SchB-SLN中五味子乙素含量的方法学研究

张秀荣,孙德一,崔佰吉

(吉林医药学院药学院,吉林 吉林 132013)

·论 著·

SchB-SLN中五味子乙素含量的方法学研究

张秀荣,孙德一,崔佰吉

(吉林医药学院药学院,吉林 吉林 132013)

目的进行五味子乙素固体脂质纳米粒(SchB-SLN)中五味子乙素的含量测定的方法学研究。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent TC-2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温40 ℃，流速0.8 mL/min。流动相为甲醇-水(85∶15)，检测波长为220 nm。结果五味子乙素的线性范围分别为0.005～0.4 μg(r=0.999 7)；平均加样回收率(n=9)为100.89%。结论本方法简便易行，结果准确可靠，适用于本制剂中五味子乙素的含量测定。

五味子乙素；固体脂质纳米粒；高效液相色谱法

五味子固体脂质纳米粒(SchB-SLN)是以单硬脂酸甘油酯为脂质材料，卵磷脂和Pluronic F-68为乳化剂，采用超声法制备的新型纳米给药系统，可以改善五味子乙素在体内释放行为，从而提高五味子乙素的生物利用度。本研究采用HPLC色谱法对SchB-SLN中五味子乙素进行含量测定，并进行相应的方法学研究，经实验表明本方法操作简便、专属性强、重现性好，可作为该制剂效标物质含量测定的方法，为制定其质量标准提供理论依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20A系列高效液相色谱仪；日本岛津UA1800紫外分光光度仪；IKA-RCT磁力加热搅拌器；塞多利斯CPA2250电子天平；MILLIPORE(Synergy185)超纯水制备仪；KQ-250DE型数控超声波清洗器。甲醇为色谱纯，水为超纯化水，其他试剂为分析纯；对照品五味子乙素(110765-200609)购自中国药品生物制品检定所；SchB-SLN(批号：110301，110302，110303)为本实验室自制。

2 方法与结果

2.1检测波长的选择

称取SchB-SLN适量，加甲醇适量，超声20 min，放冷至室温，制备每1 mL中约含五味子乙素0.1 mg的溶液，取溶液置高速离心机中，12 000 r/min，离心10 min，取上清液，以甲醇溶液为空白，在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描；同时按照相同的方法进行空白固体脂质纳米粒的光谱扫描，扫描结果可见五味子乙素在220 nm处有最大吸收，且所有辅料在该波长处的紫外吸收对测定结果无干扰，故选220 nm为检测波长。

2.2对照品溶液的制备

精密称取五味子乙素对照品适量，加甲醇制备成每1 mL含有五味子乙素0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

称取SchB-SLN适量，加甲醇适量，称定重量，超声20 min，放冷至室温，称定重量，并补足减失重量，制备成每1 mL中约含五味子乙素0.01 mg的溶液，取1 mL溶液置高速离心机中，12 000 r/min，离心30 min，取上清液，即得。

2.4阴性样品溶液

按本品的处方制备空白的固体脂质纳米粒。按“2.3”项下方法制备操作，即得。

2.5色谱条件

色谱柱：Agilent TC-2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(85∶15)；流速：0.8 mL/min；检测波长：220 nm；柱温：40 ℃；进样量：20 μL。五味子乙素与相邻杂峰分离度大于1.5；理论塔板数按五味子乙素计算大于4 000，对照品、样品、阴性样品色谱图见图1。由图可见，样品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性样品无相同保留时间的色谱峰，分离效果良好。

2.6线性关系考察

精密称取五味子乙素对照品5 mg，置25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，作为储备液。分别吸取上述储备液0.125、0.25、0.5、0.15、4、7、10 mL置100 mL的容量瓶中，释药介质定容至刻度。按“2.5”项条件进行HPLC测定，以峰面积(A)对质量浓度(p)进行线性回归，得回归方程

y=202 421x+58 604，r=0.999 7

表明五味子乙素在0.005～0.4 μg范围内线性关系良好。标准曲线见图2。

图 1 阴性样品溶液(A)、对照品溶液(B)和供试品溶液(C)的色谱图(220 nm)

