芹菜素对雄性小鼠肝脏SOD、GSH-Px、CAT活力影响

王传鹏 杨超 赵骏 刘彬荷 刘佳微 李芝兰

芹菜素对雄性小鼠肝脏SOD、GSH-Px、CAT活力影响

王传鹏 杨超 赵骏 刘彬荷 刘佳微 李芝兰

目的观察不同剂量、不同作用时间，芹菜素(AP)对雄性小鼠肝脏氧化还原酶活力的影响。方法将200只雄性小鼠按体重随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(AP 252 mg/kg bw)、中剂量组(AP 504 mg/kg bw)和高剂量组(AP 1008 mg/kg bw)4组，各组动物又随机分成5个时间组即：7 d组、14 d组、21 d组、28 d组、35 d组。小鼠给予0.01 ml/g bw 生理盐水和不同浓度的芹菜素灌胃，1次/d。分批处死小鼠，制备肝匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活力。结果SOD活力28 d高剂量组明显低于其他组(P<0.05)，35 d中剂量组SOD活力低于对照组及低剂量组(P<0.05)；GSH-Px活力28 d高剂量组较对照组及低剂量组低(P<0.05)；CAT活力变化不明显。结论AP对雄性小鼠肝脏SOD、GSH-Px活力具有一定抑制作用。

芹菜素；超氧化物歧化酶(SOD)；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)；过氧化氢酶(CAT)

芹菜素(apigenin，AP)是天然存在的一种黄酮类化合物，广泛存在于多种水果、蔬菜、豆类和茶叶中[1]，具有抗氧化等多方面的生物学活力[2]。有报道芹菜素具有广泛的抗氧化作用[3]；隋海霞[4]与Skiboh C F[5]等体外研究结果表明，大剂量摄入黄酮类化合物，会使其成为致突变剂、促氧化剂，产生氧自由基而产生毒副作用。因此对于芹菜素的抗氧化作用机制及有效剂量范围有必要进一步研究。本研究拟通过不同剂量芹菜素对成年雄性小鼠灌胃，在不同时间观察点检测肝脏组织SOD、GSH-Px、CAT活力，探讨芹菜素对肝脏氧化酶影响的剂量效应和时间效应，旨在为芹菜素功效的深入研究及开发利用提供科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料

1.1.1实验动物 成年健康SPF级昆明种雄性小鼠200只，动物合格证号编号为SCXK(甘)2011 -0001-0001067，饲养在甘肃中医学院中心实室的SPF级实验室内。

1.1.2芹菜素 芹菜素购于陕西惠科植物开发有限公司(生产批号，HK20110105)，经HPLC检测，芹菜素纯度为98 %，用生理盐水配制成所需浓度。

1.1.3主要试剂与仪器 试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(生产批号:20120326)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒(生产批号:20120323)，过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒。722型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，JA3003N 电子秤(上海精密科学仪器有限公司)，LD4-2 离心机(北京医用离心机厂)，DK-600 s 型三用恒温水浴箱(上海精宏实验设备有限公司)。

1.2方法

1.2.1实验分组 将200只雄性小鼠按体重随机分为对照组(生理盐水10 ml/kg bw)、低剂量组(AP 252 mg/kg bw)、中剂量组(AP 504 mg/kg bw)和高剂量组(AP 1008 mg/kg bw)4组，每组50只。小鼠每天给予生理盐水或不同浓度的芹菜素灌胃1次，连续7 d、14 d、21 d、28 d、35 d，分批处死动物。取出肝脏，称取0.2～0.4 g加入9倍体积的匀浆介质，研磨成匀浆，置于离心机内3000r/min离心10 min，取上清液，-4℃保存备用。

1.2.2肝脏抗氧化酶活力测定 黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力；DTNB直接法测定GSH-Px活力；可见光法测定CAT；以上检测均按试剂盒说明操作。

2 结果

对不同时间观察点小鼠SOD、GSH-Px、CAT测定结果，进行统计学检验，与同期对照相比较：7 d 低剂量和中剂量组SOD活力升高具有统计学意义，中剂量组GSH-Px活力的降低和高剂量组GSH-Px活力升高的差异具有显著性；21 d低、高剂量组GSH-Px活力的升高具有统计学意义；28 d高剂量组SOD、GSH-Px、CAT活力降低的差异具有显著性；35 d中剂量组SOD活力降低具有统计学意义。

对CAT、GSH-Px、SOD活力进行析因分析：SOD交互作用、时间效应有统计学意义，剂量效应无统计学意义；GSH-Px交互作用、时间效应有统计学意义，剂量效应无统计学意义；CAT交互作用、剂量效应无统计学意义，时间效应有统计学意义。

2.1芹菜素对SOD活力影响 经析因分析，SOD活力时间与剂量的交互效应有统计学意义(P=0.0063)。在同一时间点上观察剂量效应，SOD活力7 d、21 d各剂量组均高于对照组，14 d低、高剂量组均低于对照组，28 d高剂量组低于对照组及低、中剂量组，35 d中剂量组低于对照组、中剂量组与低剂量组差异亦具有统计学意义。

在同一剂量水平上观察时间效应，SOD活力高、中、低剂量组与对照组差值14 d时均较7 d时减小，21 d时各剂量组间差距最小，28 d高剂量组降低最明显，35 d时中剂量组降低更为突出。

