酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素在猪体内的药代动力学研究

朱晓娟，王华丽，齐 鹏，何继红，张国栋，李丙首，张 君，张 欣，巴利民，赵洪涛，吴家鑫，葛辛玫

［1．中国牧工商（集团）总公司，北京 丰台100070；2．中牧实业股份有限公司，北京 丰台100070；3．中国牧工商（集团）总公司研究院，北京 海淀100095］

乙酰异戊酰泰乐菌素是对泰乐菌素A组分进行3位乙酰化，4′位异戊酰化的泰乐菌素衍生物。通过细胞培养和生物转化方式，向一种耐热链霉菌ST．E1的发酵液中补入泰乐菌素溶液，从而生成一种低成本、安全性能高的制备高效泰乐菌素衍生物的方法［1］。这些衍生物有逐渐取代泰乐菌素的趋势［2］。其应用在治疗畜禽呼吸道及消化道疾病方面起到了不可替代的作用［3］。但是若水溶液中含有铁、铅等金属离子时，会使本品失效［4］（中华人民共和国兽药典第一部，2000）。

乙酰异戊酰泰乐菌素药动学研究国内报道较少，本研究探讨了健康猪口服AIV盐的药动学过程并阐明其药动学特征，旨在为临床制定合理的给药方案提供科学依据。

1 材料

AIV标准品，编号：zm1083，中牧实业股份有限公司兽药研究所；酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素（25%可溶性粉），内蒙中牧生物药业有限公司。乙腈，冰醋酸，醋酸铵均为分析纯；仪器：LC－2010Aht液相仪；试验动物：健康猪6头，体重20～25kg，购自北京海淀区苏家坨镇。

2 方法

2．1 色谱条件 色谱柱 Agilent TC－C18柱（150 mm×4．6mm，5μm ）；流动相：乙腈：0．15mol／L乙酸铵缓冲液＝49∶51（v／v），流速：1．0mL／min，检测波长：289nm，柱温：40℃，进样量：75μL。

2．2 样品处理 取洁净离心管，吸取血浆0．5mL，加入乙腈1．0mL，漩涡混合震荡2min，12 000r／min离心10min。取上层液，40℃水浴N2流吹干。残存物加200μL流动相溶解，漩涡混合2min，12 000r／min离心10min，上清液过滤进样测定。

2．3 标准曲线的制备 精密称AIV标准品置容量瓶中，加流动相配制成12．8μg／mL标准溶液。取7支2mL离心管各加入空白血浆，再依次加入AIV标准液制备成6．4、3．2、1．6、0．8、0．2、0．1、0．05 μg／mL的血药浓度，漩涡混匀，按2．2处理样品后，取75μL进样分析。记录色谱峰面积，回归计算出标准曲线方程。

2．4 精密度的测定 取空白血浆3份（各1mL），加入 AIV标准液配成0．1、0．8、3．2μg／mL 3种浓度，按2．2方法处理后，各浓度标准液在同1d内重复5次，连续测3d，计算色谱峰面积的日内、日间标准偏差。

2．5 回收率的测定 取空白血浆3份（各1mL），加入 AIV标准液配成0．1、0．8、3．2μg／mL 3种浓度，按2．2处理，重复测定含量4次，以添量法计算相对回收率。

2．6 给药方法及采血 AIV盐以20mg／kg的剂量给猪灌服，给药前前腔静脉采血5mL作空白对照，给药后0．25、0．50、0．75、1、1．5、2、3、4、6、8h前腔静脉采血5mL。按2．2处理样品，－20℃保存备用。

2．7 药动学参数计算 血药浓度－时间数据用Pk－Solution 2．0软件进行房室模型拟合，求得药动学参数。

3 结果与分析

3．1 色谱图 AIV出峰时间13．852min，杂峰不干扰，药峰分离良好。见图1。

3．2 标准曲线 血浆中AIV在0．05～6．4μg／mL浓度范围内与峰面积有良好的线性关系，峰面积（Y）为纵坐标，血药浓度（X）为横坐标绘制标准曲线方程：Y＝174276X＋15170，r＝0．9989。

3．3 精密度结果 血浆中AIV高、中、低3种浓度的日内精密度和日间精密度均小于5%，符合要求。见表1。

3．4 回收率结果 血浆中AIV高、中、低3种浓度的回收率均大于80%，符合要求。见表2。

3．5 药时曲线结果 最佳药时－曲线方程和曲线图分别为：C＝0．654·e－2．0593·t＋0．9813·e－3．0973·t－1．6353·e－63．3197·t。见图2。

图1 高效液相色谱图

表1 精密度测定结果

表2 回收率测定

图2 药－时曲线图

3．6 药物动力学参数 药物学参数见表3。

表3 药物动力学参数

4 讨论

高效液相色谱法（HPLC）在目前国内外药物检测很常用。Prats［5］等对泰乐菌素在猪体内的药物动力学报道。Atefd［6］等对泰乐菌素在山羊体内的药物动力学进行研究。Kowalski［7］等对泰乐菌素在鸡体内的药物动力学进行研究。曾子建［8］将酒石酸泰乐菌素以25mg／kg、7．5mg／kg、10mg／kg给各只头本地鸡、猪、山羊1次肌肉注射，结果显示，肌肉注射泰乐菌素在鸡、猪、山羊体内的吸收半衰期、达峰时间均较短，但在不同种属间差异较大。

本试验采用高效液相色谱法，猪口服（20mg／kg体重）AIV药物浓度－时间变化规律呈有吸收因素二室药代动力学模型。吸收半衰期（t1／2Ka）为0．0149±0．0127d，消除半衰期（t1／2Ke）为0．1138±0．0555d，药时曲线下面积（AUC）为0．6045±0．0683（μg／mL）·d；达峰时间 Tmax为0．045±0．019d。注意合理科学用药，就能达到理想效果。

［1］ Arisawa A，Kawamura N，Tsunekawa H，etal．Cloning and Nucleotide Sequences of Two Genes Involved in the 4″＇－O－Acylation of Macrolide Antibiotics from Streptomyces thermotolerans［J］．Biosci Biotech Biochem，1993，57（12）：2020－2025．

［2］ 赵东峰，任翔，朱丽，等．泰乐菌素及其衍生物研究进展［J］．医药产业咨询，2006，3（15）：46－48．

［3］ 郑敏，牛志强．兽用大环内酯类抗生素的应用概述［J］．中国动物保健，2009（12）：47－49．

［4］ 中国兽药典委员会．中华人民共和国兽药典第一部［M］．北京：化学工业出版社，2000：11．

［5］ Prats C，Korehi E L G，Francesch R，etal．Disposition kinetics of tylson administered intravenously and intramucularly to pigs［J］．Res Vet Sci，2002，73：141－144．

［6］ Atef M，Youssef S A，Atta A H，etal．Disposition of tyinsin in goats［J］．Bri Vet，1991，147（3）：207－215．

［7］ Kowalski C，Rolinski Z，Zan R，etal．Pharmacokinetics of tylosin in broiler chickens［J］．PoL J Vet Sci，2002，44（5）：127－130．

［8］ 曾子建，李逐波，古淑英，等．酒石酸泰乐菌素在鸡猪山羊体内的药动学规律及肌肉药残量研究［J］．四川畜牧兽医学院学报，2000，14（2）：17－19．