔猪健康和生产性能的有效途径之一。迄今,MCE对哺乳仔猪生长性能,抗氧化能力、免疫力等方面的影响鲜见报道。本试验以哺乳仔猪为研究对象,探讨MCE对哺乳仔猪生长性能、免疫参数及血液抗氧化指标的影响,旨在对哺乳仔猪MCE的研究和应用提供科学依据。
本试验选用体重、胎次、泌乳量、产仔数相近的18头健康母猪所产的180头哺乳仔猪为试验对象,试验组与对照组各90头,每个处理组设9个重复,每个重复10头仔猪,第7 d开始诱食补料,35 d结束。试验组添加MCE 4.5 mg/kg,对照组未添加MCE。
试验饲粮参照NCR[12]仔猪营养需要量配制基础饲粮,日粮组成及营养水平见表1。在此基础上,添加MCE 4.5 mg/kg配制成试验饲粮。
仔猪第7 d开始诱食,自由采食和饮水,按种猪场常规饲养和免疫规程进行饲养管理,记录仔猪初生重及7 d,20 d,35 d体重,计算耗料量、日采食量和7~35 d平均日增重。
试验材料MCE由云南农业大学云南省动物营养重点实验室猪营养研究室提供。
1.5.1 生产性能 分别于仔猪刚出生及7、20、35日龄早晨空腹称重,计算仔猪的平均日增重、平均日采食量、料重比。
1.5.2 采血 试验结束当天,所有仔猪空腹、前腔静脉采血5 mL,制备血清,用于血液免疫参数的测定:免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、溶菌酶(LSZ)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO),采用试剂盒(南京建成生物有限公司提供)测定。
1.5.3 血液抗氧化参数 总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶 、谷胱甘肽硫转移酶、谷胱甘肽和黏膜谷胱甘肽 ,采用试剂盒(南京建成生物有限公司提供)测定。
空肠黏膜钠泵、总二糖酶活性参照袁雪波等[6]采用的方法进行测定。
1.5.4 小肠形态学观察 参照陈恒灿等[7]采用的方法进行。
对试验数据进行t检验,试验结果采用“平均值±标准差”表示。
表1 仔猪基础饲粮 Table 1 Basal diet for piglets
注:①每千克日粮含:铁(FeSO4) 100 mg,铜(CuSO4) 10 mg,锰(MnSO4)5 mg,锌(ZnSO4) 100 mg,碘(KI) 0.2 mg,硒(Na2SeO3) 0.3 mg;② 每千克基础日粮含:维生素 A 2 200 IU,维生素 D3220 IU,维生素 E 16 IU,维生素K 0.5 mg,维生素B120.02 mg,核黄素4 mg,烟酸 20 mg,泛酸12 mg,氯化胆碱0.6 mg,叶酸,0.3 mg,硫胺素,1.5 mg维生素B62 mg,生物素0.08 mg;③ 营养水平除消化能外其它指标均为测定值。
Note:① The diet provides per kilogram of: Fe (FeSO4)100 mg, Cu (CuSO4) 10 mg, Mn (MnSO4) 5 mg, Zn (ZnSO4) 100 mg, I (KI) 0.2 mg, Se (Na2SeO3) 0.3 mg;② The basal diet supplies per kilogram of: vitamin A 2 200 IU, vitamin D3 220 IU, vitamin E 16 IU, vitamin K 0.5 mg, vitamin B120.02 mg, riboflavin 4 mg,niacin 20 mg, pantothenic acid 12 mg, choline chloride 0.6 mg, folic acid 0.3 mg, thiamin 1.5 mg, pyridoxine 2 mg, biotin 0.08 mg;③ Nutrition levels except DE are determined values.
由表2可知,初出生的仔猪及出生7 d、20 d和35 d体重组间差异不显著,7~35 d增重及日增重差异也不显著(P>0.05)。但7~35 d耗料量及日采食量差异显著(P<0.05),相比于试验组,对照组日采食量减少了15.15%。
2.2.1 小肠形态学 由表3可知,加入MEC的试验组空肠绒毛长度极显著高于对照组(P<0.01),空肠隐窝深度极显著低于与对照组(P<0.01),V/C显著极显著高于对照组(P<0.01)。
表2 MCE对仔猪生产性能的影响Table 2 Effects of MCE on the growth performance of piglets
注:同行肩标大写字母不同者表示差异极显著(P<0.01);小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)。下同。
Note:Values with different capitalized superscripts within a row mean significant difference(P<0.05); those with lowercase letter superscripts mean extreme difference(P<0.01).The same below.
