参芎明胶微球含量测定方法的建立*

王曦 于书仪 刘旭红

中药丹参和川芎具有增强免疫作用[1]，临床应用广泛。明胶微球是明胶的一种衍生物，作为药物载体[2]，能够明显降低药物崩解速度，延长体内的存留时间，增加药物疗效[3]。制备微球的方法很多，有乳化-化学交联法，挥散有机溶剂法，照射聚合法，加热固化法等，本文采用明胶做基质，采取乳化-化学交联法制备参芎明胶微球[4]。

1 材料与仪器

1.1 材料 丹参素钠标准品（中国药品生物制品检定所）；盐酸川芎嗪标准品（中国药品生物制品检定所，）；

1.2 主要仪器 JUV757CRT型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）

2 方法和结果

2.1 检测波长的选择 精密称取丹参素钠对照品、盐酸川芎嗪对照品各20.0 mg，用60%乙醇溶液溶解并稀释适当倍数，在200～500 nm波长范围内扫描，最大吸收波长分别为280 nm、290 nm。按照处方量制成的空白微球，用60%乙醇溶液稀释适当浓度，在200～500 nm扫描，实验表明在同等条件下空白辅料对丹参、川芎嗪的测定没有干扰，见图1、图2。

2.2 标准曲线的建立 精密称取丹参素钠对照品2.0 mg（相当于丹参素标准品1.4 mg），用蒸馏水定容至10 ml容量瓶中，浓度（以丹参素计）为1.4 mg/mL。然后分别稀释至浓度为0.70 mg/ml，0.0350 mg/mL，0.1750mg/ml，0.08750 mg/ml的标准溶液。以蒸馏水为空白，在280 nm处分别测定空白微球和参芎微球的吸光度。标准曲线为y=0.9965x+0.0195，r=0.9995，表明在8.750 μ g/ml～1.4 mg/mL线性关系良好。

图1 参芎明胶微球紫外扫描图谱

图2 空白明胶微球紫外扫描图谱

精密称取盐酸川芎嗪对照品20 mg，蒸馏水定容至20 ml容量瓶中，浓度为1 mg/ml，分别量取2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml稀释定容至20 ml容量瓶中，制成不同浓度的标准溶液。以蒸馏水为空白，在290 nm处分别测定空白微球和参芎微球的吸光度。标准曲线为y=4.0732x-0.0436，r=0.9995，表明在0.1～0.5 mg/ml线性关系良好。按标准曲线方程计算微球的包封率。求得参芎明胶微球的包封率为51.20%。

2.3 重现性试验 精密称取丹参素钠对照品2.0 mg（相当于丹参素标准品1.4 mg），用纯化水定容至10 ml容量瓶中，浓度（以丹参素计）为1.4 mg/ml。然后分别稀释至浓度为 0.70 mg/ml，0.0350 mg/ml，0.1750mg/ml，0.08750 mg/ml的标准溶液。以蒸馏水为空白，在280 nm测定吸收度，重复测定5次，试验结果见表1。

表1 丹参总酚酸重现性测定结果

精密称取盐酸川芎嗪对照品20 mg，用纯化水定容至20 ml容量瓶中，浓度为1 mg/ml，分别量取2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml稀释定容至20 ml容量瓶中，作为不同浓度的标准溶液。以蒸馏水为空白，在290 nm处测定盐酸川芎嗪的吸光度，重复测定5次，结果表明，该方法测定结果重现性良好。试验结果见表2。

表2 盐酸川芎嗪重现性测定结果

2.4 精密度试验 精确配制丹参素钠5种浓度的标准溶液，于1 d内分别测定5次，计算日内误差；同法每日测定1次连续测定5 d，计算日间误差，结果见表3、表4。丹参总酚酸日间精密度测定结果见表5。川芎嗪日间精密度测定结果见表6。

