化浊解毒愈疡汤对浊毒内蕴型胃溃疡大鼠血清TNF-α、胃黏膜SOD的影响*

王红霞，张晓艳，孙园园，董笑一，豆志伟，曹东义

(1.河北省中医药研究院，石家庄 050031;2.河北医科大学，石家庄 050011)

化浊解毒愈疡汤是曹东义教授在浊毒理论指导下，结合自己多年来的临床经验总结出的治疗胃溃疡的经验方，在临床上取得治愈率高、复发率低的满意疗效。本实验通过制造浊毒内蕴型胃溃疡大鼠模型，观察化浊解毒愈疡汤对实验性大鼠血清中肿瘤坏死因子-α及胃黏膜SOD影响的实验研究，进一步探讨其对浊毒内蕴型胃溃疡的治疗作用及机制，为临床治疗胃溃疡提供进一步的实验依据。

1 材料

1.1 动物

50只清洁级 Wistar雄性大鼠，体质量 180～250g，由河北医科大学实验动物中心提供(合格证号(冀)2004-1-00)。

1.2 药物

化浊解毒愈疡汤药物组成:白芍30g，甘草6g，黄连 6g，茯苓 15g，白术 9g，煅瓦楞粉 30g，煅牡蛎30g，当归 12g，苦参 6g，蒲公英 20g，积雪草 15g。所需中药均购自河北省中医药研究院，并由制剂室煎成汤剂。雷尼替丁胶囊由河北永丰药业有限公司生产(0.15g/粒，批号国药准字 H13020830)。

1.3 试剂

55%乙醇、100%分析纯冰乙酸(广州丹旺贸易有限公司)、3%戊巴比妥钠溶液(上海宝曼生物科技有限公司)均由河北省中医药研究院浊毒实验室提供;TNF-α试剂盒为上海酶联生物科技有限公司产品;SOD试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.4 仪器

MK3酶联免疫检测仪(芬兰雷柏公司产品)、600型电热恒温水箱(天津产)、FJ-2021r-放免计数器(西安产品)。

2 方法

2.1 药物制备

中药常规水煎煮制成生药含量为2.26g/ml的溶液，使用时水浴加温至25℃。雷尼替丁用蒸馏水稀释至5.74mg/ml的混悬液，均放置于4℃冰箱保存备用，使用时水浴加温至25℃。

2.2 模型制备

参照吕冠华［1］湿热环境加高脂高糖饮食和乙醇的综合造模加以改进，并用乙酸侵蚀胃壁制造胃溃疡方法［2］:空白组大鼠饲养于正常环境中，并给予正常饮食，其余各组大鼠均饲养于高热潮湿(温度为32℃，相对湿度为96%)的环境中，饲以高脂高糖饮食，即在普通饲料喂养的基础上，每日每只加用10%蜂蜜自由饮用，且隔日按大鼠体质量灌服猪油10g/kg，并与猪油隔日灌服10ml/kg白酒，共为10d。禁食不禁水24h，腹腔内按40mg/kg的量注射3%戊巴比妥钠溶液进行麻醉，之后于剑突下0.5cm纵向切开腹壁2cm，将胃轻移出腹腔，用直径为5mm的滤纸片浸渍冰乙酸在胃窦部浆膜面贴30s×2次，再用0.9%的氯化钠冲洗后覆盖网膜，最后缝合完好。

2.3 动物分组给药

将50只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组，每组10只，分别为空白组、模型组、雷尼替丁治疗组、化浊解毒愈疡汤高、低剂量治疗组。造模后24 h开始给药治疗，化浊解毒愈疡汤低、高剂量治疗组分别按 6.5g/(kg·d)、26 g/(kg·d)灌胃，雷尼替丁治疗组按15mg/(kg·d)灌胃，均每天1次;正常对照组、模型组给予蒸馏水灌胃，连续灌胃2周。

2.4 标本采集和处理

灌胃治疗2周后颈椎脱臼法处死大鼠，断头取血做血清学检测，以及用刀片刮取胃窦组织黏膜并称重，冰浴下制备10%组织匀浆，3000r/min离心15min，取上清－20℃以下保存，留作 SOD。打开腹腔取出鼠胃，将大鼠胃大弯剪开，用生理盐水冲洗后，沿溃疡周围切下约1cm×1cm大小的胃壁，用4%甲醛液固定，用滤纸吸干，石蜡切片5μm厚，苏木精-伊红染色法染色(HE染色)，光镜观察。

