抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者中临床意义的研究

李金凤 胡飞 欧阳贤凤

系统性红斑狼疮是一种对患者皮肤与内脏进行全身侵犯的自身免疫性疾病，临床具有弥漫性，对肾脏、皮肤黏膜、中枢神经以及骨骼肌肉等有广泛影响，累及多个脏器官与系统，患者血液系统损害后出现血小板显著减少，临床发病率较高，相关资料显示抗血小板抗体在血小板减少中有显著作用机制[1-2]。笔者为探讨抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者的临床意义，选取2010年3月-2013年3月32例血小板减少与32例血小板未减少患者进行分组研究，对比分析两组患者抗血小板抗体阳性率情况，现将具体情况报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年3月-2013年3月本院接受诊治的64例系统性红斑狼疮患者，其中血小板减少（血小板<100×109/L）32例为研究组，男19例，女13例，年龄21～76岁，平均（35.4±2.7）岁；血小板未减少32例为对照组，男21例，女11例，年龄23～79岁，平均（36.1±2.5）岁。所有患者临床无输血情况。两组患者年龄、性别比较差异无统计学意义（P<0.05），具有可比性。

1.2 方法 两组患者均采取对症治疗，并应用ELISA法MACE试剂盒对患者进行抗血小板抗体检测。

1.2.1 MACE-1检测方法 抗血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体进行MACE-1检测[3]，使用O型随机机采集50 mL血小板，分10份，对其混合离心后收集血小板扣，在血小板扣中添加体积相等细胞重悬保存液，两者充分混合后取血小板扣重悬液15μL放入Eppendorf管[4]，向管中加入待检血清150 μL，然后将标本放入水浴箱内，温度设定37 ℃，孵育半 h后致敏。在标本中添加C反应蛋白400 μL，离心5 min，离心12 000转/min，洗涤2次后在标本中添加裂解液120 μL，均匀后在对应板孔中添加50 μL，GPⅡb/Ⅲa为红色条孔[5]，封膜后继续孵育半 h后添加洗液300 μL，连续洗板4次后拍干，用酶标记第二抗体，封膜后继续孵育半 h，重复洗涤步骤。标本添加PNPP100 μL常温下孵育半 h，避光，标本底部有颜色出现后添加终止液100 μL。酶标仪设定主波长45 mm，参比波长630 nm，读取A值，Cutoff值设为2倍阴性对照A值，阳性标本A值大于Cutoff值[6]。

1.2.2 MACE-2检测方法 对GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ、GPⅣ抗体进行MACE-2检测[7]，使用O型随机机采集50mL血小板，分10份，对其混合离心后收集血小板扣，在血小板扣中添加体积相等细胞重悬保存液，两者充分混合后取血小板扣重悬液20 μL放入Eppendorf管，向管中加入待检血清200 μL，对标本进行体外致敏方法与MACE-1检测相同，洗涤2次后在标本中添加裂解液160μl，均匀后在对应板孔中添加50 μL。GPⅠa/Ⅱa为紫色条孔，GPⅠb/Ⅸ为黄色条孔，GPⅣ为黑色条孔[8]，封膜后继续孵育半 h后添加洗液300 μL，连续洗板4次后拍干，用酶标记第二抗体，封膜后继续孵育半 h，重复洗涤步骤。标本添加PNPP100 μL常温下孵育半 h，避光，标本底部有颜色出现后添加终止液100 μL。酶标仪设定参数同上，读取A值，标本阳性或阴性定义同上[9]。

1.3 统计学处理 运用SPSS 14.0统计学软件对数据进行处理，计数资料进行字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

治疗前研究组与对照组抗血小板抗体阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后研究组抗血小板抗体阳性率低于治疗前（P<0.05）。见表1、表2。

表1 两组治疗前抗血小板抗体阳性率比较 例（%）

表2 研究组治疗前后抗血小板抗体阳性率比较 例（%）

3 讨论

系统性红斑狼疮属于异质性疾病，患者自身抗体通过和对应的自身免疫抗原结合起来形成循环免疫复合物并经Ⅲ型超敏反应对患者自身组织与器官进行损伤，而且抗体与血细胞的表面抗原相结合经Ⅱ型超敏反应对血细胞进行损伤，导致患者出现多系统或多器官受累症状[10]。在临床疾病诊断上根据患者临床症状开展实验室检查，其中最主要的诊断标准为抗血小板抗体阳性检测，有相关资料显示患者抗血小板抗体与血小板减少有重要联系[11]，而导致系统性红斑狼疮患者出现血小板减少因素却多种多样，例如患者血小板产生不足或分布异常可导致血小板减少、患者在药物治疗过程中血小板被药物损伤过度或感染性减少均可导致血小板减少，对患者血小板减少过程进行分析发现抗血小板抗体在整个过程中有重要作用，对血小板构造进行分析发现血小板膜表面存在数量众多的糖蛋白，这些糖蛋白又是由Ⅱb/Ⅲa结合构成的，存在巨核细胞与血小板中，其中本研究中进行测量的GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ、GPⅣ数量最多，对血小板正常运转必不可少的成分，而且GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ最常见[12]。

有资料显示患者体内辅助性T细胞与抗原递呈细胞对自身抗体（大部分为抗血小板抗体）进行调节，其介质产生的免疫破坏在患者血小板减少发病机制中有重要作用，由于血小板对人体内止血有重要作用，而血小板膜糖蛋白对血小板功能有重要影响，是血小板自身抗体被自身或其他细胞识别的靶抗原，其中GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ是导致血小板减少的常见抗血小板抗体，可以使血小板黏附聚集释放功能异常出现临床出血，在膜糖蛋白受损后由于血小板活化，将多种细胞因子释放增强血管通透性，加重出血与血管炎[13]，在与膜糖蛋白结合过程中造成血小板受损，血小板生成减少，被致敏后对巨噬系统进行影响，造成血小板生成出现障碍，此外还经细胞毒T细胞对血小板进行溶解，这表明细胞免疫与体液免疫在血小板减少中发挥共同作用。本研究中研究组的GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ抗体较对照组显著增多（P<0.05），这两种抗体之间以及对血小板减少在临床上有关联性，而且对患者病情发展与转归有重要影响。相比较而言GPⅠa/Ⅱa与GPⅣ检测率较小，笔者对其可能导致血小板较少的作用机制尚无充分认识，有待于进一步研究探讨。综上所述，抗血小板抗体对系统性红斑狼疮血小板减少患者病情变化有显著影响，临床相关性显著，对患者转归有重要意义。

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