乳腺癌中C-erbB-2的表达及其与Ki-67的关系

翟雨佳 闫闪闪

人表皮生长因子2(C-erbB-2/HER-2/neu)是公认的乳腺癌标记物，也是指导临床使用赫赛汀的惟一指标，Ki-67是一种在增殖细胞中表达的核抗原，是肿瘤增殖活性最重要的检测指标［1，2］。本文用免疫组化(immunohistochemistry，IHC) 法检测95例患者C-erbB-2和Ki-67蛋白的表达情况，探讨乳腺癌中两种蛋白表达的相关性及临床意义。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集我院2007年11月至2011年临床病理资料完整的乳腺癌病例95例，患者均为女性;年龄20～88岁，平均年龄53．1岁，中位年龄54岁。术前未行任何辅助治疗(化疗、内分泌治疗、放疗)，其中浸润性小叶癌4例，黏液癌7例，浸润性导管癌84例。

1．2 试剂 鼠抗人C-erbB-2单克隆抗体(即用型)、鼠抗人Ki-67单克隆抗体(即用型)及免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥公司。

1．3 免疫组化

1．3．1 操作步骤:采用EnVision法检测C-erbB-2，10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片(厚度4 μm)，贴于涂有多聚赖氨酸的玻片上，常规脱蜡至水，0．3%过氧化氢甲醇溶液灭活内源性过氧化物酶，高温高压修复抗原，其余步骤按试剂盒说明操作，用已知阳性切片作阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。

1．3．2 结果判读:C-erbB-2蛋白的表达定位在细胞膜，无着色为(－)，任何比例的浸润癌细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色为(+)，＞10%的浸润癌细胞呈现弱至中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄着色或≤30%的浸润癌细胞呈现强且完整的细胞膜棕褐着色为(++)，＞30%的浸润癌细胞呈现强的完整的细胞膜棕褐着色为(+++)［1］;Ki-67阳性为胞核着色，≤5%者为(－);阳性细胞数6% ～25%者为(+);26% ～50%者为(++);＞50%者为(+++)。

1．4 随访调查 对95例乳腺癌患者进行术后随访调查，记录其手术日期、当前身体状况或死亡日期。

1．5 统计学分析 应用SPSS 17．0统计软件，C-erbB-2和Ki-67与临床病理相关因素相关性的比较采用χ2检验，生存曲线用Log-rank检验，生存分析用COX比例风险回归模型，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达 C-erbB-2蛋白的表达(－)的35例，(+)的32例，(++)11例，(+++)的17例。见表1，图1～3。

2．2 Ki-67在乳腺癌组织中的表达 Ki-67蛋白表达(－)的12例，(+)的20例，(++)的42例，(+++)的21例。见表1、图4 ～6。

2．3 C-erbB-2、Ki67蛋白表达与临床病理因素关系 C-erbB-2和Ki-67与肿瘤大小及淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0．05)，而与年龄、病理分级和组织学分类差异无统计学意义(P ＞0．05)。见表1。

表1 癌组织中C-erbB-2和Ki-67蛋白表达与临床病理因素关系 n=95，例

图1 C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中+表达(免疫组化×200)

图2 C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中++表达(免疫组化×200)

图3 C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中+++表达(免疫组化×400)

2．4 C-erbB-2和Ki-67蛋白表达的相关性 C-erbB－2蛋白表达(－)的Ki-67(+)8例，(++)的20例，(+++)的为4例;C-erbB-2蛋白表达(+)的 Ki-67(+)7例，(++)的11例，(+++)的为9例;C-erbB-2蛋白表达(++)的 Ki-67(+)1例，(++)的4例，(+++)的为4例;C-erbB-2蛋白表达(+++)的Ki-67(+)4例，(++)的7例，(+++)的为4例。2组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。见表2。

表2 乳腺癌组织中C-erbB-2和Ki-67蛋白关系的表达 例

图4 Ki-67在乳腺癌组织中+表达(免疫组化×400)

图5 Ki-67在乳腺癌组织中++表达(免疫组化×200)

图6 Ki-67在乳腺癌组织中+++表达(免疫组化×400)

