半乳糖凝集素1和层粘连蛋白在新疆维吾尔族子宫颈癌中作用的相关性研究

刘迎嘉 杨波 张晨

新疆地区维吾尔族是宫颈癌的高发人群，初查患病率高达459/10万～590/10万，高于同一生活环境下的其他民族，且发病年龄早［1］，因此研究维吾尔族宫颈癌发病机制，以期早期阻断宫颈癌的发生是非常必要的。Galectin-1是半乳糖凝集素家族的一员，在细胞的黏附、增殖、凋亡、免疫及肿瘤发生、发展、迁移中发挥重要作用［2］。层粘连蛋白(Laminin，LN)是细胞外基质和基底膜的主要成分，对维持细胞外基质和基底膜的完整结构起着重要作用，大量的研究表明LN与恶性肿瘤的生长、浸润、转移及预后有关［3］。二者在维族宫颈癌中的相互作用机制鲜见报道。我们采用免疫组化方法检测Galectin-1，LN在维族宫颈癌中的表达，以探讨与维族宫颈癌发生发展的关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年1月至2011年12月在新疆医科大学五附院病理科存档的石蜡标本100例，患者均为维吾尔族，其中浸润性宫颈鳞癌40例，CINⅡ-Ⅲ20例，CINⅠ20例，慢性宫颈炎20例。所有病例术前均未行放化疗等特殊治疗。

1.2 试剂与方法 浓缩型鼠抗人单克隆Galectin-1抗体购自Novocasta生物公司(克隆号:25 c1)，浓缩型兔抗人多克隆抗体LN、VEGF均购自北京中杉金桥生物公司。

标本均经10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚度连续切片，其中1张做HE染色再次确诊。采用免疫组化S-P法。石蜡切片脱蜡、水化，Galectin-1和VEGF经抗原高压修复，LN经胃酶修复。滴加过氧化物酶阻断溶液，以阻断内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗后，滴加非免疫性动物血清。PBS冲洗后，滴加一抗，一抗浓度:Galectin-1、VEGF、LN均 1∶100，4℃过夜。滴加生物素标记的二抗，PBS冲洗后，加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，37℃孵育;DAB显色，用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判断 显微镜图像采集系统采集免疫组化染色切片图像，在相同条件下随机拍摄5个100倍视野，使用图像分析软件Image ProPlus5.1对免疫组化进行定量分析，以积分吸光度值作为分析指标，取其平均值。

1.4 统计学方法 采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，结果以均数±标准差表示，采用方差分析，统计分析前进行正态分布检验和方差齐性检验(经检验本组资料呈正态分布且方差齐)，相关分析采用pearson线性相关，α=﹤0.05。

2 结果

2.1 Galectin-1在慢性宫颈炎组、CIN组表达于宫颈组织细胞外基质的胞浆，在宫颈癌组阳性表达于癌细胞胞浆及癌细胞外基质，阳性细胞胞浆着棕黄色颗粒。宫颈癌组和炎症组比较有统计学意义(P＜0.05)。在慢性宫颈炎组、CIN组、宫颈癌组表达阳性率和阳性强度依次增强(P＜0.05)。见图1，表1。

2.2 LN主要表达于细胞外基质中，阳性细胞胞浆着棕黄色颗粒。宫颈癌组和炎症组比较有统计学意义(P＜0.05)。在慢性宫颈炎组织、CIN组、宫颈癌表达阳性率和阳性强度依次减弱(P＜0.05)。见表1。

2.3 宫颈癌组织中Galectin-1、LN的相关性 宫颈癌组织Galectin-1表达与LN表达呈负相关，r=0.482，P＜0.05。

表1 Galectin-1、LN在宫颈慢性炎症组、CIN组和宫颈癌组的表达(±s)

表1 Galectin-1、LN在宫颈慢性炎症组、CIN组和宫颈癌组的表达(±s)

注;r=0.482，P ＜0.05

分组 例数 Galectin-1 F值 P值 LN F值 P值20 51.23±21.36 ＜0.05 13472.±9381.27 CINⅠ 20 24357.12±9538.74 5.43 ＜0.05 8523.7±5432.炎症40 58964.46±1847.44 ＜0.05 1648.33±549.94 33 4.94 ＜0.05 CINⅡ-Ⅲ 20 37148.36±11359.41 ＜0.05 4936.4±2737.36宫颈癌

3 讨论

宫颈癌的发生发展是一个多因素、多阶段的复杂过程，在致癌过程中可能与维吾尔族妇女卫生条件差、早婚、多婚、早育、多育、遗传易感因素等有一定的关系，还可能与细胞的免疫逃逸、基底膜的破坏、血管新生和细胞粘附能力的改变等有关。

研究证明，Galectin-1在许多肿瘤中的表达水平上调，如神经胶质母细胞瘤、口腔鳞状细胞癌、胰腺导管腺癌、甲状腺癌、肝癌等，并与其侵袭能力及恶性程度密切相关［4-9］。

Kloog等发现Galectin-1通过与癌基因H-Ras相互作用，为其提供膜锚定位点，增强Ras介导的信号转导过程，从而促进细胞向肿瘤细胞表型转化［10］。Galectin-1可以增加卵巢癌细胞与细胞外基质间的粘附能力［11］。本实验结果为Galectin-1在癌组织和炎症组比较表达阳性率和阳性强度显著增强，结果有统计学意义;CIN组间表达阳性率和阳性强度亦增强，在宫颈慢性炎症、CIN、癌组织中表达呈阳性率和阳性强度依次增强的规律，这与上述文献报道结果一致。提示Galectin-1参与了维族宫颈癌的发生发展过程，在维族宫颈癌的发展中可能起着重要作用。

LN是基膜中大分子非胶原糖蛋白，它有促进细胞的黏着、铺展、有丝分裂、加速神经轴突生长及细胞移动，并诱导细胞分化，还与形态发生及肿瘤转移有关等多种生物学作用。LN促进甲状腺癌、前列腺癌细胞的增殖、分化，并作为侵袭抑制因素，在结肠腺瘤、卵巢癌及乳腺癌的进展中发挥作用［12］。本实验显示炎症组中LN阳性表达明显，宫颈癌组阳性表达减弱，两组表达相比有统计学意义。CINⅡ-Ⅲ组与CINⅠ组比较LN表达减弱，结果有统计学意义。LN在慢性宫颈炎组、CIN组、宫颈癌组中的阳性强度依次减弱，说明从正常宫颈组织→CIN→宫颈癌的转化过程中，LN发挥了重要作用。

研究发现由于同β-半乳糖苷的亲和性，Galectin-l可首先与糖复合物结合。在自然产生的糖复合物中，LN是被公认的Galectin-1的天然配体。本实验结果显示宫颈慢性炎症组、CIN组、宫颈癌组中Galectin-1与LN的表达呈负相关(r=0.482，P＜0.05)。提示二者在维族宫颈癌的发生发展中协同发挥作用，但具体机制有待于进一步研究。

综上所述，Galectin-l与LN均参与维族宫颈癌发生发展的过程，可作为判断维族宫颈癌发生发展的良好指标。但目前Galectin-l和LN与维族宫颈癌相互作用的研究几乎没有，其相关分子生物学机制尚未完全揭示，有待进一步研究，为其临床诊治提供新的靶点。

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