不同产地不同采收期岩陀药材中槲皮素的含量测定

金 杨，王 燕

（1．大理州中医医院，云南大理 671000；2．大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

岩陀为虎耳草科植物西南鬼灯擎Rodgersia sambucifolia Hemsl.或羽叶鬼灯擎Rodgersia pinnata Hemsl.的干燥根茎，主产于云南、贵州、山西、四川等地〔1〕。具有消炎、收敛、祛风除湿的功效，对肠炎、菌痢、感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血、老年性支气管炎等常见疾病有较好的疗效，故在民间广泛应用。对其有效成分之一的岩白菜素研究已有大量文献报道〔2-6〕，但对岩陀中槲皮素方面的相关研究报道却很罕见。槲皮素具有降低血脂、降低血管脆性、抗炎、抗菌、抗过敏、抗自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗癌、延缓衰老、抗病毒；泻下、增强免疫、解痉等作用〔7-9〕。因此，本文收集不同产地不同采收期的岩陀药材，对其中具有广泛生理活性的槲皮素采用HPLC法进行含量测定〔10〕，为岩陀资源的合理应用、保护，更好地控制岩陀药材的质量以及进一步对该药材进行开发研究提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AD型HPLC系统（日本岛津公司，包括CTO-20AC柱温箱、CBM-20A系统控制器、SPD-M20A二极管阵列检测器、LC solution工作站）；Sartorius BS 110S电子天平（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试药 槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406）；甲醇为色谱纯（美国Tidea公司）；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯；实验所用岩陀药材均由大理学院药学与化学学院生药教研室周浓副教授鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：DiamonsilC18（4.6 mm×200mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%磷酸溶液（50∶50）；检测波长：370 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。理论塔板数按槲皮素峰计不低于4000。对照品及样品色谱。见图1。

2.4 供试品溶液制备方法的考察

2.4.1 检测波长的选择 用SPD（二级管阵列检测器）对槲皮素对照品溶液和供试品溶液进行190～800 nm范围的光谱扫描，见图2-3。从图中可知，槲皮素对照品溶液和供试品溶液在370 nm都有一个比较明显且无干扰的单峰，从槲皮素峰纯度值大于0.999可知，本实验所采用的检测条件合理可行，在370 nm处无其他杂质峰的干扰。因此，将370 nm作为槲皮素含量测定的波长。

图1 对照品及样品色谱图

图2 槲皮素对照品溶液的光谱和峰纯度扫描结果

2.2 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的槲皮素对照品11.56 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取该溶液5 mL至50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取该溶液2 mL至10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.004624 mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取各编号的岩陀粉末（过4号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%HCl（4∶1）混合溶液50 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流1 h，冷却，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4.2 供试品溶液提取时间的考察 取岩陀2号样品1 g各5份，精密称定，分别回流不同的时间制备供试品溶液，进样测定。结果发现回流1 h后，槲皮素含量无明显增加，因此供试品溶液提取时间选为回流1 h。见表1。

表1 不同提取时间考察结果

2.5 线性关系考察 分别精密吸取槲皮素对照品溶液（C=0.004624 mg/mL）1、2、3、4、5、6 μL进样，以槲皮素进样量（X）为横坐标，色谱峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得：Y=7497441.97X－6927.93（r=0.9999），结果表明槲皮素在0.004624～0.02774 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密吸取槲皮素对照品溶液（C=0.004624 mg/mL）10 μL，连续进样6次测定，色谱峰面积的RSD为0.12%。

2.7 稳定性试验 取岩陀2号样品1 g，精密称定，分别于2、3、4、5、6、24 h进样测定，色谱峰面积的RSD为0.59%，表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。

2.8 重复性试验 精密称定岩陀2号样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μL进行测定，计算槲皮素含量，其RSD为1.43%，表明方法重复性良好。见表2。

表2 重复性试验结果

2.9 加样回收率试验 精密称定已知槲皮素含量（0.1788 mg/g）的岩陀2号样品各6份，等量加入槲皮素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率。槲皮素的平均回收率为96.77%。RSD为1.83%。槲皮素回收率试验结果见表3。

表3 槲皮素回收率试验测定结果

2.10 耐用性试验 分别采用3支不同品牌的C18色谱柱对同一岩陀2号样品进行测定，槲皮素含量平均值为0.1777 mg/g，RSD为2.38%。表明该方法的耐用性良好。见表4。

表4 耐用性试验结果

2.11 含量测定 取各编号岩陀药材，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，进样测定，以外标法计算供试品中槲皮素含量，各编号药材平行操作3份。见表5。

表5 不同产地不同采收期岩陀药材中槲皮素的含量（n=3）

3 讨论

从实验数据上看，不同产地相同采收期以及相同产地不同采收期的岩陀药材中槲皮素的含量相差较大，提示我们在用药时应注意产地、采收期与药材质量的关系。相同采收期中以云南鹤庆产地的岩陀含槲皮素最高，贵州水城的较低；同一产区不同采收月份槲皮素的含量大小顺序为：9月＞8月＞7月＞10月＞6月＞3月。根据测定结果，可初步确定岩陀的最佳采收时期为秋季，即7月开始采收，10月结束，其中9月槲皮素的含量最高。

本实验以甲醇-0.5%磷酸溶液（50∶50）为流动相，槲皮素峰可以达到基线分离，峰形对称，分离度好，采用370 nm作为检测波长，可以和药材中其它杂质峰分离完全，得到的峰纯度值较高。本法简便、准确、重复性好，方法学考察均符合要求。

本课题组一直致力于岩陀药材的开发研究，对该药材的指纹图谱、质量标准、岩白菜素提取工艺优化及其含量测定等都有相应研究。本实验建立岩陀药材中槲皮素的含量测定方法为该药材多指标成分的检测控制提供科学依据，对该药材的实际开发研究提供实验依据。岩陀药材中岩白菜素和槲皮素的含量变化趋势在不同产地不同采收期的情况下是否趋于一致，有待下一阶段的研究。

〔1〕王燕，金杨，刘振琪.岩陀中岩白菜素提取工艺优化的探索〔J〕.大理学院学报，2012，11（9）：8-11.

〔2〕金杨，王燕.正交试验优选复方岩白菜素滴丸制备工艺〔J〕.中国药房，2011，22（7）：614-615.

〔3〕王燕，鲍家科，金杨，等.岩陀药材质量标准研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2011，17（10）：85-88.

〔4〕张丽艳，李燕，杨玉琴，等.贵州虎耳草的质量对比研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2010，16（18）：57-59.

〔5〕夏从龙，段新瑜，何华斌，等.民族药岩陀药材中岩白菜素的高效液相色谱定量分析〔J〕.时珍国医国药，2009，20（2）：289-290.

〔6〕施贵荣，李冬梅，刘光明.西南鬼灯檠的化学成分研究〔J〕.大理学院学报，2008，7（4）：1-2.

〔7〕谢梅林，顾振纶，钱曾年.槲皮素的抗活性氧作用〔J〕.中国野生植物资源，1997，2（1）：9.

〔8〕蔡正军，但飞军，王威，等．超声提取鬼灯擎中岩白菜素的最佳工艺研究〔J〕．中国现代应用药学杂志，2009，26（7）：559-561.

〔9〕丁家欣，张立石，张玲，等.虎耳草提取物对前列腺癌细胞凋亡的影响〔J〕.中国中医基础医杂志，2005，12（11）：106-107.

〔10〕Petrick T.A DFT study of reactivity of OH group in quercetin and taxifolin antioxidants：the specificity of 3-OH site〔J〕.Food Chemistry，2006，97：679-688.