HPLC测定三子降酶胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

杨荣艳，宋瑩，张聪

(四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000)

中药工业

HPLC测定三子降酶胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

杨荣艳*，宋瑩，张聪

(四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000)

目的：建立HPLC测定三子降酶胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量。方法：色谱柱Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水梯度洗脱系统，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为203 nm，柱温为25 ℃，进样量为10 μL。结果：三七皂苷R1和人参皂苷Rg1分别在7.9～126.4 μg·mL-1，25.6～409.6 μg·mL-1线性关系良好。三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl平均回收率分别为98.43%，99.01%，RSD分别为1.7%，1.4%。结论：本方法简便、准确、重现性好，可用于三子降酶胶囊的质量控制。

三子降酶胶囊；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；高效液相色谱；含量测定

三子降酶胶囊是由三七、五味子、决明子、女贞子4味中药组成的复方制剂，具有保肝降酶功效，用于慢性肝炎及早期肝硬化所引起的转氨酶升高。该制剂为吉林省食品药品监督管理局批准的一类医院制剂(批准文号：Z2006C010)，标准未对其中的有效成分进行含量测定[1]。三七为处方组成中贵重药材之一，归肝、胃经，具有散瘀止痛、消肿定痛功能。为了控制该制剂的质量，笔者采用HPLC测定该制剂中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津2010AHT全自动高效液相色谱仪；紫外检测器；CLASS-VP色谱工作站；岛津UV-260可见-紫外分光光度计。

1.2 试药

人参皂苷Rg1对照品、三七皂苷R1对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110703-200424、110745-200415)；三子降酶胶囊(吉林省公主岭市国文医院制剂室，批号：20110301，20110307，20110312，规格：0.3 g/粒)；阴性对照为本室自制；乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱Zorbax SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈(A)-水(B)梯度系统。流速：1.0 mL·min-1，检测波长：203 nm，进样量：10 μL，柱温：25 ℃。梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.2 对照品溶液的制备

分别取三七皂苷R1对照品和人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含三七皂苷R10.15 mg、人参皂苷Rg10.50 mg的溶液。

2.3 供试品溶液制备[2]

取本品适量，混匀，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，放置过夜，置80 ℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备

按处方取不含三七的各味中药，按2.3供试品溶液制备成阴性对照品溶液。

2.5 系统适用性试验

取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，分别在上述色谱条件测定，记录色谱图，见图1。结果表明三七皂苷R1和人参皂苷Rg1与其相邻峰之间分离度均大于1.5。阴性样品不干扰测定。

1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg1A.三七皂苷R1对照品 B.人参皂苷Rg1对照品 C.供试品 D.阴性对照品图1 三子降酶胶囊及对照品HPLC图

2.6 线性关系考察

精密量取三七皂苷R1对照品溶液0.5，1，3，5，8 mL，分别置10 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。再精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液0.5，1，3，5，8 mL，分别置10 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。在上述色谱条件下分别进样10 μL，记录色谱图。以对照品浓度为横坐标(X)，色谱峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。计算三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的回归方程分别为：Y=3 124.6X-131.27，r=0.999 8；Y=4.52×103X-3 296.8，r=0.999 9。结果表明三七皂苷R1和人参皂苷Rg1分别在7.9～126.4 μg·mL-1，25.6～409.6 μg·mL-1线性关系良好。

2.7 精密度试验

分别取上述三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，记录三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl的峰面积，结果RSD分别为0.5%和0.6%。

2.8 重复性试验

精密称取同一批号样品(批号：20110301)6份，按2.3项下方法操作，在上述色谱条件下进行测定，计算三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl含量的RSD分别为1.2%和1.6%。

2.9 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h进样10 μL，计算样品峰面积的RSD分别为2.2%和2.4%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

2.10 回收率试验

精密称取已知含量的样品6份，每份约0.75 g，分别精密加入上述三七皂苷Rl对照品溶液2 mL和人参皂苷Rgl对照品溶液1 mL，照供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件依法测定，计算三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl回收率，结果见表2。平均回收率分别为98.43%，99.01%，RSD分别为1.7%，1.4%。结果见表2。

表2 三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl加样回收率试验

2.11 样品含量测定

取20110301，20110307，20110312 3批样品，按供试品制备方法，每批样品制备2份，依法测定三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl总含量，结果分别为0.69，0.63，0.60 mg/粒。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取三七皂苷R1和人参皂苷Rg1对照品溶液，用UV-260可见-紫外分光光度计在200～400 nm扫描，在203 nm处均有较强吸收峰，故选用203 nm作为检测波长。

3.2 溶剂和提取方法的选择

采用《中国药典》2010年版三七药材含量测定项下的供试品溶液制备方法，此方法操作简便，结果准确。

3.3 流动相和柱温的选择

据查阅文献资料[3-5]，三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量测定均采用乙腈-水梯度系统，因此本实验选用乙腈-水梯度系统，根据采用的色谱柱调整流动相的比例，不同比例的流动相对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的分离具有显著影响。孙小玲[6]认为柱温对样品的峰形影响较大，经考察采用25 ℃条件对样品进行分析。

3.4 方法评价

该方法简便、准确、专属性强、重现性好，能有效控制该制剂的质量。

[1] 吉林省食品药品监督管理局.医疗机构制剂标准[S].JLZJ-ZB-0010-2006.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：11.

[3] 阎萍，谷雨龙，倪健，等.HPLC测定止鼾胶囊中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1含量[J].中国现代中药，2007，9(9)：21-23.

[4] 姚曦，何伟，李勇，等.HPLC法测定复方贞术调脂胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1的含量[J].中国药房，2011，22(15)：1398-1400.

[5] 来国防，杨冬，杜江，等.HPLC法测定田七痛经散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1的含量[J].中国药师，2010，13(1)：28-29.

[6] 孙小玲.HPLC法测定复方三七维康胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rbl、Rgl的含量[J].中国药师，2013，16(3)：349-350.

DeterminationofNotoginsenosideR1andGinsenosideRg1inSanzijiangmeiCapsulesbyHPLC

YANG Rong-yan*，SONG Ying，ZHANG Cong

(SipingFoodandDrugControlInstitute，Siping136000,China)

Objective：To establish HPLC method for the determining of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1in Sanzi jiangmei Capsules.Methods：The Zorbax SB-C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used.The mobile phase was acetonitrile-water.The flow rate was 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 203 nm and column temperature was 25 ℃.Results：The linear range of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1were 7.9-126.4 μg·mL-1，25.6-409.6 μg·mL-1respectively.The average recovery rate of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1were 98.43%，99.01%(RSD=1.7%，1.4%)respectively.Conclusion：This method is simple，accurate and reproductive，which can be used for the quality control of Sanzi jiangmei Capsules.

Sanzi jiangmei Capsules；NotoginsenosidebR1；Ginsenoside Rg1；HPLC；Determination

2013-03-05)

*

杨荣艳，主管药师，主要从事药品质量标准研究；E-mail：yry_lg@126.com