PTEN和P27kip1蛋白在胃癌及癌前病变中的表达和意义

鹿 强，臧爱民，冯树明

（1.河北大学附属医院病理科，河北保定 071000；2.河北省徐水县妇幼保健院内科，河北保定 072550）

胃癌是常见的恶性肿瘤之一，胃癌及癌前病变的发生是一个多基因、多步骤、多因素和多阶段综合作用的结果［1］。胃癌的发生、发展不仅与细胞的过度增殖有关，同时也和凋亡有密切关系［2］。第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、细胞周期素依赖激酶抑制剂蛋白（P27kip1）是细胞周期调控因子的重要成分，检测其在胃癌及癌前病变中的表达，旨在诊治胃癌提供理论及实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取河北大学附属医院2009年1月至2012年5月期间的50例胃癌手术切除标本，癌旁正常组织50例及癌前病变18例，其中肠上皮化生8例、不典型增生10例，每例选取蜡块4μm连续切片，进行常规HE染色和免疫组化染色。癌旁组织距瘤缘约5cm，均经病理学确认为正常组织作为对照。所有患者术前均未接受治疗，新鲜组织采用手术分离立即置于10%中性甲醛中，常规石蜡包埋。本研究中50例胃癌组中男30例，女20例，年龄32～78岁，平均55岁；18例胃癌前病变组中男12例，女6例，年龄30～58岁，平均44岁。所有切片均按全国胃癌协作组提出的标准，由具有丰富经验的病理科主任医师进行复检。

1.2 主要试剂 P27kip1鼠抗人单克隆抗体、兔抗人PTEN多克隆抗体（即用型）、光谱纯试剂（SP）盒及二氨基联苯胺（DAB）显色剂试剂盒购自北京新生物技术开发中心，免疫组化测定按试剂盒说明书进行各项指标检测。

1.3 实验方法 组织切片常规HE染色，均经病理学检查确诊，并根据中国抗癌学会胃癌分类（1990年）标准进行胃癌病理学分型，分为高、中、低分化腺癌及黏液癌，其他分为肠上皮化生、不典型增生。组织标本常规石蜡切片，经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，磷酸盐缓冲液（PBS）洗2次，每次3min。经梯度乙醇脱水至二甲苯，中性树脂封片，镜下观察结果。各步骤之间均以PBS洗3次，3min／次。每种抗体均设阳性和阴性对照，阳性对照为已知表达阳性的组织切片，阴性对照以PBS代替一抗。

1.4 结果判定标准 PTEN、P27kip1蛋白以细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞，染色结果以每张切片在400倍镜下均观察整体染色情况，选择有代表性的区域，随机读取100个细胞，阳性细胞率=阳性细胞数／总细胞数×100%。切片中阳性细胞率大于或等于5%为阳性病例，小于5%为阴性病例。

1.5 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件对PTEN、P27kip1蛋白表达应用χ2检验和校正χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PTEN在各组中表达 PTEN正常胃黏膜组阳性率98%，肠上皮化生组、不典型增生组阳性率分别为75%、70%，胃癌组阳性率58%，呈逐渐下降趋势（P＜0.01）。见表1，图1、2。

图1 PTEN在正常胃黏膜中表达（SP×100）

图2 PTEN在胃癌中表达（SP×100）

2.2 P27kip1在各组中表达 P27kip1正常组阳性率98%，肠上皮化生组阳性率75%，不典型增生组阳性率40%，胃癌组阳性率38%，呈逐渐下降趋势（P＜0.01）。见表2，图3、4。

表2 P27kip1在各组中表达

图3 P27kip1在正常胃黏膜中表达（SP×100）

图4 P27kip1在胃癌中表达（SP×100）

2.3 胃癌病理组织不同类型PTEN、P27kip1的表达 PTEN的阳性率在胃癌高中分化、低未分化、黏液癌中分别为80.00%、57.7%、22.22%，组间卡方检验P=0.021，P＜0.05，差异有统计学意义；P27kip1的阳性率在胃癌高中分化、低未分化、黏液癌分别为13.3%、50%、55.55%，组间卡方检验P=0.037，P＜0.05，差异有统计学意义，见表3。