表3 MCE对仔猪空肠绒毛长度、隐窝深度的影响Table 3 Effect of MCE on piglets' jejunum villus length and crypt depth
2.2.2 空肠黏膜酶活性 由表4可知,添加MCE后钠泵和总二糖酶的含量显著高于对照组(P<0.05),试验组钠泵相对于对照组上升19.28%,总二糖酶上升25.44%。
由表5可知,试验组仔猪血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、溶菌酶、一氧化氮合酶和一氧化氮均极显著高于对照组(P<0.01),而乳酸脱氢酶活性显著低于照组(P<0.05)。
表4 MCE对仔猪空肠黏膜酶活性的影响Table 4 Effect of MCE on piglets' jejunum enzyme activity
表5 MCE对仔猪血清免疫应激参数的影响Table 5 Effect of MCE on piglets' serum immune stress parameters
由表6可知,试验组总抗氧化能力和总超氧化物歧化酶均显著高于对照组(P<0.05),丙二醛含量极显著低于对照组(P<0.01),试验租谷胱甘肽过氧化物酶显著高与对照组 (P<0.05)。试验租黏膜谷胱甘肽极显著高于对照组(P<0.01)。但与对照组比较,谷胱甘肽还原酶 、谷胱甘肽硫转移酶和谷胱甘肽差异不显著(P>0.05)。
蔡鹏等[2]研究表明,添加0.337~5.400 mg/kg的MCE,能显著改善断奶仔猪生长性能。本试验发现,在7~35 d的仔猪基础饲料中添加4.5mg/kgMCE,可显著降低新生仔猪的日采食量及耗料量,有增加体重的趋势。结果说明MCE可以提高新生仔猪对饲料养分的利用率。
表6 MCE对仔猪血清抗氧化指标的影响Table 6 Effect of MCE on piglets' serum antioxidant index
进一步分析小肠形态学变化后发现,对新生仔猪添加MCE,明显增加空肠绒毛长度,降低隐窝深度。顾宪红等[8]研究表明,仔猪绒毛宽度较宽, 会使单位面积上肠绒毛数减少, 吸收面积降低, 影响消化功能。本试验结果表明,MCE通过增加空肠绒毛长度和降低隐窝深度,可增大吸收面积,提高饲料养分消化吸收能力。
小肠粘膜钠泵和总二糖酶活性是反映仔猪对饲料养分吸收能力的重要参数。邹伟等[9]研究表明,肠上皮细胞不能直接吸收日粮中的淀粉,必须由粘膜二糖酶水解成单糖后方可吸收利用,因此二糖酶在碳水化合物的消化吸收过程中起着至关重要的作用。袁雪波等[5]在对哺乳仔猪空肠黏膜酶活性变化的研究表明,提高哺乳仔猪总二糖酶活性有利于增强肠道对二糖的分解, 提高能量物质的吸收、转化和利用。许梓荣等[10]报道, 仔猪二糖酶主要分布于空肠中。本试验添加MCE后,显著提高空肠钠泵和粘膜二糖酶活性,结果说明MCE能促进新生仔猪对饲料养分的吸收和利用。
免疫球蛋白是具有抗体活性的蛋白质,能与抗原进行特异结合是重要的免疫物质。LSZ具有溶菌作用,是生物体内重要的非特异性免疫因子,能防御外源微生物入侵,破坏细胞壁引起细胞裂解[11]。LDH是重要的氧化还原酶,正常情况下血清中含量很少但当机体出现内皮细胞受损时,LDH在血清中的含量就会显著升高。病原侵入,机体会有大量的NOS产生,促进大量的NO的生成,使机体有效抵抗外来病原入侵,提高机体免疫力。本试验表明MCE能促进免疫球蛋白、LSZ、NOS及NO升高,降低LDH含量。满意等[3]对MCE的研究表明,MCE在改善血清免疫参数的效果上明显优于土霉素。本试验表明,MCE可明显改善哺乳仔猪血清免疫应激参数,MCE是代替抗生素的一种有效途径。
自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物,具有强氧化性,可损害机体组织和细胞,引起慢性疾病及衰老效应。T-AOC主要是清除机体内过高的自由基,维持内环境活性氧的动态平衡,是反应机体抗氧化能力的重要指标,MDA是活性氧(ROS)作用于多不饱和脂肪酸后的氧化产物,常用于脂质过氧化评价[12]。SOD的功能是催化超氧离子,清除体内自由基,保护细胞免受损伤,在机体的氧化和抗氧化平衡中起着重要的作用。GPX是重要的抗氧化酶,可以清除体内的过氧化氢及脂质过氧化物可以防止细胞膜和其它生物组织免受过氧化损伤。还原型的GSH对氢过氧化物有还原作用在机体中具有抗氧化和整合解毒的作用,GPX不仅能清除自由基还可以提高机体免疫。刘永祥等[13]研究表明,堆型艾美耳球虫感染肉仔鸡后能极显著降低肉仔鸡十二指肠黏膜谷胱甘肽(GSH)的含量。本试验加入MCE后仔猪十二指肠黏膜谷胱甘肽(GSH)含量极显著高于对照组。李烨等[14]在丙二醛对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响表明,MDA 能降低 MSCs 向成骨细胞谱系分化能力。本试验中,试验组MDA极显著低于对照组。与对照组相比,试验组T-AOC提高8.55% 、T-SOD提高10.61% 、GSH-px提高13.72%、GSH升高17.44%、MDA下降19.24%。本试验结果显示,MCE明显改善新生仔猪抗氧化参数,显著提高仔猪机体的抗氧化能力。
MCE能明显增加小肠绒毛长度、降低隐窝深度,提高空肠黏膜钠泵和总二糖酶活性,具有促进新生仔猪对饲料养分的利用,从而改善新生仔猪生产性能。MCE可改善新生仔猪血清T-AOC、T-SOD、GSH-px和空肠黏膜GSH参数,明显降低MDA含量,提高仔猪的抗氧化能力,保护机体细胞免受自由基的损伤。MCE可改善新生仔猪血清免疫应激参数,明显提高新生仔猪的抗病能力,MCE不具有抗药性和残留问题,作为抗生素替代品使用具有很好应用前景。
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