2．5 随访结果 95例随访结果:生存时间中位数29(5～59)个月;生存 78例，死亡或失访 17例。用 Log-rank检验分析C-erbB-2和Ki-67蛋白表达的生存曲线表明:阴性者生存曲线高，5年无瘤生存率明显高于阳性患者者(P＜0．05)。通过Cox比例风险回归模型分析，结果显示在临床相关指标中淋巴结转移与否和Ki-67、C-erbB-2蛋白是影响无瘤生存时间的危险因素。见表3。

表3 Cox回归模型筛选的无瘤生存时间危险因素及参数估计

3 讨论

人表皮生长因子2(human epidermal growth factor re-ceptor，HER-2/neu)是定位于人染色体17q12-21．3的癌基因，其蛋白(C-erbB-2)主要定位于细胞膜，是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞膜受体，主要参与细胞生长的调控，促进肿瘤增殖及分化，与肿瘤的发生发展密切相关［2］。本实验的95例中有28例发生了C-erbB-2的过表达(29．5%)，这与之前文献报道的(20% ～30%)［3］相一致，进一步证明C-erbB-2的表达在乳腺癌发生发展中的作用。目前，国内外很多学者对乳腺癌组织中C-erbB-2的表达与临床病理因素的相关性进行了研究，结果不尽相同［4］。本实验发现在诸多临床相关病理因素中，C-erbB-2与肿瘤大小和是否有淋巴结转移有关(P＜0．05)。理论认为C-erbB-2参与细胞增殖及凋亡基因的调控，可以诱导细胞周蛋白D1表达增强，促进G1/S期进程，并且上调人端粒末端转移酶逆转录酶(hTERT)，导致细胞端粒末端转移酶异常活化，使细胞转化并发生单克隆增生，形成肿瘤;还可通过Ras/MAPK途径激活Smad7的启动子使其高表达，干扰细胞的凋亡途径使细胞永久增殖［5，6］。本实验肿瘤相对大者，Cerb-B-2蛋白的高表达比率高，进一步证实了C-erbB-2在细胞增殖和逃避凋亡中的作用，但这一结果与Azizun等［6］的研究结论存在差异。本实验结果中C-erbB-2与淋巴结的关系我们考虑可能是C-erbB-2能够通过激活血管内皮生长因子(VEGF)启动子增加VEGF在mRNA和蛋白水平的表达，而VEGF参与血管的生成，这在肿瘤的淋巴结转移过程中起了非常重要的作用，但这仅仅是从单一方面解释了这一结果的可能性，如果阐述详尽准确的发生机制还需要更深入的研究。同时对本实验预后数据的生存分析表明:C-erbB-2阳性表达的患者无瘤生存率低于阴性患者，即C-erbB-2过表达的患者无瘤生存期短，预后相对较差。同时COX比例风险回归模型显示:淋巴结转移与否及C-erbB-2蛋白是影响患者无瘤生存时间的危险因素(P＜0．05)。那么综合实验范围内各种因素，我们可以得出结论:C-erbB-2及淋巴结转移可以做为判断患者预后的重要指标。

Ki-67是反映细胞增殖指数的指标，由Gerdes等［7］于1991年作为非组蛋白的核蛋白鉴定出来，抗原表达在细胞核，在静息细胞缺乏而肿瘤增殖细胞的各期均有表达［8］，是检测肿瘤细胞增殖活性最为可靠的指标。本实验中83例Ki-67有不同程度的增殖，增殖指数同患者肿瘤大小及是否有淋巴结转移有关，肿瘤大者和有淋巴结转移的患者，其Ki-67增殖指数高，而在不同的病理分级及组织学分类中其增殖表达没有规律性，统计学显示无差异，这同李宝江等［9，10］研究结果相同。对患者预后的生存分析及无瘤生存时间的危险因素统计结果显示:Ki-67是影响患者无瘤生存时间的危险因素，其增殖指数高患者的生存时间短。同样这一结果同C-erbB-2的表达结果呈正相关，即C-erbB-2表达越强，Ki-67增殖指数越高，且患者的预后差，术后生存时间短，这同Trihia等［11］研究结果一致。

1《乳腺癌HER-2检测指南2009版》编写组．乳腺癌HER-2检测指南(2009 版)．中华病理学杂志，2009，38:836-840．

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