地五养肝胶囊对肝肾精虚大鼠肝再生的影响*

宋红丽 李瀚旻 林立生 高 翔 赵宾宾 张 军 吴 雨 晏雪生 肖 玲

1.湖北中医药大学附属医院肝病研究所 (湖北武汉，430061) 2.湖北中医药大学2010级研究生班

肝肾精虚/MSG-肝再生-大鼠模型是病证结合的肝再生动物模型［1，2］前期研究结果表明，该模型能较好地揭示“脑髓生肝”、“骨髓生肝”和“精髓生肝”的科学内涵，适用于研究高级神经中枢、下丘脑-垂体-肝轴和神经-内分泌-免疫网络调控肝再生的作用及其机制［3，4］。本实验研究通过动态对比观察体现“补肾生髓成肝”治疗法则的地五养肝胶囊对肝肾精虚/MSG-肝再生-大鼠肝再生的影响，探讨“补肾生髓成肝”改善肝肾精虚证的生物学基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 SPF级wistar新生大鼠 (由湖北省疾病预防控制中心提供)，左旋谷氨酸单钠 (Monosodium L-Glutamate，MSG)购自美国Sigma公司。体现“补肾生髓成肝”治疗法则的地五养肝胶囊 (批号:鄂药制药字Z20113160)由湖北省中医院肝病研究所提供。

1.2 分组与处理方法 新生大鼠112只于出生后第2、4、6、8、10时皮下注射MSG造模，每次4mg/g体重 (即MSG大鼠)。另取新生大鼠53只在相同时间点皮下注射等体积生理盐水;48只新生大鼠不做任何特殊处理。28天后离乳，分笼饲养，光照时间12小时 (08∶00-20∶00)，温度24℃左右，动物自由饮水、摄食。6周时从造模存活的MSG大鼠中取80只随机分为两组，每组40只:肝肾精虚/MSG-肝再生大鼠模型组 (简称模型组)和治疗组。从皮下注射生理盐水的53只大鼠中随机取40只作为盐水对照组 (简称对照组)。又从不做任何特殊处理的48只大鼠中随机取40只作为正常大鼠肝大部分切除再生组 (简称PHx组)。治疗组大鼠按3g/kg剂量给予地五养肝胶囊灌胃，其余两组大鼠均以等量生理盐水灌胃，连续灌胃两周后所有大鼠行肝大部分切除术。手术方法:无水乙醚吸入麻醉，腹部正中切口，暴露肝脏，按肝标准切除法［5］，在根部结扎并切除肝左叶和中叶 (约占全肝的68%)，分层缝合。MSG-大鼠按上述方法行肝大部切除后，即复制出肝肾精虚/MSG-肝再生-大鼠模型。PHx组和对照组大鼠按上述方法行肝大部切除后，即复制出经典的肝再生大鼠模型。肝切除术均于上午08∶00～11∶00进行，以避免昼夜节律对肝再生的影响，术后实验动物自由摄食、饮水，继续给药治疗，方法同手术前。

1.3 标本处理 每组动物在术后1、3、7、10天时分别随机取8只大鼠 (雌雄各半)，称重后给予乙醚吸入麻醉。眼球取血后颈椎脱臼处死，快速取出肝脏并称重，取出下丘脑和脑垂体。

1.4 计算肝再生度、肝再生指数 利用电子天平称量肝脏湿重和动物体重，根据下列公式［6］计算肝再生度和肝再生指数。肝再生度=［B－(A/0.684－A)］/A;肝再生指数 (%)=B/C×100%，其中，A为切除的左中两叶之肝重，B为再生肝重，C为动物体重，0.684为切除的两叶肝重与原肝重之比值。

1.5 计算再生肝肝细胞分裂指数 用手术刀切取小块再生肝组织，10%甲醛溶液固定、石腊包埋，每只动物随机选取5张切片，苏木素-伊红染色后于油镜下 (×1000倍)观察，计数肝细胞核总数和肝细胞核分裂数，共计数肝细胞核1万个以上，根据公式计算肝细胞分裂指数 (MI):MI(%)=肝细胞核有丝分裂象 (个)/肝细胞核总数 (个)×100%。

2 结果

2.1 各组大鼠不同时间点肝再生度、肝再生指数和MI比较见表1。

表1 各组大鼠不同时间点肝再生度、肝再生指数和MI变化比较 (±s)

表1 各组大鼠不同时间点肝再生度、肝再生指数和MI变化比较 (±s)

与PHx组和对照组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 时段 肝再生度 肝再生指数(%)MI(%)0.22±0.08 1.46±0.13 0.86±0.16(n=32)术后3天 0.53±0.10 2.31±0.29 1.85±0.19术后7天 0.73±0.09 3.02±0.30 0.62±0.03术后10天 0.88±0.06 3.49±0.05 0.29±0.04对照组 术后1天 0.21±0.05 1.47±0.18 0.87±0.16(n=32)术后3天 0.54±0.09 2.33±0.42 1.81±0.04术后7天 0.71±0.11 3.07±0.13 0.67±0.18术后10天 0.90±0.10 3.46±0.05 0.28±0.05模型组 术后1天 0.34±0.10* 1.88±0.14* 1.05±0.12＊＊(n=32)术后3天 0.42±0.08* 2.07±0.04* 1.04±0.18*术后7天 0.57±0.12* 2.41±0.06* 0.41±0.16＊＊术后10天 0.70±0.08* 2.84±0.10* 0.15±0.03*治疗组 术后1天 0.13±0.07 1.52±0.11# 0.77±0.14#(n=32)术后3天 0.50±0.05# 2.19±0.11# 1.89±0.13##术后7天 0.74±0.06# 2.84±0.12# 0.57±0.20##术后10天 0.86±0.03# 3.27±0.06# 0.28±0.04 PHx组 术后1天##

3 讨论

中医学有“肝肾同源于精血”的认识。我们前期研究结果表明，肝肾精血证是慢性肝病病程进展“髓失生肝”病因病机的基础病证［7～13］。MSG-肝再生-大鼠模型是一种病 (肝脏病)-证 (肝肾精虚证)结合的动物模型。 “补肾生髓成肝”治疗法则用于指导“髓失生肝”和“肝肾精虚证”的防治。肝肾精虚证的本质是肝损伤与肝再生失衡，采用“补肾生髓成肝”减少肝损伤与调控肝再生是其根本大法［14，15］。地五养肝胶囊体现“补肾生髓成肝”治疗法则。该方中熟地能甘温补肾而养阴，五味子能增强补肾的功能，两药配合以补肾为主;茵陈清热利湿退黄为主药，姜黄辛温通络、活血化瘀为辅药，生甘草清热解毒，合为三泻。五味子配甘草清热养阴、酸甘化阴，合为佐使药，全方共奏补肾而养肝、利湿而退黄、活血而通络之功效。体现了“开源截流”、“补泻兼施”的配伍规律，通过减少肝组织损伤和促进肝再生修复的双重作用以治疗慢性肝病肝肾精虚证，实现肝脏组织结构重构和功能恢复。本实验结果表明，肝肾精虚/MSG-肝再生-大鼠肝再生过程紊乱，表现为早期 (术后第1天)肝再生过亢，而中晚期肝再生抑制，经地五养肝胶囊治疗后，在肝肾精虚证改善的同时，其肝再生紊乱过程得到一定程度的纠正。提示地五养肝胶囊可能通过下丘脑-垂体-肝轴影响肝肾精虚/MSG-肝再生-大鼠肝脏再生修复，其作用机制尚有进一步研究的空间。

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