RE-HPLC法测定芩翘通窍胶囊中黄芩苷的含量

河北省邯郸市邯山区卫生监督所

杨俊捧 朱学梅△ 陈 征△ 丁 锤△△ 李国川△(邯郸056001)

芩翘通窍胶囊是由黄芩、辛夷、苍耳子、防风、白芷等中药组成，具有清热、散风、通窍的功效，用于风热犯肺，内郁化火，气血凝滞所至的伤风鼻塞，时轻时重，鼻痒气热，流涕黄稠，或鼻塞无歇，嗅觉迟钝;急慢性鼻炎、鼻窦炎见上述诸证者。［1］由石家庄市中医院制剂室制备供内部使用，其中对君药黄芩中黄芩苷的含量测定未做规定，本文采用RE-HPLC法测定芩翘通窍中黄芩苷的含量，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪 (日本岛津)，SPD-15C紫外检测器;色谱柱为Diamonsil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5 μm);KQ-500DV数控超声波清洗器;石英自动双重纯水蒸馏器 (1810-BC);赛多利斯电子天平 (CP225D);紫外可见分光光度计 (756MC);水浴锅 (TDA-8002);电子天平 (JA2103)。

1.2 试药 ⑴ 试剂:黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所，批号20100827);甲醇为色谱纯，水为去离子水，其它试剂为分析纯。⑵药材:芩翘通窍胶囊 (石家庄市中医院批次20110905、20110921、20111009)。

2 方法

2.1 色谱条 色谱柱为Diamonsil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5 μm);流动相为甲醇-水-磷酸 (50︰50︰0.2);流速为1.0 mL/min;检测波长为280 nm［2］;进样量为10 μL;柱温为室温。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品适量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，制得64 μg/mL的黄芩苷对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取芩翘通窍胶囊内容物精密称取0.2g，置50 mL锥形瓶中，加入70%乙醇［3］40 mL，超声处理 (功率100 W，频率50 Hz)50 min，取出，放冷，滤过，取续滤液用70%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备:取不含黄芩的芩翘通窍胶囊阴性制剂，按2.2.2项下方法要求制得黄芩苷的空白对照溶液。

2.3 专属性试验 按上述色谱条件，分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪进行测定，结果表明黄芩苷分离效果较好，阴性对照无干扰。

2.4 精密度试验 取同一对照品溶液进样量 (64 μg/mL)10 μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定各自峰面积并计算RSD值。其结果表现精密度良好。精密度试验结果是峰面积分别为 2 693 267、2 724 086、2 678 230、2 840 117、2 813 627、2 731 518，RSD值为2.648 1%。

2.5 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品配制20.16、40.32、80.64、120.96、161.28 μg/mL 不同浓度的黄芩苷对照品溶液。分别精密吸取上述黄芩苷不同浓度对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，分别按照色谱条件项下方法测定峰面积积分值，以进样浓度 (μg/mL)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。计算，得回归方程为Y=31 006.238 2x-21 140.201 2，r=0.999 2其结果表明黄芩苷20.16～161.28 μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 重复性试验 分别称取同一批号样品5份，按照供试品溶液的制备方法，制备5份供试液，按上述色谱条件，测定各自峰面积积分值并计算RSD值，其结果表明重复性良好。重复性试验结果是峰面积分别为2 160 911、2 188 373、2 177 941、2 186 604、2 215 913、2 193 058，RSD值为0.91%。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12 h，按上述色谱条件测定各时间段的峰面积积分值，计算RSD值，其结果表明稳定性良好。稳定性试验结果峰面积分别为19 397 009、1 915 524、1 929 499、1 943 547、1 929 312，RSD值为0.565 1%。

2.8 加样回收试验 取已测定含量的样品约0.1 g，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品 (1.120 00 mg)，按照供试品溶液的制备方法进行，进样测定，测定峰面积积分值，计算回收率及RSD值，其结果表明回收率良好。详见表1。

表1 加样回收试验

2.9 含量测定 取3批样品，每批样品取0.2 g，依法制备供试品溶液，检测3批芩翘通窍胶囊中黄芩苷的含量。详见表2。

表2 黄芩苷含量测定结果 (mg/粒)

3 讨论

通过紫外可见分光光度计，对黄芩苷对照品溶液进行波长扫描，发现最优波长为280 nm。在提取过程中对提取时间进行了考察，发现超声50 min提取已比较充分，方法简单，故采用此法。本实验方法具有专属性强、准确度高、方法简便、干扰小等优点，可作为芩翘通窍胶囊中黄芩苷的含量测定方法。

［1］裴香萍，张淑蓉.高效液相色谱法测定安肺胶囊中黄芩苷的含量［J］.世界中西医结合杂志，2010，5(1):40

［2］杨存爱.正交试验法优选清热明目颗粒的水提工艺 ［J］.河北中医药学报，2010，25(2):37-38

［3］中国药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) ［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.282