左卡尼汀减轻大鼠小肠缺血再灌注损伤

劳华毅，张靖岩，蒋 凯，张 峰，佟立权

(哈尔滨医科大学附属第五院普外科，黑龙江大庆163316)

小肠缺血再灌注(I/R)损伤，如肠系膜血管栓塞、肠扭转及小肠移植及休克等，是导致患者不能顺利康复的关键。既往研究表明L-carnitine对肾脏［1］I/R损伤有保护作用，但对小肠的I/R损伤研究尚未见报道。本研究探讨L-carnitine对大鼠小肠I/R损伤的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂和动物:雄性Wistar大鼠30只，体质量(250±30)g，［清洁级别，上海斯莱克实验动物有限公司许可证号:SCK(沪)2012-0002］。L-carnitine注射剂(山东瑞阳制药有限公司);SOD和MDA(上海越研生物科技有限公司)。DAO试剂盒(南京建成生物工程研究所)。BAX和BCL-2抗体(北京中山生物技术有限公司)。

1.2 动物分组及处理:动物随机分3组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、L-carnitine干预组(L组)。术前12 h禁食，自由饮水。I/R组术前10 min给予等量0.9%氯化钠注射液。L组成模术前10 min于股静脉缓慢推注L-carnitine(200 mg/kg)。S组仅切开腹部，游离肠系膜上动脉而不阻断，按文献方法制备小肠I/R模型［2］。腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg麻醉后，腹正中线切开，夹闭肠系膜上动脉根部1 h后，再灌注3 h，再次麻醉后，下腔静脉采血5 mL，注入离心管，然后立即活杀取材。

1.3 指标的检测

1.3.1 血清DAO，MDA及SOD测定:按试剂盒说明书操作。

1.3.2 病理形态学检查:冰冻机切片后，行HE染色。

1.3.3 Western blot法检测:BAX及BCL-2蛋白表达。

1.4 统计学分析:采用SPSS18.0统计软件进行统计学处理，结果以均数±标准差 (±s)表示，采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 各组血清SOD、MDA及DAO水平:与S组相比，I/R组血清SOD值明显降低(P＜0.05)，MDA及DAO值明显升高(P＜0.05)，与I/R组相比，L组各项指标均明显改善(P＜0.05)(表1)。

表1 血清SOD，MDA及DAO的变化Table 1 The serum concentrations of SOD，MDA and DAO(x ± s，n=10)

2.2 小肠组织形态学改变:S组绒毛排列整齐，血管周围结构正常，无出血，肌层纤维结构排列整齐，浆膜层正常，I/R组见部分小肠绒毛上皮断裂脱落，黏膜下水肿充血，大量炎性细胞浸润，基底层断裂;L组绒毛排列整齐，局部少量出血，坏死，中等量中性粒细胞浸润(图1)。

2.3 BAX及BCL-2蛋白表达:与S组相比，I/R组BAX蛋白表达上调，BCL-2蛋白表达下调。与I/R组相比，L组BAX蛋白表达下调，而BCL-2蛋白表达上调(P＜0.05)(图2)。

3 讨论

小肠I/R可引起的小肠及多器官损伤，其机制尚不清楚。近来，细胞凋亡和氧化应激在小肠I/R损伤中所起作用日益引起人们重视［3］。其中细胞凋亡过程中BCL-2蛋白家族扮演重要角色，BCL-2蛋白家族有两类，一类具有抗细胞凋亡作用，如BCL-2，另一类是BAX，可促进细胞凋亡。另外氧化应激引起I/R损伤会导致SOD活性降低，而MDA，DAO在I/R损伤后含量会明显增加。既往研究表明L-carnitine通过降低氧自由基水平、对抗凋亡等［3］多种作用来改善心肌I/R损伤。本实验观察到小肠蛋白BAX及BCL-2表达结果及氧化指标均与上述文献报道结果一致。

L-carnitine减轻肠I/R损伤可通过如下机制:1)提高SOD活性，清除氧自由基，降低MDA及DAO含量，抑制脂质过氧化反应，对抗氧自由基的损伤，改善小肠I/R损伤作用。2)上调BCL-2基因和下调BAX基因表达减轻大鼠小肠I/R时肠黏膜上皮细胞凋亡。

［1］Idrovo JP，Yang WL，et al．Stimulation of carnitine palmitoyltransferase 1 improves renal function and attenuates tissue damage after ischemia/reperfusion．［J］ Surg Res，2012，177:157 －164．

［2］佟立权，乔海泉，孟凡强．牛磺酸对大鼠小肠缺血再灌注后肝、肾损伤的保护作用［J］．中国普通外科杂志，2006，15:512－515．

［3］Liu Y，Yan S，Ji C，et al．Metabolomic changes and protective effect of(L)-carnitine in rat kidney ischemia/reperfusion injury．［J］ Kidney Blood Press Res，2012，35:373 －381．