丽水地区儿童呼吸道病毒感染状况及特点的分析

裴立红，涂晓波，刘素霞，江丽莉，蓝叶彬

(丽水市中心医院，浙江 丽水 323000)

·基础与临床研究·

丽水地区儿童呼吸道病毒感染状况及特点的分析

裴立红，涂晓波，刘素霞，江丽莉，蓝叶彬

(丽水市中心医院，浙江 丽水 323000)

目的：了解丽水地区儿童呼吸道病毒感染状况及特点。方法采用直接免疫荧光法检测呼吸道诱导痰中脱落纤毛柱状上皮细胞中的流感病毒A型及B型(IFV A及IFV B)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)。结果对1838例呼吸道感染患者进行的多病原联合检测中，病毒阳性者601例，检出率32.7%(601/1838)。其中呼吸道合胞病毒528例、腺病毒23例、流感病毒A型28例、流感病毒B型9例、副流感病毒1型2例、副流感病毒2型1例、副流感病毒3型7例，混合感染3例。结论各病毒感染呈现出以1～3周岁组的儿童为高发人群的流行特点。了解丽水地区儿童呼吸道病毒感染状况及特点，对于减少不必要抗生素的使用，及时采用适当的隔离措施都有重要意义。

荧光免疫测定；呼吸道病毒； 病毒；呼吸道感染

Abstract：[Objective]To understand the situation and characteristics of children respirovirus infection in Lishui. [Method] Direct immunofluorescence (DIF) was used to detect Influenza Virus A and B (IFV?A and IFV?B ), Parainfluenza Virus 1,2,3 (PIV1,2,3), Respiratory Syncytial Virus (RSV), Adenovirus(ADV) in exfoliated ciliated columnar epithelial cell in induced sputum of Respiratory Tract. [Result]Among 1838 Respiratory Tract Infections cases accepted joint detection of multiple pathogens, there were 601 virus-positive cases and the detection rate was 32.7% (601/1838). There were 528 Respiratory Syncytial Virus (RSV) cases, 23 Adenovirus (ADV) cases, 28 Influenza Virus A cases, 9 Influenza Virus B cases, 2 Parainfluenza Virus 1 cases, 1 Parainfluenza Virus 2case, 7 Parainfluenza Virus 3 cases and 3 mixed infection cases. [Conclusion]Virus infection indicates the popular characteristics of children aged 1-3 for high-risk population. Understanding the situation and characteristic of children respirovirus infection in Lishui, reducing unnecessary use of antibiotics and adopting appropriate isolation measures timely all had important significance.

Keywords：immunofluorescence; respirovirus; virus; respiratory tract infections

呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道，引起呼吸道局部病变，或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起[1]。呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A型及B型、副流感病毒1、2、3型和腺病毒是下呼吸道感染的常见原因[2]，为了解本地区人群呼吸道病毒流行特点，了解病原学分布概况，以期为临床提供可靠信息，指导临床合理用药，本研究对2010年9月至2012年5月间我院诊治的1838例呼吸道感染患者进行了多病原联合检测，现结合其临床病例，分析总结如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

2010年9月至2012年5月收治的下呼吸道感染的患儿1838例，年龄8个月～11岁不等，其中男性750例，女性1088例。均来自丽水。

1.2 主要仪器与试剂

AXiOStar PLUS荧光显微镜、CH90-2台式低速离心机、XW-80A旋涡混合器、37℃恒温培养箱，chemicon呼吸道病毒诊断试剂盒。

1.3 标本收集和处理

由专职护士取呼吸道诱导痰(高渗盐水诱导痰取得的方法：10%氯化钠 20 ml 超声雾化吸入，指导患者把喷嘴含入口中，将口闭合，使气雾随着吸气缓慢吸入呼吸道，在吸入的同时应做深呼吸，使药液充分达到支气管和肺内。待感觉有痰时，深吸一口气，患者用力咳嗽以获得呼吸道或由空洞排出的痰液1～2ml置于无菌的标本收集管中送检。样本置于10～15ml离心管中，加入PBS (磷酸盐缓冲液)4～8ml，用旋涡混合器震荡3～5分钟后，300～500r/min离心10分钟，倒掉上清液，往离心管中的沉淀物再加入PBS 4～8ml震荡3～5分钟，300～500r/min离心10分钟，再次弃去上清液，沉淀物中加入适量PBS(磷酸盐缓冲液)。调整细胞浓度含纤毛柱状上皮细胞1.0×106/ml。