2.5 检测指标及方法

2.5.1 溃疡指数测定 在显微镜下用游标卡尺测量胃溃疡损伤的长度与宽度，计算溃疡指数(UI)=溃疡最长径与垂直于最大长径的最大宽径之积［3］。

2.5.2 测定血清 TNF-α 各组大鼠取血清用放射免疫分析法测定大鼠血清 TNF-α水平，严格按试剂盒步骤进行。

2.5.3 测 SOD用黄嘌呤氧化酶法测定，方法严格按试剂盒说明书操作。

3 统计学分析

4 结果

4.1 各组大鼠胃溃疡

光镜下可见，空白组与中药高剂量治疗组大鼠胃窦壁结构无变化，且均未见明显的炎性细胞浸润。模型组大鼠胃窦壁结构破坏，浆膜面见有瘢痕组织，并有大量炎性细胞浸润，溃疡周围黏膜腺体间质有充血、水肿。西药治疗组与中药低剂量治疗组均见胃窦壁结构接近正常，有少量炎性细胞浸润。

4.2 各组大鼠胃溃疡指数(UI)比较

表1显示，治疗组均能明显降低 UI，差异具有统计学意义(P＜0.01)，中药低剂量治疗组与西药治疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

4.3 各组大鼠血清TNF-α含量的比较

表2显示，与正常组比较，模型组 TNF-α含量升高(P＜0.05);与模型组比较，各治疗组 TNF-α含量均显著降低(P＜0.05)，各治疗组之间中药低剂量组与西药组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜SOD含量均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，各治疗组量组大鼠胃黏膜SOD含量均有显著增高，具有统计学意义(P＜0.01)，各治疗组之间中药小剂量组与西药组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 各组大鼠胃溃疡指数(±s)mm2

表1 各组大鼠胃溃疡指数(±s)mm2

注:与模型组比较:#P＜0.01;与雷尼替丁组比较:▲P＞0.05(n=10)

组别只数 溃疡指数(mm2)模 型 组10 25.06±1.68雷 尼 替 丁 组 10 8.02±1.23#中药低剂量组 10 7.95±1.08#▲中药高剂量组 10 7.21±1.67#▲

表2 各组大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比较(±s)

表2 各组大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比较(±s)

注:与正常对照组比较:#P＜0.05;与模型组比较:▲P＜0.05;与西药治疗组比较:△P ＞0.05(n=10)

组别 只数 TNF-α (μg/g prot) SOD(u/mg prot)模 型 组 10 0.998±0.185# 95±50.12#正 常 组 10 0.421±0.098▲ 235±40.82▲中药高剂量组 10 0.456±0.172▲ 224±30.12▲中药低剂量组 10 0.531±0.187▲△ 179±28.23▲△西 药 治 疗 组 10 0.565±0.206▲ 184±20.65▲

5 讨论

TNF-α又名恶液质素，由单核、巨噬细胞产生，是可造成组织广泛损伤的促炎症因子。TNF-α是引起溃疡形成的烈性介质，在胃黏膜损伤过程中发挥作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促进其他细胞因子包括 IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、PAF、PGs等继发性释放，并引起中性粒细胞活化，急性期蛋白生成，凝血过程启动产生小血管内凝血，影响黏膜血氧供给加剧损伤，甚至形成溃疡［4］。TNF与机体的炎症免疫反应有密切关系［5］。苏彩女等［6］通过检测慢性胃炎患者血TNF-α水平显著高于正常人的结果表明，TNF在胃炎的病理损伤过程中起重要的作用，并认为其升高原因可能是患者炎症反应激活巨噬细胞的结果。于海等［4］通过实验观察到除单寒组外，消炎痛型胃溃疡各模型大鼠血清TNF-α含量均显著升高。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα，TNF-α)是促炎症反应因子，具有广泛的生物学功能，在细胞生长死亡、肿瘤形成、免疫反应和应激反应诸方面都具有重要作用［7］。它也能更强地诱导一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合成酶(iN0S)的合成，进一步加重炎症反应［8］。一定含量的自由基对人体有生理作用，但其产生过多就会超出机体的清除能力，进而对机体造成损伤［9］。过氧化物歧化酶(SOD)在自由基清除系统是占重要位置的酶类，在胃壁细胞内活性很强。SOD能够及时有效地清除体内自由基，从而免除自由基对机体造成的损害作用。体内SOD含量的大小，在一定程度上反映了机体清除自由基能力的大小。

