HMGA2蛋白在口腔鳞状细胞癌的表达与临床意义

李 慧

（中西医结合医院 口腔科，吉林 吉林132011）

口 腔 颌 面 部 鳞 状 细 胞 癌 （oral squamous cell carcinoma，OSCC）其患病率和死亡率位居常见口腔恶性肿瘤的第6位，浸润和转移是造成其不良预后的主要因素［1］。高迁移率族蛋白（HMGA2）在许多上皮组织恶性肿瘤中具有高表达，与肿瘤的发生、发展及预后密切相关［2］。本文通过检测HMGA2在口腔鳞癌组织中的表达，探讨它在口腔鳞癌发生发展中的作用，为口腔鳞癌的早期诊断和治疗提供有参考价值的分子生物学指标。

1 材料与方法

1．1 临床资料

收集2008年10月至2012年1月在我院口腔科经手术病理证实的口腔鳞状细胞癌45例，术前均未接受过放化疗治疗。患者年龄在38－80岁，中位年龄是49．2岁。经颈淋巴结清扫术证实伴淋巴结转移者20例，无淋巴结转移者25例；按TNM分期，Ⅰ＋Ⅱ期患者25例，Ⅲ＋Ⅳ期患者20例。鳞癌分化程度：低分化14例，中分化14例，高分化17例。正常口腔黏膜组织标本30例做对照。

1．2 免疫组化染色方法

采用链菌素生物素蛋白－过氧化酶连接法（SP）对口腔鳞状细胞癌组织中 HMGA2蛋白的表达进行检测。首先脱蜡和水化，然后微波热修复法抗原修复，接着用3%H2O2溶液处理10min，然后滴加适量正常山羊血清封闭，每张切片滴加HMGA2兔抗人多克隆抗体稀释液50μl（1∶50稀释），PBS洗3次，滴加生物素标记的二抗50μl，辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，苏木精复染细胞核2 min，自来水冲洗10min；脱水、透明、封片、镜检。

1．3 结果判定

采用双盲法阅片。HMGA2蛋白阳性染色定位于胞核。高倍镜下随机选5个视野，结合染色强度与细胞染色百分率进行综合评分。染色强度评分标准：胞核内无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞占总细胞数＜5%为0，5%－25%为1分，26%－50%为2分，51%－75%为3分，76%－100%为4分。以染色强度评分结果与阳性细胞百分率评分结果相乘所得的总分进行结果判定：0 分为阴性，1－3 分为弱阳性（＋），4－8 分为中等阳性（＋＋），9－12分为强阳性（＋＋＋）。

所有数据采用SPSS17．0软件统计分析，卡方检验，P≤0．05有统计学意义。

2 结果

HMGA2的阳性表达主要见于胞浆或胞膜，呈棕黄色，阳性颗粒粗细不等。HMGA2在口腔鳞癌组织中呈高表达，阳性表达率为46．7%，口腔正常黏膜组织的阳性表达率为16．7%，二者相比有显著差异（P＜0．05）。口腔鳞状细胞癌HMGA2的表达与临床病理特征的相关性见表1。HMGA2的表达与淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移组与无淋巴结转移组HMGA2阳性表达率相比有显著性差异（P＜0．05）。此外，HMGA2的表达与口腔鳞状细胞癌分化程度无相关性，与TNM分期密切相关，在TNMⅠ＋Ⅱ期和Ⅲ＋Ⅳ期的表达率分别为36．0%和60．0%，有显著性差异（P＜0．05）。

表1 口腔鳞状细胞癌HMGA2的表达与临床病理的关系

3 讨论

HMGA2基因位于人类12号染色体的q15区，长10kb，由5个外显子和4个内含子组成［3］。HMGA2基因编码含109个AA的完整蛋白产物，分子量12kDa，表达定位于细胞核，属于非组蛋白染色体蛋白。HMGA2蛋白是HMGA2基因的表达产物，HMGA2蛋白也可直接和转录因子相互作用，通过调整它的构象，影响其与DNA结合能致HMGA2在胚胎形成早期表达增高，随着胚胎的生长发育表达逐渐降低［4］。在正常成人组织中，几乎检测不到HMGA2基因转录产物。最近几年，越来越多的证据显示HMGA2在多种人类上皮来源恶性肿瘤组织中出现异常表达，发病机制有首先干扰细胞周期，HMGA2可以结合细胞周期蛋白基因的启动子进而上调细胞周期蛋白的表达，加速细胞周期G2／M 期的转化，促使肿瘤发生［5］。其次，促进上皮细胞间质化，使上皮细胞失去极性，侵袭和游走迁移能力增强。Thuault等研究发现，在TGF－β信号通路中，Smad可以通过HMGA2上调其下游的目标基因Snail、Twist和Slug等表达，导致E－cadherin表达下调，细胞间极性丧失而诱发上皮细胞－间充质转化（EMT）［6］。本研究发现口腔鳞癌织中HMGA2表达率显著高于正常口腔黏膜组织，进一步证实HMGA2在口腔鳞癌发生发展中的重要作用。研究中还发现部分癌组织的侵袭缘周围的肿瘤细胞阳性表达水平更高，说明癌巢周边的肿瘤细胞可以检测更多的HMGA2，表达多定位于癌组织的侵袭缘，显示出细胞具有EMT特征使得肿瘤细胞更容易向周围侵袭。本实验结果还显示，在淋巴结转移组中，HMGA2的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组。进一步研究分析，在口腔鳞状细胞癌组织中HMGA2高表达与口腔鳞癌病理分级无关，与临床分期有关，提示HMGA2高表达可能是口腔鳞癌具有高转移、高侵袭能力的分子基础。所以，高表达HMGA2的组织多呈高度恶性、伴有淋巴结转移或远处转移，并且HMGA2的表达程度与病人术后生存期密切相关，高表达HMGA2的病人生存期缩短，提示预后不良，显示出HMGA2是一个潜在的癌症诊断标志物。

总之，HMGA2显示出在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中具有重要的调控作用，对HMGA2的研究有助于我们对口腔鳞状细胞癌转移的分子机制更深入了解，开辟治疗的新途径，同时为预后判断提供有价值的分子生物学指标，为临床进一步制定合理有效的综合治疗方案提供可靠的依据。

［1］邱蔚六．颌面外科学［M］．第四版．北京：人民卫生出版社，1999：266．

［2］周颖婷．HMGA2与胃癌之间关系的研究进展［J］．中外妇儿健康，2011，19（9）：173．

［3］查 郎，王子卫，张 能，等．HMGA2与胃癌上皮细胞间质转化的相关性及临床意义［J］．生命科学研究，2011，15（1）：62．

［4］Fusco A，Fedele M．Roles of HMGA proteins in cancer［J］．Nat Rev Cancer，2007，7（12）：899．

［5］Di Cello F，Hillion J，Hristoy A，et al．HMGA2participates in transformationin human lung cancer［J］．Mol Cancer Res，2008，6（5）：743．

［6］Thuault S，Valcourt U，Petersen M，et al．Transforming growthfactor－βemploys HMGA2to elicit epithelial mesenchymal transition［J］．Journal of cell biology，2006，174（2）：175．