HPLC法测定中药炮制辅料醋中酸性成分的含量*

★ 龚飞鹏 王晓崴 龚千锋*** 钟凌云 易炳学 李啸 陈泣

(1.江西省人民医院 南昌 330006;2.江西中医学院 南昌 330004;3.南昌大学 南昌 330004)

HPLC法测定中药炮制辅料醋中酸性成分的含量*

★ 龚飞鹏1**王晓崴2龚千锋2***钟凌云2易炳学2李啸3陈泣2

(1.江西省人民医院 南昌 330006;2.江西中医学院 南昌 330004;3.南昌大学 南昌 330004)

目的：对炮制辅料醋中总酸和乳酸含量进行测定，建立乳酸含量的测定方法。方法：采用酸碱滴定法测定15种醋的总酸的含量，采用树脂基高效液相色谱柱对15种醋的乳酸含量进行HPLC色谱法测定。结果：测定15种醋中的总酸含量范围是35.60-55.58mg/mL，乳酸的含量范围是2.48-23.40mg/mL。其中“恒顺镇江香醋”的总酸含量最高，“山西陈世家老陈醋(三年酿)”的乳酸含量最高。结论：较以往的测乳酸前需将乳酸前处理相比较，本实验的树脂基高效液相色谱柱测定的乳酸含量的方法，重复性好，方便操作，可以作为测定乳酸含量的方法；也为优选炮制辅料醋提供了一定的参考依据。

总酸；乳酸；醋；离子交换；含量测定；评价

醋,味酸苦、微温，具有收敛、解毒、行水、散瘀、止痛等作用。醋的种类也有很多，陈醋、香醋、白醋等等。食醋有开胃、养肝、强筋、暖骨、醒酒、消食、下气、辟邪、解鱼蟹鳞等保健功效[1]。现代食醋中有抗菌杀菌作用[2-3],抗衰老作用[4],防癌作用[5]等作用。陈嘉谟在《本草蒙筌》中归纳为“醋制注肝经且资住痛”。药物经醋制后具有收敛，散瘀止痛的作用。醋制的目的是引药入肝，增强活血止痛；降低毒性，缓和药性；矫臭矫味；利于粉碎和溶出药效成分等等。如醋制五灵脂，乳香，没药等，减少了不良气味，且能增强活血散瘀的作用[6]。醋中酸性成分主要是乙酸，还含有乳酸等其他酸性成分。乙酸和乳酸的测定可以为市场上销售的食用醋的质量标准提供一定的参考。在以往的研究中测定乳酸时需要将食醋进行前期处理，较为繁琐。本实验建立了测定乳酸的树脂基高效液相色谱柱的含量测定方法，该法重复性良好，便于操作，可以做为检测乳酸含量的方法。该实验也为选用醋制法炮制药物的辅料醋提供一定的参考依据。

1 材料

1.1 仪器

μLtimate3000高效液相色谱仪(美国戴安),PAD检测器,μLtimate3000自动进样器,μLtimate3000柱温箱；SZ-93A自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器有限公司)。PHS-25型数显PH检测仪(上海雷磁仪器厂)

1.2 试药

乳酸对照品(上海阿拉丁试剂有限公司,纯度≥98%,批号 J1208026)。甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。样品见表 1。

表1 样品来源及批号

2 方法与结果

2.1 不同醋样中总酸(以乙酸计)的含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 称取5g冰醋酸，精密称定，用水定容至100mL，得50.12mg/mL乙酸溶液，做为对照品溶液[7]。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密吸取5mL供试醋样，用水定容至100mL，做为供试品溶液。

2.1.3 测定方法 精密吸取供试品溶液20mL，置200mL锥形瓶中，加水50mL，用NaOH滴定液(0.1089mol/L)进行滴定，记录滴定液消耗体积，每消耗1mLNaOH滴定液相当于6.539mg的乙酸。

2.1.4 精密度试验 吸取供试品溶液，分别滴定5次，测总酸含量，测得的RSD值是1.4%，说明该方法精密度良好。

2.1.5 稳定性试验 吸取供试品溶液，分别在0,2,4,6,8,10，12 h用酸碱滴定法测得总算含量，测得的RSD值是2.1%，表明供试品在12h内稳定性良好。

2.1.6 重复性试验 取5份同一醋样，分别制成供试品溶液测定总酸含量。测得的总酸的平均含量是55.47mg/mL，RSD值为2.4%，表明方法重现性良好。

2.1.7 加样回收率试验 取醋样2.5mL，加入对照品溶液2.5mL,制成供试品溶液，测定总酸含量，平行5份实验，测得平均回收率为97.51，RSD=2.6%.

2.1.8 样品测定结果 见表2。

表2 不同醋样中总酸(以乙酸计)的含量测定结果

2.2 不同醋样中乳酸的含量测定

2.2.1 色谱条件 BIO-RAD柱，进样量：20μL；流动相：5mmol/L硫酸；流速：0.5mL/min;柱温：40℃；紫外检测器检测波长：215nm。图谱见图1-3。

2.2.2 对照品溶液制备 精密量取乳酸对照品，用超纯水依次配成5,2.5,1,0.5,0.25g/L溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 将15种食用醋样品用0.22μL的微孔滤膜过滤，即得。

