高效液相色谱法快速测定染色大黄鱼的案例分析

王晓韡

福建宁德市产品质量检验所 352100

食用柠檬黄的外观为橙黄色粉末，微溶于酒精，不溶于其他有机溶剂。其学名为3-羧-5-羟（对磺苯）-4-（对磺苯基偶氮）邻氮茂三钠，英文名为Tartrazine。其结构式如下：

图1 柠檬黄的分子结构式

柠檬黄是一种偶氮型酸性染料。主要用于食品、饮料、药品及化妆品的着色，也用于羊毛、蚕丝的染色及制造色淀。水溶性合成色素，鲜艳的嫩黄色，广泛用于冰淇淋、雪糕、果冻、酸奶、饮料、罐头、糖果包衣等的着色。柠檬黄之所以能用做食品药品染色剂，是因为它安全度比较高，基本无毒，不在体内贮积，绝大部分以原形排出体外，少量可经代谢，其代谢产物对人无毒性作用。但人如果长期或一次性大量食用柠檬黄、日落黄等色素含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状，当摄入量过大，超过肝脏负荷时，会在体内蓄积，对肾脏、肝脏产生一定伤害。

在宁德，温州等地，近期内接到多起举报大黄鱼染色案件，由于养殖大黄鱼鱼体颜色没有野生鲜艳，不法商贩使用着色力强、色泽鲜明、不易褪色、稳定性好的合成着色剂柠檬黄或日落黄给大黄鱼染色[1]，染色后鱼体与野生大黄鱼颜色相近，迎合部分消费者的不正确消费理念，达到以次充好的目的。

目前，测定柠檬黄和日落黄的方法有高效液相色谱法[2]，高效液相质谱法[3]， ELISA法[4]等。由于鱼本身有大量的脂肪和油脂，对分析方法要求高。使用固萃方法前处理成本高且容易堵柱。采取前处理改进，以达到高效快速检测合成色素的方法，来为快速打击不法商贩提供有力依据。

图2 合成着色剂柠檬黄，日落黄的等吸收图

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

Agilengt1260 Infinity高效液相色谱仪配有二级阵列紫外检测器，柠檬黄，日落黄，苋菜红，胭脂红购自国家标准物质研究中心（储备液浓度0.5mg/mL），甲醇（色谱纯），乙酸铵（分析纯），超纯水，无水乙醇（分析纯），氨水（分析纯），举报案件黄鱼样品。

1.2 实验方法与色谱条件

1.2.1 实验方法

由于着色大黄鱼一般为体表着色，引入大量鱼肉不利于样品处理和结果的有效分析，只取体表部分，用超纯水进行超声浸泡，使用石油醚萃取样品中的脂肪后取水层过聚酰胺粉小柱，用甲醇-甲酸（6+4）混合液洗涤后，使用超纯水洗至中性，用无水乙醇-氨水-水溶液洗脱合成色素，收集解析液，乙酸中和，浓缩近干，加水定容后过0.45μm滤膜上机测试。

1.2.2 色谱条件

色谱柱： Agilent Eclipse Plus C18,5μm,4.6×150mm

流动相：甲醇-20mmol乙酸铵；

梯度洗脱：甲醇：10%~50%,5%/min;50%~90%，8%/min;90%~10%,20%/min

流速：1mL/min；

检测波长： 428nm

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

从等吸收图图2中可以看出，合成着色剂柠檬黄，日落黄的最高吸收峰在428nm,为了达到出峰完美，检测数据准确的目的。采用428nm检测波长。

2.2 流动相梯度洗脱的选择

流动相等度洗脱时，无法将几种合成着色剂有效地完全分离开，通过调节流动相的比例及使用梯度洗脱的方法，可以有效达到完全分离的效果如图3，此分析方法中的流动相梯度洗脱可有效地用于分析食品中合成着色剂。

图3 柠檬黄，日落黄，胭脂红，苋菜红标样的HPLC测定谱图

2.3 案件大黄鱼测定结果

举报抽取的样品测定结果如图4所示，从测定的结果来看，举报大黄鱼样品存在染色的现象，其染色物质为合成着色剂柠檬黄，加入量为0.003g/kg。

图4 大黄鱼样品中合成着色剂的HPLC测定谱图

3 小结

本次试验中的大黄鱼样品均检测出含有柠檬黄色素，其被用来掺伪造假大黄鱼，以达到“卖相好，销路大”的不法目的，此类造假行为相当普遍。由于合成色素对人体的危害大，故我们应加大样品抽查力度和执法效率，希望业者买卖有良心，鼓励市民举报投诉，使不法行为无所遁形。

[1]陈建军. 黄鱼中掺有柠檬黄色素事件的调查.职业与健康，2002，18（5），43-44

[2]陈欣欣，谢娅黎，肖汉，杨彬. 现代食品科技， 2009，09

[3]黄晓雯. 超高效液相色谱—串联质谱测定红烧老抽中六种合成色素的方法.食品工业科技, 2012, 33(16)

[4]邱凯，马国文，柳增善，任立松，沈庆丰. 柠檬黄的ELISA检测方法的建立.内蒙古民族大学学报（自然科学版），2008,23（3），315-319