HBV-DNA含量与乙型肝炎病毒血清标志物的相关性研究

贺巧凤（湖南省长沙市三医院检验科 410015）

乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物是临床判断患者病情和传染性的重要依据之一。能够反映状态。近年来随着分子生物学技术的发展，荧光定量聚合酶链反应检测技术逐渐应用于临床诊断和治疗，它能够直接检测HBV-DNA的水平，反映HBV的感染活性。本文通过检测乙型肝炎患者血清病毒标志物和血清中病毒的含量，将结果进行对比分析，探讨二者的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 2009年1月至2011年12月在本院就诊同时做乙型肝炎两对半和乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）检测的门诊和住院的乙型肝炎感染者，共681例，其中男416例，女265例，年龄4～71岁。

1.2 主要试剂 HBV-DNA定量诊断试剂由杭州博日科技有限公司提供。乙型肝炎（下称乙肝）患者血清病毒标志物测定用酶联免疫吸附试验（ELISA），试剂由上海科华生物工程公司提供。

1.3 检测方法 ELISA按试剂说明书进行，用Bio-Red酶标仪测定和记录结果；HBV-DNA载量检测仪器采用美国ABI公司生产的ABI7500荧光定量PCR检测仪，操作严格按说明书进行。污染的控制标本的处理、试剂的配制、上样及PCR扩增检测严格分室进行，每次检测均设强阳性、临界阳性、阴性、质控试剂参照品。

1.4 统计学方法 对所得数据进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

681例按乙肝病毒标志物（HBV-M）常见模式分成10组，分别统计HBV-DNA检测结果。阳性率和测定值均以大于103copy／mL为界限值。乙肝病毒e抗原（HBeAg）阳性标本（①，③组）HBV-DNA 阳性率分别为94.9%和94.3%，与HBeAg阴性标本组HBV-DNA阳性率为0%～58.5%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），具体结果见表1。

表1 HBV-DNA及HBV-M结果比较

3 讨 论

HBV感染的病原学诊断主要依靠免疫血清学方法检测HBV血清学标志物和分子生物学方法检测HBV核酸。HBV血清学标志物主要反映的是人体对乙肝病毒的免疫状态，而HBV-DNA是病毒复制活动最直接和可靠的标志，也是HBV感染最为直接的证据。对于乙肝血清标志物与HBV-DNA的关系，近年来国内曾有多篇研究报道［1－2］，表1结果显示，第1组和第3组，HBV-DNA检出率最高（94.9%和94.3%），且拷贝测定值最高，与国内部分地区的报道相似［3－4］；第1组和3组都含有HBsAg和HBeAg阳性，HBV-DNA阳性率显著高于其他组。HBsAg是HBV感染后第1个出现的血清学标志物，HBsAg阳性表示存在HBV感染。HBeAg是HBV活动性复制的指标之一，HBeAg阳性表示病毒在肝细胞内复制活跃，传染性强，对肝细胞破坏严重。有研究发现，HBV-DNA与HBeAg和HBsAg存在相关性，但其浓度间并不呈正线性相关。HBeAg阳性的标本，HBV-DNA通常有较高的拷贝浓度，从表1中可以看出，HBeAg阳性患者的HBV-DNA浓度明显高于HBeAg阴性患者的 HBV-DNA浓度。抗-HBe出现于HBeAg转阴后，抗-HBe出现表示病变趋向好转，病毒复制水平降低，病变趋于静止，血中HBV-DNA浓度较低或阴性。从表1的检测结果可以看出有的“小三阳”即HBeAg阴性而抗－HBe阳性的患者HBV-DNA浓度也较高，那是由于HBV基因组前C区发生突变时，使HBeAg无法检出，此时HBV复制仍活跃，HBV-DNA浓度也较高，病变可持续进展。但在HBeAg阳性者中仍有部分HBV-DNA为阴性，这可能与血清HBVDNA复制水平低或病毒发生变异有关［5］，但其中有38例HBV-DNA为阴性，而其他文献［6－7］也显示大三阳中 HBVDNA并非100%，其原因为荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）只能检测血中游离的HBV-DNA，当病毒整合到肝细胞染色体上，随同肝细胞一起复制、表达，ELISA可出现阳性反应，但血清中却并不存在乙肝病毒颗粒，而导致FQ-PCR结果为阴性；另外当感染的HBV-DNA发生突变时，不能与荧光探针结合，FQ-PCR结果亦为阴性，而ELISA可为阳性。因此对于ELISA结果为大三阳而HBV-DNA为阴性者，应做具体分析，确定是什么原因所致。

一直认为，HBeAg阴性提示血清 HBV-DNA复制水平低，传染性或病情趋向稳定或恢复。但在本研究中发现第2组、4组、5组、7组 HBeAg阴性，336例标本中出现138例HBV-DNA阳性，表明即使体内有多种抗体产生，部分患者仍具有病毒的复制与传染性，这可能与HBV发生前C区基因突变、机体发生特异性的免疫耐受有关。如果仅以HBeAg的检测结果作为判断HBV感染、传染性以及HBV是否在体内复制有一定的局限性，因此，应选择检测HBV-DNA作为体内乙肝病毒复制的标准。

研究发现，第5组 HBsAg阴性（抗-HBe、抗-HBc均阳性），仍发现有14.3%的 HBV-DNA阳性，且拷贝数在104copy／mL左右。其原因可能由于：①HBV发生变异，其前S区变异率比S区高2倍；前C／C区变异研究较多。②HBsAg的表达可能较低或其抗原性改变较大，用现有的试剂检测不出。③形成免疫复合物，有学者发现血中免疫复合物的存在可能影响 HBsAg的检出［8］。第2，4，6组，虽然 HBV-DNA阳性率低于1组和3组，但阳性率仍然较高，说明虽然HBeAg阴性，但病毒并没有停止复制，只是复制减缓或部分患者出现病毒基因变异。这样的感染更易对患者造成伤害，严重者可发展为肝硬化或肝癌［9］。第7组仅HBsAg阳性的72例感染者中有30例HBV-DNA阳性，检出率为41.7%，这可能是HBV活跃的早期，血清中其他标志物还没有出现，因此这种病例亦可能具有较高的传染性。有文献报道［10］，乙肝病毒血清标志物各种表现形式均可能存在不同程度的HBV复制，只是因时间短，有些表现形式可能由于检测数量、检测方法、检测试剂差异等原因导致某些表现模式检出率低。

因此，采用FQ-PCR检测乙肝病毒感染者 HBV-DNA含量，同时采用ELISA测定乙肝病毒标志物，有助于了解患者病毒复制水平，对乙肝的临床诊断，特别是为抗病毒治疗方案的选择提供科学依据［11］。同时，在抗病毒治疗后HBV-DNA转阴的患者，检测HBeAg／抗-HBe动态消长过程，观察 HBsAg的变化，有助于判断治疗终点和调整治疗方案［12］。

由此可见，仅依靠乙肝病毒血清标志物检测诊断HBV感染是不够的，它只能较好地反映机体对HBV感染的免疫应答状况，而FQ-PCR可以定量检测 HBV-DNA浓度，且灵敏度高、特异性强，更能清楚地反映乙肝患者的病毒活动程度，真实地反映HBV的感染和复制情况。只有将两种检测方相结合对乙肝患者进行综合分析，才能对临床诊断、治疗方案设计及药物疗效观察提供可靠的依据。

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