2.2芹菜素对GSH-Px活力影响 经析因分析，GSH-Px活力时间与剂量的交互效应有统计学意义(P=0.0036)。

在同一时间点上观察剂量效应，GSH-Px活力21 d各剂量组均高于对照组，且低剂量组与对照组差异有统计学意义；28 d高剂量与对照组、低剂量组间差异具有统计学意义。

在同一剂量水平上观察时间效应，GSH-Px活力高、中、低剂量组在21 d时均明显增高，28 d时高剂量组的降低最为突出。

2.3芹菜素对CAT活力影响 经析因分析，时间和剂量间无交互效应(P=0.5979)，剂量效应无统计学意义(P=0.950)，存在时间效应(P=0.020)。

合并低、中、高剂量组为芹菜素组，观察芹菜素摄入与否对机体内CAT活力影响。7 d芹菜素组CAT活力高于对照组，差异有统计学意义(P=0.060)，其他时间点上，芹菜素处理组与对照组间的差距不大。

3 讨论

生物体内活力氧伤害的防御机制主要由抗氧化酶和非酶体系组成，抗氧化酶主要有SOD、GSH-Px等，它们在清除自由基、阻止生物大分子氧化损伤等方面起到了非常重要的作用[9]。其中SOD可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面有着重要意义[10]。本次实验结果，28 d高剂量组SOD活力明显低于中、低剂量组和对照组，35 d中剂量组SOD活力降低更为突出，提示本实验条件下504 mg/kg bw 和1008 mg/kg bw 的AP处理28 d后对小鼠SOD活力抑制明显，表现为亚急性作用。

GSH-Px主要的生物学作用是清除脂质过氧化物和H2O2，当SOD将自由基歧化为H2O2后，GSH-Px和其他酶可将其分解为水，完成体内活力氧的清除作用[11]。本次实验结果，GSH-Px活力高、中、低剂量组在21 d时均明显增高，28 d时高剂量组的降低最为突出，提示本实验条件下1008 mg/kg bw的AP处理28 d，对小鼠GSH-Px活力抑制明显，表现为亚急性作用。

文献显示，在SOD，GSH-Px，CAT 3种抗氧化酶中，CAT 活力的灵敏度最差[11]。本次研究中未发现芹菜素的剂量效应，不同剂量组合并后结显示，7 d时AP组CAT活力高于对照组且差异有统计学意义，随处理时间延长CAT活力与对照间的差距减小，提示本实验条件下AP处理7 d，小鼠CAT活力增加，可能与应激反应有关。

本研究结果支持AP对雄性小鼠肝脏SOD、GSH-Px活力具有一定抑制作用。

[1] 孙秀琴,李荣华,唐涛,等.芹菜素抗氧化作用研究进展.中国现代医生,2009,47(27):103-107.

[2] 隋海霞,徐海滨,荫士安.芹菜素的生物学作用.国外医学卫生学分册,2008,35(2):103-107.

[3] 严建刚,张名位,杨公明,等.芹菜提取物清除自由基及作用研究.食品科学,2004,25(8):39-42.

[4] 隋海霞,徐海滨,荫士安,等.大剂量芹菜素对大鼠抗氧化酶活力及DNA损伤影响的研究.国外医学:卫生学分册,2008,35(2):103-107.

[5] Skibola C F, Smith M T. Potential health impacts of excessive flavonoid intake. Free Radic Biol Med, 2000, 29(34):375-383.

[6] 胡良平,郭辰仪,等.用SAS软件实现析因设计定量资料的统计分析.药学服务与研究,2012, 12(4): 249-251.

[7] 万华,李晓松,苏茜,等.多元析因设计的方差分析及其SAS程序实现.现代预防医学,2010,37(5):804-806.

[8] 郭晋,胡良平,高辉,等.用 SAS 软件实现析因设计定量资料的统计分析.中国医药生物技术, 2010, 5(1): 804-806.

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EffectofApigeninonSOD,GSH-Px,CATActivitiesinMaleMiceLiver

WANGChuan-peng,YANGChao,ZHAOJun,etal.
ThePublicHealthSchoolofLanzhouUniversity,Lanzhou,Gansu730000

ObjectiveTo observe the effects of apigenin at different doses and different time on activities of oxido-reductases in male mice liver.Methods200 male mice were randomly divided into 4 groups according to body weight including: matched group(NS), low-dose group(AP 252 mg/kg bw), middle-dose group(AP 504 mg/kg bw)and high-dose group(AP 1008 mg/kg bw). Mice of each group were divided into 7 days, 14 days, 21 days, 28 days and 35 days group. Mice were given 0.01 ml/g bw of normal saline or different concentrations of apigenin at every day by gavage. All mice were killed at the different time observation sites. Liver homogenates were prepared, to measure the activities of superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxidase(GSH-Px)and catalase(CAT).ResultsThe activity of SOD of high-dose group on the 28th day was significantly lower than the other groups(P<0.05). On the 35th day, the activity of SOD of middle-dose group was significantly lower than matched-group and high-dose group. The activity of GSH-Px of high-dose group on 28th day was significantly lower than matched group and high-dose group(P<0.05). The activity of CAT did not change significantly.ConclusionApigenin has a certain inhibitory effect on the activity of SOD and GSH-Px in male mice liver.

Apigenin;Superoxide dismutase(SOD); Glutathione peroxidase(GSH-Px);Catalase(CAT)

兰州大学2012年“本科教学工程”国家级大学生创新创业训练计划项目(项目编号：201210730040)

730000 兰州大学公共卫生学院

李芝兰