1.4 细胞片制备

微量吸管吸取上述纤毛柱状上皮细胞悬液25μl，点于预先准备好7孔玻片。每个痰标本点于该玻片的7个孔。置37℃恒温培养箱干燥后用4℃冷丙酮固定10分钟。

1.5 免疫荧光试剂染色

加25μl内含伊文斯蓝的荧光素标记的呼吸道病毒单克隆抗体即抗腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒A型及B型、副流感病毒1、2、3型单克隆抗体分别滴加于标本上，在37℃湿盒内孵育30分钟后，用PBS (磷酸盐缓冲液)洗片3次，然后用蒸溜水洗片，风干后封片。荧光显微镜下观察。

1.6 阳性结果判断及对照设定

如果一孔涂片中含有细胞数大于200个，且2%以上的细胞显示有细胞内染色为阳性，即为某病毒感染。在确定阳性染色时呼吸道合胞病毒及副流感病毒显示为细胞浆内染色，流感病毒及腺病毒为核染色或浆内染色。由试剂盒提供阳性对照片作对照。

2 结果

2.1 呼吸道各种病毒的感染情况

在检测1838例中，病毒阳性者601例，检出率32.7%(601/1838)。其中呼吸道合胞病毒(RSV)528例、腺病毒(ADV)23例、流感病毒A型(IFV A)28例、流感病毒B型(IFV B)9例、副流感病毒1型(PIV1)2例、副流感病毒2型(PIV2)1例、副流感病毒3型(PIV3)7例，混合感染3例。 感染率依次为：RSV>IFV A>ADV>IFV B>PIV3>PIV1>PIV2。

2.2 各单项病毒在不同年龄组的感染情况

各病毒感染呈现出以1～3周岁组的儿童为高发人群的流行特点。见表1。

表1 各单项呼吸道病毒在不同年龄组中感染率(例数(%))

3 讨论

呼吸道系统感染性疾病是临床最常见的病种，多通过空气或唾液飞沫方式传播，传播速度快，非常容易造成局部流行，甚至可导致爆发性流行[3]。一般可根据患儿的年龄和临床表现作出病毒感染诊断，但特异性病原学诊断对患儿隔离、危重患儿的监护及合理用药十分重要[4]。因而运用一种快速、简便、特异性及敏感性高的诊断病毒感染的实验方法就显得非常重要。

诊断病毒感染的方法较多，但都存在不足之处。目前国内诊断呼吸道病毒感染基本采用电镜检测、培养鉴定法、聚合酶链反应( PCR) 、酶联免疫吸附试验( ELISA) 或FIA 特异性抗体检测法、凝集法等，有文献指出各种方法中抗原较抗体检测更敏感[5]，以往一般以间接免疫荧光法为主[6]，而直接免疫荧光法具有敏感性强、特异性高的特点[2]。因而我们采用直接免疫荧光法检测呼吸道诱导痰中脱落纤毛柱状上皮细胞中的呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV，A、B型)、副流感病毒(PIV，1、2、3型)、腺病毒(ADV)抗原，达到诊断目的[1]，Chemicon方法经过WHO的3个参考中心审评，结果良好且本方法的特异性达80%、敏感性达95%[7]。结果表明：7种病毒共检出601例阳性，阳性检出率达32.7%，丽水地区儿童呼吸道病毒感染主要以感染呼吸道合胞病毒为主(87.9%)，其他几种呼吸道病毒感染率都较低。而且各病毒感染呈现以1～3周岁组的儿童为高发人群的流行特点。说明婴幼儿期应是病毒感染的重点防御时期。

总之，应用直接免疫荧光法较其它方法具有需时更短、操作简便、设备简单的优点，可对呼吸道病毒进行快速检验，为尽早诊断疾病、减少疾病传播、防止滥用抗生素以及确定正确的治疗方案提供更可靠的依据。了解丽水地区儿童呼吸道病毒感染状况及特点，减少不必要抗生素的使用，及时采用适当的隔离措施都有重要意义。

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[ 7]McDonald JC，Quennec P. Utility of a respiratory virus panel containing a monoclonal antibody pool for screening or respiratory specimens in non peak respiratory syncytial virus season J Clin Microbiol，1993，31:2809-2811.

AnalysisofthesituationandcharacteristicsofchildrenrespirovirusinfectioninLishui

PEILihong，TUXiaobo,LIUSuxia,JIANGLili,LANYebin

(Lishui Central Hospital,Zhejiang 323000,China )

裴立红(1982-)，女，浙江天台人，本科，检验师。研究方向：免疫检验

R446.5

B

1672-0024(2013)04-0051-03