丁苯酞注射液对急性脑梗死患者血清NO和NOS表达及临床疗效的影响

刘昌云 陈枝挺 黄华品 (福建医科大学附属协和医院神经内科，福建 福州 350001)

脑梗死约占脑血管病的80%，大量的研究证实丁苯酞对于脑梗死具有良好的效果，并且发现其可能降低花生四烯酸含量，抑制谷氨酸释放，降低细胞内钙浓度，提高血管内皮一氧化氮(NO)的水平，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等机制发挥脑血管保护作用。近年来，丁苯酞对脑梗死区域中NO和一氧化氮合酶(NOS)的调节机制逐步成为研究热点〔1〕。本文探讨丁苯酞注射液对急性脑梗死患者血清NO和NOS表达及临床疗效的影响。

1 对象与方法

1.1 对象 我院2010年1月至2012年10月急性脑梗死患者76例，均符合全国第四届脑血管病会议制订的诊断标准〔2〕，并经脑CT或MRI证实。入选标准:①初次发病，发病距离治疗的时间6～72 h;②美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)4～20分;③均行颈动脉及脑动脉CTA检查，病因为大动脉粥样硬化。排除标准:①心源性栓塞;②小动脉病变;③严重肝肾功能不全;⑤对阿司匹林过敏等药物过敏。随机分为常规治疗组(常规组)36例，男20例，女16例;年龄45～76岁，平均61.6岁;丁苯酞注射液治疗组(丁苯酞组)40例，男22例，女18例;年龄45～79岁，平均62.5岁。两组患者的性别、年龄、病程、血尿便常规、血脂、血尿酸、血液流变学指标、NIHSS评分、日常生活活动能力量表(ADL)评分等差异均无统计学意义，具有可比性。

1.2 给药方法 两组均常规给予奥拉西坦静滴6 g，每天1次，共用14 d，依达拉奉30 mg静滴，每天2次，共14 d。常规拜阿司匹林、阿托伐他汀钙(立普妥)治疗及康复治疗，并根据病情必要时给予护胃、脱水、抗感染等治疗。丁苯酞组给予丁苯酞注射液滴注100 mg，每天2次，共14 d。常规组给予生理盐水100 ml滴注，每天2次，共14 d。

1.3 疗效评估 分别采用NIHSS和ADL评分，药物治疗前和治疗后第14天及3个月，各评分一次。监测血尿常规、血糖、血脂、肝肾功能和心电图等，详细记录不良反应。临床疗效评定参照脑卒中患者NIHSS标准及临床疗效评定标准进行:①基本痊愈:功能缺损评分减少90% ～100%，病残程度0级;②显著进步:减少46% ～89%，病残程度1～3级;③进步:减少18% ～40%;④无变化:减少或增加18%以内;⑤恶化:增加18%以上;⑥死亡。

1.4 标本采集及NO和NOS 分别在发病后用药前和治疗后1 d(第15天)采集静脉血5 ml各2份。NO含量和NOS活性检测均采用南京建成生物工程研究所提供的NO含量和NOS活性测试盒，NO含量采用硝酸还原酶法测定，以NO-2/NO-3浓度间接反映血清 NO水平。取两组各1份血标本，4 000 r/min离心10 min，取上清液用于NO含量测定，操作步骤按试剂盒说明书进行，NO含量以U/ml表示;取两组各1份血标本，4 000 r/min离心10 min，取上清液直接测定NOS活性，操作步骤按试剂盒说明书进行，NOS活性以μmol/L表示。

1.5 统计学分析 采用SPSS13.0统计软件进行t和χ2检验。

2 结果

2.1 NIHSS评分、ADL评分的比较 治疗前，常规组和丁苯酞组的NIHSS评分和ADL评分无显著差异(P＞0.05)。治疗后14 d，常规组和丁苯酞组的NIHSS评分、ADL评分及基本痊愈和显著进步的临床疗效组间无显著差异(P＞0.05)。治疗后90 d，丁苯酞组的NIHSS评分、ADL评分及基本痊愈和显著进步的临床疗效均优于常规组(P＜0.05)。见表1。

2.2 NO含量和NOS活性的比较 治疗前，常规组和丁苯酞组的NO含量和NOS活性无显著差异 (P＞0.05)。治疗后14 d，丁苯酞组的NO含量和NOS活性均低于常规组 (P＜0.05)。治疗后90 d，常规组和丁苯酞组的NO含量和NOS活性的组间差异也无统计学意义 (P＞0.05)。见表1。

表1 两组治疗前后NIHSS评分、ADL评分、NO含量和NOS活性的变化(s)

表1 两组治疗前后NIHSS评分、ADL评分、NO含量和NOS活性的变化(s)