2.2.4 线性范围考察 以乳酸的含量为横坐标，乳酸的峰面积为纵坐标，得到的线性回归方程是Y=1442.3X+215.9(r=0.9993)。

图1 乳酸标准品HPLC图

图2 金山寺镇江香醋的HPLC的指纹图谱

图3 恒顺白醋(无乳酸)HPLC的指纹图谱

2.2.5 精密度试验 吸取样品溶液注入液相色谱仪中，连续进样5次，测得乳酸的峰面积的RSD值1.0%，说明精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取样品溶液，分别在0,2,4,6,8,10,12h进样，测定的RSD值为0.6%，说明乳酸的含量在12h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验 取样品溶液5份，分别进样，测得食醋中乳酸的含量是19.43,19.22,19.76,19.03,20.14mg/mL，平均含量是19.516，RSD值为2.25%。

2.2.8 加样回收率试验 取已知含量的样品醋液，加入乳酸对照品溶液，平均实验5次，测定其中乳酸含量，计算平均回收率为97.3%，RSD为1.4%。

2.2.9 样品测定结果 见表3。

表3 不同醋样中乳酸的含量测定结果

3 讨论

按生产过程来分，食醋可以分为酿造醋、合成醋、再造醋三大类。酿造醋是用粮食等为原料,经发酵而成。合成醋是用化学方法合成的醋酸配制而成。再造醋是以酿造醋为基料,经进一步加工制成。[8]

前人对醋的运用给后人留下的十分宝贵的用药经验，有很多学者也在不断的整理研究食醋药用的材料[9-10]。毛氏等[11]首次建立了醋的药用质量标准。做为炮制常用辅料的醋，味酸为肝脏所喜，药物经过醋制后能引药入肝经，增强活血止痛作用。醋中总酸除了含有乳酸，还含有其他的酸性成分。本实验收集的15种醋样中，除了白醋没有检测到乳酸外，其他的陈醋和香醋都已经检测到乳酸。

本实验采用离子交换树脂柱对乳酸进行的HPLC的检测，建立了HPLC的方法，此方法重复性好，可以作为检测乳酸含量的方法。同时，对不同种类的食用醋的总酸和乳酸含量的测定也为研究醋的炮制品种提供了一定的依据。

[1]萧凤歧. 酿造醋有益健康[J]. 中国酿造, 1989, 7-11.

[2]黄仲华. 论食醋与健康[J]. 中国调味品, 1998,(3)：2- 6.

[3]Entani - Etsuzo , Asai - Mito. Amtibacterial actionof vinegar against food- borne pathogenic bacteria including Escherirchia coli O157: H7[J].Journal of Food protection, 1998, 61(8)：953- 959.

[4]Shoko NISHIDAI , Yoshimasa NAKAMURA et al. Kurose, a Traditional Vinegar Produced from Unpolished Rice, Supresses Lipid Peroxidation in vitro and in Mouse Skin[J]. Biosci. Biotechnol. Biochem. ,2000, 64( 9)：1 909-1 924.

[5]Kondo S, Tayama K et al .Antihypertensive effects of acetic acid and vinegar on spontaneously hypertensive rats[J]. Biosci Biotechnol Biochem, 2001, 65( 12) ：2 690- 2 694.

[6]叶定江，原思通.中药炮制学辞典[M].上海:上海科学出版社,2005：108.

[7]陈琳,吴 皓,王媚,等.中药炮制辅料醋中总酸和乳酸的含量测定[J].中国中医药信息杂志,2010,17(9)：52-54.

[8]毛淑杰,李先端,马志静,等.中药炮制辅料的规范化示范研究Ⅱ[J].中国中医药信息杂志,2005,12(8)：48.

[9]李先端，顾雪竹，毛淑杰.醋的历史沿革及其保健功能[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(18)：295-297.

[10]程立平,顾雪竹,毛淑杰.不同类型醋对小鼠的急性毒性及炮制延胡索镇痛作用比较[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(2)：71-72.

[11]毛淑杰,李先端,顾雪竹,等.中药炮制辅料-醋的规范化示范性研究[J].中国中药杂志,2006,31(22)：1 918.

ToExploreAcidicComponent'sContentinAdjuvantVinegarBasedontheHPLCMethod

GONGFei-peng1,WANGXiao-wei2,GONGQian-feng2*,ZHONGLing-yun2,YIBing-xue2,LIXiao3,CHENQi2

1.TheJiangxiProvincialPeople'sHospital,Jiangxi,Nanchang,330006,China；2.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jiangxi,Nanchang,330004,China； 3.NanchangUniversity,Jiangxi,Nanchang,330004,China)

Objective: To determine the content of total acid and lactic acid, and to establish a method for the determination of lactic acid. Methods:By acid-base titration to determine total acid's content of 15 kinds of vinegar. With resin-based HPLC columns , to determine lactic acid's content of 15 kinds of vinegar.ResμLts:The total acid content were ranged from 35.60 mg/mL to 55.58 mg/mL. The lactic acid content were ranged from 2.48 mg/mL to 23.40 mg/mL. The aromatic vinegar made in Jiangsu Zhenjiang has the highest content of total acid, the mature vinegar made in Shanxi (fermented for three years) has the highest content of lactic acid. Conclusion:The method by resin-based HPLC columns is to determination the content of lactic acid,and it is reproducible.This method can be used to determination the content of lactic acid.And it provides some reference for preferred adjuvant vinegar.

Total Acid ;Lactic Acid;Vinegar;Lon Exchange;Content Determination;Evaluation

国家中医药行业专项“中药饮片调剂规范化研究”(项目编号：201007011)。

**作者简介:龚飞鹏，主治医师，Tel:13367003628,E-mail:lenny-gong@163.com。

***通讯作者:龚千锋，教授，博士研究生导师，Tel:0791-87118852,E-mail:gongqf2002@163.com。

R 283.2

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2013-08-14)