表3 胃癌病理组织不同类型PTEN、P27kip1的表达

2.4 胃癌中PTEN和P27kip1之间的表达关系 50例胃癌患者中PTEN和p27kip1表达的具有正相关性，差异有统计学意义（χ2=9.975，P＜0.05），见表4。

表4 胃癌中PTEN与p27kip1的表达关系（n）

3 讨 论

3.1 PTEN表达与胃癌的关系 PTEN是1997年由3个研究小组克隆到的新的肿瘤抑癌基因［3］，是位于人染色体10q23.3的抑癌基因。实验证明细胞质、核膜及核内都有表达［4］，其编码产物为403个氨基酸组成的蛋白质，通过使磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸去磷酸化而抑制磷脂酰肌醇-3激酶依赖的蛋白激酶B（Akt），导致细胞增殖抑制和细胞凋亡，被认为是调节细胞凋亡和肿瘤发生的关键因素［5］。当PTEN抑癌基因突变或缺失可能构成一个新的信号转导途径，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切［6］，PTEN蛋白高表达的胃癌细胞系，其黏附和迁移能力显著降低，目前认为PTEN可能通过降低细胞间的黏附、细胞的运动性和血管形成而参与胃癌演进，在调控细胞的生长发育和凋亡、细胞信号转导及细胞浸润、转移过程中起重要的作用［7］。

本研究结果PTEN在胃正常组织、肠上皮化生、不典型增生、胃癌中的阳性表达率呈逐渐下降趋势，与Yang等［8］的研究结果相近似，正常胃黏膜及肠化生组织中的PTEN蛋白表达阳性率明显高于不典型增生及胃癌组织。

PTEN低表达的肿瘤细胞更易浸润、转移，因而侵袭性强、恶性度高、预后差［9］，本研究结果PTEN阳性率与胃癌组织类型密切相关，胃高中分化腺癌组织中PTEN阳性率明显高于胃低分化腺癌组织，有显著差异，这可能是基因水平改变的结果，提示PTEN的检测，可能为判断胃癌患者的恶性程度及预后提供依据。相关研究表明PTEN的表达与患者3年生存率相关，表达缺失者生存率低，是影响胃癌患者预后的生物学指标之一［10］。

3.2 P27kip1表达与胃癌的关系 P27kip1是细胞周期素依赖激酶抑制剂（CDKIs）家族成员之一，P27kip1主要定位于胞核，但在胞浆和胞核中均有表达［11］，对肿瘤细胞的增殖起负性调节的作用，低表达加速肿瘤细胞合成增多，促使肿瘤发展［12］，P27kip1对细胞周期负性调控作用主要是通过抑制CDKIs复合物的激活或抑制已激活的CDKIs复合物的活性来实现的，使得细胞生长停滞，从而调控着细胞的生存与增殖。目前研究证实在多种肿瘤组织中存在P27kip1的异常表达［13］，它不但直接调控细胞周期，还作为胞外刺激信号的潜在媒介来调控细胞周期，与肿瘤的发生、发展及侵袭密切相关。

本研究结果P27kip1在胃癌、肠上皮化生、不典型增生（P＜0.01）低表达较显著，在胃癌高、中、低、未分化、黏液腺癌表达（P＜0.05），提示P27kip1表达下调可能影响胃癌分化程度及侵袭能力，与胃癌浸润深度、淋巴结转移、分化程度呈负相关，这一研究结果与Ohtani等［14］研究发现P27kip1基因缺失导致的P27kip1蛋白表达缺失，与胃癌进展和预后密切相关一致。

3.3 胃癌中PTEN与p27kip1表达的关系 本研究结果表明在胃癌中PTEN的表达与P27kip1表达呈正相关，PTEN低表达可降低P27kip1表达。P27kip1是PTEN调节细胞周期的下游信号分子，PTEN可以使P27kip1去磷酸化，降低其在细胞中的分解代谢水平，负性调控细胞周期［15］，在胃癌的发生、发展过程中，PTEN和P27kip1可能起着协同的作用，PTEN和P27kip1的表达可作为诊断胃癌的一个重要依据。

综上所述，该检测PTEN、P27kip1蛋白表达下调与胃癌的发生、发展方式呈正相关，对胃癌的早期诊断、治疗、判断预后提供了实验依据，具有重要指导意义。

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