2.5 稳定性试验 取1.4 mg/ml的丹参素钠对照品溶液，分别于 0、2、4、6、8、12 h 测定吸收度，结果分别为 0.345、0.340、0.344、0.336、0.335、0.337，RSD为 1.33%。 取 1 mg/ml的盐酸川芎嗪对照品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h测定吸收度，结果分别为12.112、12.134、12.234、12.135、12.243、12.246，RSD为0.51%，结果表明，该方法测定结果稳定性良好。

2.6 回收率试验 分别准确称取126.6 mg的空白微球9份，和丹参素钠9份混合后置于烧杯中，加入40 ml蒸馏水，然后调节pH至3.5，分别加入0.2 g胃蛋白酶，将烧杯置于（37±1）℃的水溶液中先超声1 h，搅拌震荡3 h使微球完全水解。微孔滤膜过滤，，取续滤液定容至20 ml容量瓶中。

表3 丹参总酚酸日内精密度测定结果

表4 川芎嗪日内精密度测定结果

结果表明，该方法测定结果日内精密度良好。

表5 丹参总酚酸日间精密度测定结果

表6 川芎嗪日间精密度测定结果

结果表明，该方法测定结果日间精密度良好。在280 nm处测定吸收度，根据标准曲线方程计算，结果见表7。

分别准确称取126.6 mg的空白微球9份，和盐酸川芎嗪9份混合后置于烧杯中，加入40 ml蒸馏水，然后调节pH至3.5，再分别加入0.2 g胃蛋白酶，将烧杯置于（37±1）℃的水溶液中先超声1 h，搅拌震荡3 h使微球完全水解。微孔滤膜过滤，取续滤液定容至20 ml容量瓶中。在290 nm处测定吸收度，根据标准曲线方程计算，结果见表8。

表7 丹参素钠回收率测定结果

表8 盐酸川芎嗪回收率测定结果

丹参的平均回收率为98.55%，川芎平均回收率为98.58%，表明该方法回收率良好，辅料对丹参、川芎的含量测定不产生干扰。

2.7 含量测定方法 称参芎明胶微球126.6 mg，加入40 ml蒸馏水，再调节pH至3.5，各加入0.2 g胃蛋白酶，将烧杯置于（37±1）℃的水溶液中先超声1 h，再搅拌3 h使微球完全水解。微孔滤膜过滤，取续滤液定容至20 ml容量瓶中。以蒸馏水作为空白溶剂，分别在200～500 nm扫描参芎明胶微球的图谱测定吸收度，代入标准曲线，并计算微球的载药量和包封率。

3 结论

3.1 近年来，川芎临床应用研究广泛[5-6]，本研究建立了紫外分光光度法，该方法精密度良好，重现性良好，样品在12h内性质稳定。

3.2 标准曲线为y=0.9965x+0.0195，r=0.9995，表明在8.750 μ g/ml～1.4mg/ml线性关系良好。盐酸川芎嗪检测波长为290 nm，标准曲线为y=4.0732x-0.0436，r=0.9995，表明在0.1～0.5 mg/ml线性关系良好，辅料对检测无干扰。

[1]于莲，张传美，李爱臣，董宇，张喆，等.参芎明胶微球的制备工艺研究[J]. 时珍国医国药，2010，21(3)：667-668.

[2]Maria Angela Vandelli，Marcello Romagnoli，Aless-andra Monti，Manuela Gozzi， Paolo Guerra，Francesco Rivasi，Flavio Forni.Journal of Controlled Release 2004，96(1)：67-84.

[3]余丽丽，范涛，杨黎燕，邓文婷，等.明胶微球载药及其体外释放性能研究[J]化工科技，2012，20(6)：11-14.

[4]陆彬.药剂学[M].北京：中国医药科技出版社，2003：437.

[5]胡江平，罗方.参芎葡萄糖注射液治疗慢性肾小球肾炎的临床观察[J].中国医学创新，2012，9(16)：14-15.

[6]王华杰，刘新铭，王瑾晔，等.天然高分子药物微球载体材料的研究进展[J].高分子通报，2006，19(8)：1-9.