板翘解毒颗粒质量标准研究

叶伟兵 赵琦 陈健媚

（广州市荔湾区第二人民医院，广东 广州510160）

板翘解毒颗粒剂是由我院制剂板翘解毒口服液经剂型改良后制成，由板蓝根、石膏、连翘、知母等组方而成，主要用于风热感冒、温病发热、上呼吸道感染、腮腺炎及其他病毒感染。为提高制剂质量，本研究采用薄层色谱法（TLC）对连翘、板蓝根及知母进行定性研究，并应用高效液相色谱法（HPLC）建立制剂中连翘苷的含量测定方法。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（HP1100，安捷伦）；二极管阵列检测器（安捷伦）；定量毛细管（日本）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；连翘苷对照品（批号：0821-9903，供含量测定用），连翘对照药材（批号：908-9908），板蓝根对照药材（批号：177-200303），菝葜皂苷元（批号：744-9904，供鉴别用），均购自原中国药品生物制品检定所；板翘解毒颗粒，自制，规格为10 g/袋，批号：111231、120101、120102；阴性样品（按处方工艺制得缺味样品）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 连翘的鉴别

取本品5 g，研细，加稀乙醇20 mL，超声处理（300 w，35 kHz）20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺连翘阴性对照样品5 g，同法制成阴性对照溶液。再取连翘对照药材0.5 g，加稀乙醇 20 mL，超声处理20 min，同法制成对照药材溶液。分别吸取供试品溶液、缺连翘阴性对照溶液及对照药材溶液各10 μL分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇（7∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1。

图1 连翘TLC图

2.2 板蓝根的鉴别

取缺板蓝根阴性对照5 g，研细，按2.1项下同法制成阴性对照溶液；另取板蓝根对照药材1 g，按2.1项下同法制成对照药材溶液。吸取2.1项下制备的供试品溶液、缺板蓝根阴性对照溶液及对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G板上，以正丁醇-无水乙酸-水（19∶5∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图2。

图2 板蓝根TLC图

2.3 知母的鉴别

取本品10 g，加温水 20 mL，搅拌使溶解完全，加乙酸乙酯振摇提取 3次，每次20 mL，取水层溶液，加盐酸3 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液加三氯甲烷振摇提取3次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，加氨试液洗涤2次，每次20 mL，再用水洗涤 3次，每次20 mL，取三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣用三氯甲烷1 mL溶解，作为供试品溶液。另取缺知母阴性对照10 g，同法制成阴性对照溶液，再取菝葜皂苷元对照品，加三氯甲烷制成每1 mL含3 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液、缺知母阴性对照溶液及对照品溶液各 10μL，分别点于同一硅胶G板上，以苯-丙酮（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图3。

图3 知母TLC图

2.4 连翘苷的含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱Kromasil 100-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（22∶78），流速为1.0 mL/min，检测波长为277 nm，柱温为30℃，进样量为20 μL，理论板数按连翘苷计算应不低于3 000。

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷适量，用70%甲醇溶解并配制成每1 mL含100 μg的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备[1-2]取本品5 g，精密称定，加热水20 mL，搅拌使完全溶解，加乙酸乙酯振摇提取6次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加70%甲醇溶解，置10 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得。取缺连翘阴性样品，同法制备阴性对照溶液。按上述色谱条件进行测定，结果表明阴性无干扰。见图4。

图4 对照品、阴性对照和板翘解毒颗粒HPLC图

2.4.4 线性关系 分别精密吸取对照品溶液1，2，5，10，20，30，40 μL 注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，测定结果以进样量X（μg）为横坐标，以色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：

Y=741.487X－9.228，r=0.999 9

线性范围为 0.10～ 4.00 μg。

2.4.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液20 μL，重复进样 6次，测定峰面积，结果连翘苷峰面积的RSD为0.69%，表示仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液各20 μL，分别在 0，6，12，18，24 h 进样，按上述色谱条件测定峰面积，结果连翘苷峰面积的RSD为1.39%，表明供试品溶液在24 h内较稳定。

2.4.7 重复性试验 取同一批号颗粒6份，每份5 g，精密称定，按2.4.3项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量，结果连翘苷的平均含量为0.153 mg/g，RSD为1.82%，表明本法具有良好的重复性。

2.4.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批号样品（连翘苷含量 0.153 mg/g）6份，每份 2.5 g，精密称定，再分别精密加入含连翘苷对照品水溶液（0.078 mg/mL）5 mL，按供试品溶液的制备及样品的测定方法操作，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=2）

2.4.9 样品的测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，进样测定含量。批号为111231，120101，120102的3批样品中，连翘苷含量分别为0.153，0.143，0.144 mg/g。

3 讨论

连翘TLC鉴别展开剂曾尝试三氯甲烷-甲醇（8∶1）、三氯甲烷-甲醇（7∶1）[2]及三氯甲烷-甲醇-无水乙酸（17∶2∶1）[3]，最后确定采用三氯甲烷-甲醇（7∶1），并优化了供试品溶液的制备方法。板蓝根TLC鉴别展开剂采用文献方法[2，4-5]，确定了正丁醇-无水乙酸-水（19∶5∶5）。 知母展开剂采用文献方法[2，6]，确定了苯-丙酮（9∶1）。 结果显示阴性对照均无干扰，专属性较好。

连翘苷含量测定方法中，采用乙腈-水为流动相，曾比较了多种比例的流动相[1-2，7-8]，结果乙腈-水为22∶78时，连翘苷分离度较好，峰形尖锐且较对称，不拖尾。该测定方法简便、快速、可靠，适用于板翘解毒颗粒的质量控制。

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