高效液相色谱法测定补肾口服液中淫羊藿苷含量

刘宝磊，孙佳石

(1.昆明消防指挥学校校务部卫生队，云南 昆明 650208;2.云南省食品药品检验所，云南 昆明 650011)

补肾口服液由熟地、淫羊藿、肉苁蓉、人参等12味中药组方，用于早泄遗精、腰痛肾虚、麻木拘挛、风湿痹痛、筋骨痿软等症，具有补肾壮阳的功效[1]。方中君药淫羊藿所含淫羊藿苷为补肾口服液的主要成分。为了确保用药的安全有效，提高制剂质量的可控性，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定了补肾口服液中淫羊藿苷含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括 LC－10ATvp泵、SPD－10Avp检测器、SCL－10Avp系统控制器(日本岛津公司)。补肾口服液(自制);淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0737－200813);水为二次蒸馏水，色谱纯为乙腈，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:美国 Welch XB －C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱压为108 kgf;流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(35∶65);检测波长:270 nm;柱温:室温;流速:1.0mL/min;进样量:10 μL。在此条件下，淫羊藿苷理论板数不低于1 500，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取淫羊藿苷对照品2.32mg，精密称定，加入甲醇制成质量浓度为0.092 8 g/L的对照品溶液。取补肾口服液10mL，在分液漏斗中进行精密吸取，加入醋酸乙酯液+醋酸乙酯进行提取[2]，每次20mL，共3次，加50%乙醇使溶解，置10mL量瓶中定容，制得供试品溶液。取不含淫羊藿的阴性样品10mL，照供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

空白干扰试验:取2.2项下3种溶液，依法进样测定。结果空白无干扰，见图1。

线性关系考察:精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(0.092 8 g/L)1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 μL，按上述色谱条件进样测定，以对照品进样量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=1.916 ×106X －0.083 6×106，r=0.999 7(n=6)。结果表明，淫羊藿苷进样量在40.31～191.5μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

重复性试验:取同一批号的样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件进样测定。结果的 RSD为2.32%(n=5)，表明方法重复性良好。

精密度试验:吸取同一对照品溶液，按拟订的色谱条件连续进样测定。结果的 RSD为2.34%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液，分别在配制后0，2，4，6，8 h测定[3]。结果的 RSD为1.42%(n=5)，表明试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:吸取已测知含量的样品溶液5mL，再加入质量浓度为0.098 4 g/L的淫羊藿苷对照品溶液2.5mL，照供试品溶液制备方法制备待测溶液[4]，依法进样测定。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样加收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

在分液漏斗中进行，精密吸取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件进行测定，以外标一点法计算样品中淫羊藿苷的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(g/L)

3 讨论

淫羊藿中的淫羊藿苷含量较高，容易分离、提取，故以此作为定量指标[5]。波长选择时，对淫羊藿对照品溶液在200～300 nm波长范围进行了紫外扫描，结果在270 nm波长处淫羊藿苷呈最大吸收，且在供试品溶液色谱图中淫羊藿苷与其他组分达到了基线分离、灵敏度较高[6]，故以此为测定波长。提取样品时，应用甲醇超声的分离效果最好，可将淫羊藿苷完全提取，故选择甲醇作为提取溶剂;超声时间分别考察了30 min与45 min[7]，均能将淫羊藿苷提取完全，故选定30 min。分别以乙腈－0.1%磷酸溶液(35∶65)、乙腈－水(30∶70)为流动相，结果显示，前者分离度更好，保留时间适宜，分离度大于1.5，故确定为流动相。

采用文中建立的高效液相色谱法，可高效分离各组分，且空白干扰试验显示无干扰[8]，操作简便易行、灵敏度高、结果准确、重现性好、专属性强，因此可作为补肾口服液的质量控制方法。

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