与常规组比较:1)P＜0.05

指标 常规组(n=36)治疗前 治疗14 d 治疗90 d 90 d NIHSS(分)7.3±2.7 5.2±1.3 4.2±0.8 7.8±2.9 5.4±1.5 2.8±0.61)丁苯酞组(n=40)治疗前 治疗14 d 治疗ADL(分)23.4±4.3 53.8±10.2 61.8±12.8 21.5±5.3 58.3±13.6 73.5±16.71)NO(U/ml)64.5±7.3 53.7±6.4 33.7±3.4 65.8±9.7 36.7±3.91) 29.7±3.2 NOS(μmol/L)35.7±6.3 30.3±3.9 28.3±3.9 34.2±6.8 14.6±2.91) 27.6±2.9基本痊愈和显著进步(n)－ 4 11 － 8 251)

3 讨论

左旋丁苯酞又名芹菜甲素，是从芹菜种籽中分离出的有效成分，根据其结构式，其异构体右旋丁苯酞被合成出来。之后它们的混合物消旋丁苯酞(NBP)作为临床药物被发展起来〔3〕;于2002年11月正式通过国家食品药品监督管理局的审批成为治疗脑卒中的临床药物，适应于脑梗死急性期治疗〔4〕。它可以通过多种机制发挥脑血管保护作用，其中抗氧化作用近年来尤其被研究工作者重视，并且在肌萎缩侧索硬化和帕金森病的动物模型中已经证实其存在保护作用〔5，6〕。缺血性脑卒中病理生理机制复杂，其中NO和NOS是脑缺血神经损伤的关键因素之一〔7～9〕。NO是机体内重要的信使分子和效应分子，为神经传递、血管舒张、神经功能内源性介质，与神经系统生理和病理过程关系密切，作为NO生物合成限速酶的NO合酶(NOS)，在脑缺血中发挥神经元保护和神经毒性的双重作用。国内有学者观察原代培养的胎鼠皮层神经细胞外液的NO水平，发现d-NBP能使低糖低氧条件下皮层神经细胞外液NO水平明显升高〔10〕。但是对于缺氧状态下的内皮细胞，NBP则可以明显抑制iNOS的激活，减少NO的生成，从而发挥对内皮细胞的保护作用〔11〕。这说明急性缺血缺氧条件下，丁苯酞对不同细胞的NO和iNOS的调节作用并不完全相同。

本研究说明丁苯酞对于促进神经恢复确实存在积极的作用。丁苯酞在整体水平降低了NO相关性氧化应激对患者神经功能的影响。丁苯酞对NO及NOS的影响主要限于急性期，也提示脑梗死急性期治疗的重要性。综上所述，NO和NOS在脑缺血神经损伤中起着重要的作用，丁苯酞可能在整体上降低缺血灶中NO含量和NOS活性从而发挥神经血管的保护作用，促进神经功能恢复。

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3 Peng Y，Zeng X，Feng Y，et al.Antiplatelet and antithrombotic activity of L-3-n-butylphahalide in rats〔J〕.J Cardiovasc Pharmacol，2004;43:876-81.

4 崔丽英，刘秀琴，朱以诚，等.Dl-3-正丁基苯酞治疗中度急性缺血性脑卒中的多中心、随机、双盲和安慰剂对照研究〔J〕.中华神经科杂志，2005;38(4):251-4.

5 Xiong N，Huang J，Chen C，et al.Dl-3-n-butylphthalide，a natural antioxidant，protects dopamine neurons in rotenone models for Parkinson's disease〔J〕.Neurobiol Aging，2012;33:1777-91.

6 Feng XH，Yuan W，Peng Y，et al.Therapeutic effects of dl-3-n-butylphthalide in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Chin Med J，2012;125:1760-6.

7 Stoyanova II，Lazarov NE.Localization of nitric oxide synthase in rat trigeminal primary afferent neurons using NADPH2 diaphorase histochemistry〔J〕.J Mol Histol，2005;36:187-93.

8 HenekaMT，Feinstein DL.Expression and function of inducible nitric oxide synthase in neurons〔J〕.J Neuroimmunol，2001;114:8-18.

9 Holopainen IE.Organotypic hippocampal slice cultures:a model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death，neuroprotection，and synaptic plasticity〔J〕.Neurochem Res，2005;30:1521-8.

10 阎超华，冯亦璞.丁基苯酞对原代培养胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响〔J〕.药学学报，1998;33(6):418-23.

11 Gerald DE，Berra YM，Frapart DA，et al.JunD reduces tumor angiogenesis by protecting cell from oxidative stress〔J〕.Cell，2004;118:781-94.