图 2 标准曲线图

2.7精密度试验

取对照品溶液和供试品溶液连续进样6次。测得对照品和供试品溶液中溶液中五味子乙素峰面积的RSD分别为0.64%、0.83%，结果表明精密度良好。

2.8稳定性试验

取供试品溶液在0、2、4、6、8、12 h进行测定，供试品溶液中五味子乙素的RSD为1.4%。表明供试品中五味子乙素在12 h内稳定。

2.9重复性实验

取SchB-SLN，按“2.3”项下供试品溶液制备方法同时制备供试品溶液6份。以“2.5”项下色谱条件测定，按外标法计算含量，结果五味子乙素的含量RSD为1.07%，表明实验重复性良好。

2.10加样回收率试验

称取五味子乙素适量。用甲醇溶解，制备20 g/mL的SchB贮备液，分别精密量取贮备液4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL于10 mL容量瓶中，另精密量取1 mL空白纳米粒混悬液，用甲醇稀释至约8 mL，超声处理20 min，取出，放冷,并用甲醇定容，取1 mL 12 000 r/min离心30 min，取上清液按“2.5”项下方法进行测定，测定结果见表1。

2.11样品含量测定

分别精密吸取按照“2.2”项及“2.3”项方法制备的混合对照品溶液及供试品溶液各20 μL注入色谱仪，测定样品中五味子乙素的峰面积，采用外标法计算，结果见表2。

表 1 回收率测定结果表

表 2 样品五味子乙素测定结果(n=3)

3 讨 论

关于五味子乙素含量测定的报道较多，且主要以高效液相色谱法为主要测定方法，流动相主要以甲醇-水为主，洗脱方式主要以梯度洗脱为主[1-5]。本研究考察了“甲醇-水”和“乙腈-水”两个流动相系统。经过比较，2个流动相体系条件下，样品分离结果没有明显的差异，所以选择“甲醇-水”作为流动相；研究分别考察柱温25、30、40 ℃情况下色谱结果，研究表明，提高柱温能够明显提高各个色谱峰的分离度，选择40 ℃作为本研究的实验条件。本研究采用高效液相色谱法测定五味子固体脂质纳米粒中五味子乙素的含量，研究中选择不同的有机溶剂进行样品的制备工作，选择甲醇、乙醇作为溶媒进行选择，通过平行对比实验研究，最终选择甲醇作为样品制备的溶媒。

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[3] 秦建平,吴建雄,毕宇安,等.HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(2):77-80.

[4] 陈恩瑜,施夏蓉,洪可俊.RP-HPLC法同时测定补肾益脑胶囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量[J].海峡药学,2012,24(12):49-52.

[5] 唐秋竹,王艺纯,孟庆妍,等.HPLC法同时测定护肝片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量[J].中国药品标准,2012,13(4):258-261.

StudyonmethodologyfordeterminationoftheSchisandrinBinSchisandrinB-solidlipidnanoparticles

ZHANG Xiu-rong,SUN De-yi,CUI Bai-ji

(College of Pharmacy,Jilin Medical College,Jilin City,Jilin Province,132013，China)

ObjectiveTo develop a method for determination of Schisandrin B in Schisandrin B-solid lipid nanoparticles.MethodsHPLC was adopted for this study.The mobile phase was methanol-water(85∶15).The flow rate was 0.8 mL/min.The UV detection wavelength was 220 nm.ResultsThe linear ranges of Schisandrin B were 0.005～0.4 μg(r=0.999 7).The average recoveries (n=9) were 100.89%.ConclusionThe developed method is simple,accurate and suitable for determination of Schisandrin B in SchB-SLN.

Schisandrin B;solid lipid nanoparticles;HPLC

R284.1

A

2013-09-01)

1673-2995(2013)06-0422-03

张秀荣(1959-)，女(汉族)，教授，本科.