HPLC测定前列安通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱的含量

高文学，刘斌

(山东省泰安市食品药品检验中心，山东 泰安 271000)

HPLC测定前列安通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱的含量

高文学1*，刘斌1

(山东省泰安市食品药品检验中心，山东 泰安 271000)

目的：建立高效液相色谱法测定前列安通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱含量的方法。方法：采用ZORBAX SB-C18色谱柱，流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH值至3.0)(16∶84)(A)-乙腈(B)采用梯度洗脱(0～10 min，A 100%；10～20 min，A 100%～90%；20～30 min，A 90%～85%；30～35 min，A 85%)；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL·min-1。结果：芍药苷在7.7～192 μg·mL-1线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为99.6%，RSD=1.1%；盐酸小檗碱在7.2～180 μg·mL-1线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为99.8%，RSD=0.5%。结论：实验结果准确，重现性好，可用于前列安通胶囊的质量控制。

高效液相色谱法；前列安通胶囊；盐酸小檗碱；芍药苷；含量

前列安通胶囊为黄柏、赤芍、丹参、桃仁、泽兰、乌药、王不留行、白芷组成的复方制剂，具有清热利湿，活血化瘀之功效。用于尿频，尿急，排尿不畅，小腹胀痛等湿热瘀阻证。其中赤芍和黄柏为主药，其有效成分分别为芍药苷和盐酸小檗碱。该药质量标准[1]只有原儿茶醛的含量测定方法，为了控制其产品质量，作者采用高效液相色谱法测定前列安通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱的含量，实验结果准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 Series高效液相色谱仪(Agilent 1200 四元泵，VWD检测器)，Agilent Chemstation工作站；十万分之一电子天平(Mettler Toledo XS205)。

1.2 试药

芍药苷对照品(批号：110736-201136)、盐酸小檗碱对照品(批号：110713-200911),购自中国食品药品检定研究院；前列安通胶囊(赤峰天奇制药有限责任公司，0.38g/粒，批号：20120103，20120302，20120902)。乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH值至3.0)(16∶84)(A)-乙腈(B)采用梯度洗脱(0～10 min，A 100%；10～20 min，A 100%～90%；20～30 min，A 90%～85%；30～35 min，A 85%)；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于6 000；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于8 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液和对照品溶液 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为384 μg·mL-1的芍药苷对照品贮备液；精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成质量浓度为361 μg·mL-1的盐酸小檗碱对照品贮备液。再精密量取贮备液适量，加甲醇制成含芍药苷76.8 μg·mL-1和盐酸小檗碱72.2 μg·mL-1的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品，研细，精密称定0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液100 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300 W，频率50 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 按制剂制备方法，制备不含赤芍和黄柏的阴性样品，按2.2.2项下的制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 空白试验

按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明阴性对照溶液在与芍药苷和盐酸小檗碱峰对照品溶液相同保留时间处无干扰峰出现，处方中其他药味对测定结果无影响。HPLC图谱见图1。

1.芍药苷；2.盐酸小檗碱A.混合对照品 B.样品 C.阴性样品图1 前列安通胶囊及对照品HPLC图

2.4 线性关系考察

分别精密吸取芍药苷和盐酸小檗碱对照品储备液各1，2，3，5，10，25 mL分别置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成不同浓度的混合对照品溶液，依法测定，记录色谱图，量取峰面积。以浓度(X，μg·mL-1)对峰面积(Y)进行线性回归。芍药苷回归方程为：Y=15.211X-11.501，r=0.999 9，芍药苷在7.7～192 μg·mL-1呈良好的线性关系；盐酸小檗碱的回归方程为：Y=49.903X-25.457，r=0.999 9，盐酸小檗碱在7.2～180 μg·mL-1呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

分别取混合对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，以峰面积考察精密度，计算芍药苷RSD=0.4%，盐酸小檗碱RSD=0.5%。

2.6 重复性试验

按供试品溶液制备方法项下，平行制备同一样品(批号：20120103)6份，依上述色谱条件依法进行测定，并分别计算含量，芍药苷RSD=0.7%，盐酸小檗碱RSD=0.7%。

