不同产地明党参HPLC指纹图谱分析

★刘荣 孔昭琰（江苏省盐城市妇幼保健院药事科 盐城 224002）

明党参Changium smyrnioides Wolff是我国特有的伞形科（Umbelliferae）明党参属（Changium）的单种属植物，现为江苏特产道地药材之一，具有“补气生津，润肺化痰，平肝和胃，消肿解毒”之功效[1]。

1 仪器和材料

1.1 仪器与试剂

Waters515型高效液相色谱仪（德国Waters公司），包括二元泵、在线脱气机、进样器、UV检测器（2487）；高速离心机（TGl-16C，Anke）。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯[2，3]。中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版1.0版（国家药典委员会）。

1.2 药材来源

明党参药材是经盐城市药品检验所林玉莲主任中药师鉴定确认为伞形科植物明党参Changium smyrnioides Wolff的干燥根，粉碎过20目筛，备用（见表1）。

表1 药材产地及编号

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相及梯度洗脱条件的选择

比较了甲醇-水、乙腈-水系统，发现乙腈-水系统分离效果更好，且柱压较甲醇-水系统低，因此，最后确定用乙腈-水溶液作为流动相。

2.1.2 检测波长的选择

取明党参粗粉5g，按“2.2”项下的制备方法制备供试品液，在205-320nm之间每隔5nm选取一个检测波长，测定样品，记录色谱图。经比较发现明党参醇提物在254nm处得到的色谱峰信息最多，且各峰分离良好，确定选取254nm作为明党参醇提物的检测波长。

2.1.3 提取溶媒的选择

选用水，50%乙醇，70%乙醇，90%乙醇这几种溶媒按“2.3.5”项下的制备方法制备供试品液，在相同条件下进样，记录色谱图。结果表明水和50%乙醇提取的供试液信息量少，70%乙醇和90%乙醇提取供试液的信息量较丰富但无太大差别，综合考虑，确定选取70%乙醇作为提取溶媒。

2.1.4 色谱条件

色谱柱为KromasilC18分析柱（5μm，4.6mm×250mm）；检测波长：254nm；体积流量：1.0mL/分；柱温：25℃；流动相：A相为水溶液，B相为乙腈，线性梯度洗脱，0-10分钟，保持A-B（94:6），10-25分钟线性至A-B（64:36），25-54分钟线性至A-B（35:65），54-66分钟保持A-B（35:65），66-70分钟线性至 A-B（15:85），70-75分钟线性至A-B（94:6）。

2.2 供试品溶液的制备

取供试药材粗粉5g，加70%乙醇50mL，回流提取1小时，提取液以4800r/分，离心20分钟，转移至50mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，摇匀，12 000r/分，离心20分钟，即得。

2.3 数据处理方法

使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版（国家药典委员会）进行数据处理，将5～10号图谱进行综合比较生成对照模式色谱图，并计算每样品色谱图与对照模式色谱图的相似度，本实验采用相关系数（平均数）进行评价。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验

取同一批样品，制备供试品溶液，连续进样8次，检测指纹图谱，以“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”评价，结果相似度都在0.98以上，RSD为0.20%，表明仪器的精密度良好。

2.4.2 稳定性试验

取同一批样品，制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12 小时进样，检测指纹图谱，以“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”评价，结果相似度都在0.98以上，RSD为0.20%，表明供试品溶液的稳定性良好。

2.4.3 重现性试验

取同一批供试品5份，分别精密称定，制备供试品溶液，分别进样，检测指纹图谱，以“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”评价，结果相似度都在0.98以上，RSD为0.50%，表明样品的重现性良好。

2.5 样品分析

精密吸取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，采集0～70分钟的图谱,以“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行数据处理，结果见表2,色谱图见图1。

表2 不同产地明党参相似度

图1 不同产地明党参指纹图谱

3 讨论

本实验比较了不同提取方法如冷浸提取、索氏提取、回流提取、超声提取等不同提取方法的提取效果，以70%乙醇回流提取1h的总体效果为佳，采用该方法对主要成分的提取率高，所得图谱峰较多且分离良好。

对测定波长进行考察，选择代表性波长205，210，230，240，254、260、280，320nm进行检测，结果显示，在254nm处色谱图信号丰富，各色谱峰分布比较均匀，且明党参中各成分在此波长处吸收良好，分离度较好，所以采用254nm为检测波长。

明党参样品的共有峰为10个，这些峰构成了10个产地明党参药材的HPLC色谱指纹图谱特征峰。

不同产地明党参药材样品的指纹图谱整体面貌基本一致，反映了明党参药材的同源性及其群体化学组分的相似性，揭示出明党参指纹图谱具有自身化学条码特征，是其内在化学成分种类的反映，但同时也反映出其共有成分的含量存在较大差异这说明，从表2中可以看出不同产地来源的明党参药材HPLC峰的相似度不同，表明其内在质量与产地因素密切相关。因此，采用HPLC指纹图谱的质量控制模式来控制质量，对保证其临床疗效的稳定具有重要意义。

本文对明党参样品进行了指纹图谱分析，实验结果反映了明党参药材的化学组成及其相对比例，既可用于定性鉴别，也可用于定量分析，并且对于明党参的栽培、生产加工、贮藏运输、临床使用等各个环节的全面质量监控提供了可靠的依据。

[1]国家药典委员会.中国药典（第一部）[M].北京：中国医药科技出版，2010：195-196.

[2]段志富，陈勇，陈建伟，等.明党参药材水溶性活性成分的研究[J].天然产物研究与开发，2010，22，（2）：232-234，247

[3]任冬春，钱士辉，杨念云，等.明党参化学成分研究[J].中药材2008，31（1）：47-49.