郭喜军等［10］认为，浊毒的形成是致病因素之一，浊毒相关为害乃胃溃疡病机关键之所在。化浊解毒愈疡汤由白芍、甘草、黄连、茯苓、白术、煅瓦楞粉、煅牡蛎、当归、苦参、蒲公英、积雪草、地锦草等组成，用于治疗湿热内运型胃溃疡，具有燥湿化浊、清热解毒、抑酸止痛作用。方中的苦参、蒲公英、黄连燥湿化浊解毒;茯苓、白术健脾祛湿解毒;瓦楞粉、煅牡蛎抑酸止痛;当归、白芍、甘草益气养血缓急止痛。现代药理研究证实，黄连含黄连碱、甲基黄连碱等，具有较强的抗菌、抗炎、抗癌作用，对幽门螺旋杆菌有较强的抑菌作用，能够协同西药根除幽门螺旋杆菌［11］。白芍、炙甘草均能抑制胃酸分泌、抗炎、缓解胃肠平滑肌痉挛［12］;蒲公英有良好的抗菌活性，对幽门螺旋杆菌有很好的抑制作用［13］。施之琪等［14］通过实验研究认为，雪草总苷在一定程度上可以刺激胃黏膜肉芽组织生长，促进炎症修复和溃疡愈合，对于胃溃疡具有一定的预防及治疗作用。曹瑞珍［15］等研究表明，地锦草提取物可明显提高小鼠血液SOD活性，提高机体的抗氧化能力。胡素敏等［16］研究发现，中药张氏益胃汤有明显修复溃疡作用，其机制可能是通过降低溃疡大鼠血清TNF-α水平。本实验研究表明，胃溃疡模型组与正常对照组比较大鼠血清TNF-α明显升高;胃黏膜SOD含量显著降低，中药及西药均能明显降低大鼠血清 TNF-α含量及增加胃黏膜SOD含量且溃疡指数明显减小(P＜0.01)，说明中药化浊解毒愈疡汤与西药雷尼替丁均对实验性胃溃疡大鼠具有良好的治疗作用。其机制可能是通过降低溃疡大鼠血清TNF-α含量、增加胃黏膜SOD含量、减轻自由基对胃黏膜造成的损害，从而达到治疗的目的。实验还说明，中药与西药在治疗本病近期疗效方面无明显优势，且中药的剂量越大越明显。但是从长远疗效方面，中药无明显毒副作用更应值得推广与应用，可创造社会及经济效益。

［1］吕冠华，劳绍贤.脾胃湿热证动物模型的建立与评价［J］.广州医药大学学报，2005，22(3):231-235.

［2］Okabe S，Roth JL，Pfeiffer CJ.A method for experimental，penetrating gastric and duodenal ulcers in rats［J］.1971，16(3):277-284.

［3］李廷荃，马贵同.补气活血中药对乙醇致大鼠胃溃疡愈合过程中EGFR、bFGFR蛋白表达的影响［J］.上海中医药杂志，2008，42(7):78-80.

［4］于海，柴剑波，赵伟国，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对消炎痛型胃溃疡寒热证模型大鼠血清 IL-8和 TNF-α含量的影响［J］.时珍国医国药 2012，23(2):382-383.

［5］Ramila P，Epstein LB，Tumor necrosis factor as an immuno dulactor and mediator of monocyte cytoxicity induced by itself.Interferor and inter-leukinge.Nature 1986;323:89.

［6］苏彩女，田小平.慢性胃炎患者血清TNF-α和IL-8水平观察［J］.放射免疫杂志，2002，15(1):24-25.

［7］Balkwill F.Tumour necrosis factor and cancer［J］.Nat Rev Cancer，2009，9:361-371.

［8］Usha S， AjitK， Rajesh S， etal. Calreticulin transace tylasecatalyzed modification of the TNF-mediated pathway in the human peripheral blood mononuclear cells by polyphenolic acetates［J］.Chemico-Biological Interactions，2010，185:263-270.

［9］Appleyard CB， McCaffertyDM，TigleAW，etal. TNF-αmediation of NSAID-induced gastric damage:role of leukocyte adherence［J］.Am J physiol，1966，270:42-48.

［10］郭喜军，鄂辉，张彦伟.胃癌前病变癌基因与浊毒的相关性研究［J］.河北中医药学报，2011，26(4):11-12.

［11］高学敏.中药学［M］.2版.北京:中国中医药出版社，2007:97.96.

［12］张须学.中药学［M］.西安:第四军医大学出版社，2005:117-118.209.125.212

［13］姜宁，宋新波.蒲公英的药理研究进展［J］.中国中医药杂志，2008，6(12):19-20.

［14］施之琪，杜建平，杜铁良.积雪草总苷抗乙酸致大鼠胃溃疡的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(12):122-124.

［15］李涛，王秀玲.氧自由基与胃肠疾病研究进展［J］.国外医学·消化系疾病分册，1997，17(4):204.

［16］胡素敏，张小萍，谢斌.张氏益胃汤对乙酸性胃溃疡大鼠肿瘤坏死因子-α与白细胞介素-8的影响［J］.时珍国医国药，2011，22(5):1124-1125.