2.7 稳定性试验

取供试品(批号：20120103)，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件分别在0，2，4，6，8，10，12，14 h依次进行测定，记录峰面积，计算芍药苷RSD=0.7%，盐酸小檗碱RSD=0.9%。

2.8 加样回收率试验

精密称取芍药苷对照品23.5 mg置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为芍药苷加样对照品溶液；精密称取盐酸小檗碱对照品77.7 mg置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为盐酸小檗碱加样对照品溶液。精密称取已知含量的样品(批号：20120103)0.08 g，0.10 g，0.12 g，分别精密加入芍药苷和盐酸小檗碱加样对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，平行2份，照2.2.2项下方法制成加样回收供试液，依上述色谱条件依法进行测定，并分别计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.9 样品测定

取本品3批样品及对照品，依法制备供试品溶液和对照品溶液，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法分别计算样品中芍药苷和盐酸小檗碱的含量。结果见表2。

表2 前列安通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱的含量测定 mg/粒

3 讨论

对芍药苷和盐酸小檗碱在190～360 nm的紫外吸收光谱进行考察，结果芍药苷在230 nm波长处有最大吸收，盐酸小檗碱在231，265，351 nm波长处有最大吸收，二者在230 nm处均有较高吸收，故选择230 nm作为检测波长。

参照相关文献[2-7]，比较了乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸和0.1%十二烷基磺酸钠混合溶液、乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲溶液3种流动相分别进行试验考察，结果以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH值至3.0)(16∶84)与乙腈为流动相，并进行梯度洗脱时，芍药苷和盐酸小檗碱均峰形良好，保留时间适宜，不受杂质峰的影响。

分别以甲醇、盐酸-甲醇(1∶100)溶液为溶剂，采取超声提取方法处理样品，比较发现芍药苷和盐酸小檗碱在酸性甲醇溶液中均较稳定，提取效果好。使用本法测定的结果准确，重复性好，基线平稳，可有效地控制前列安通胶囊的质量。

[1] 国家食品药品监督管理局.前列安通胶囊质量标准[S].YBZ03292009.2009.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：286，1069.

[3] 丁仕强.HPLC测定前列安通胶囊中芍药苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(23)：61-63.

[4] 王媛，崔彦.HPLC法测定前列安通胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].淮海医药，2012，30(2)：163-165.

[5] 唐洪梅，廖小红，何嘉仑.HPLC法测定肠激安制剂中芍药苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱[J].中成药，2012，34(5)：853-857.

[6] 杨燕飞.RP-HPLC同时测定坤泰胶囊中芍药苷、黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量[J].中成药，2010，32(6)：958-960.

[7] 刘惠军，杨骏，谢燕.HPLC法分别测定芍连胃乐片中芍药苷与盐酸小檗碱含量[J].中国药师，2008，11(7)：810-812.

DeterminationofPaeoniflorinandBerberineHydrochlorideinQianlieantongCapsulesbyHPLC

GAO Wen-xue*，LIU Bin

(TaianCenterforFoodandDrugControl，Taian271000)

Objective：To establish HPLC method for determination of paeoniflorin and berberine hydrochloride in Qianlieantong capsules.Methods：A stable HPLC method was established and the chromatography was accomplished on a ZORBAX SB-C18column，the mobile phase consisted of acetonitrile-0.05mol·L-1dipotassium hydrogen phosphate solution(adjusted pH to 3.0 with phosphoric acid)(16∶84)(A)- acetonitrile(B)in a gradient mode)0-10 min，A100%；10-20 min，A100%-90%；20-30 min，A90%～85%； 30～35min，A85%)，the detection wavelength was 230 nm and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results：The calibration curve of paeoniflorin was linear within a range of 7.7-192 μg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery was 99.6% with a corresponding RSD of 1.1%；The calibration curve of berberine hydrochloride was linear in range 7.2-180 μg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery was 99.8%，with a corresponding RSD of 0.5%.Conclusion：The method is accurate and reproducible，which can be used for the quality control of Qianlieantong capsules.

HPLC；Qianlieantong capsules；Paeoniflorin；Berberine hydrochloride；Content

2013-04-25)

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高文学，副主任药师，Tel：(0538)8334565，E-mail：liubin8247@sina.com