高效液相色谱法测定注射用硫普罗宁中硫普罗宁含量

薛 君，庞 靖，徐 蕾

(1.山东省青岛市黄岛区中医院药剂科，山东 青岛 266500;2.山东省青岛市药品检验所，山东 青岛 266071)

注射用硫普罗宁的主要成分是硫普罗宁，临床广泛用于急慢性肝炎、脂肪肝、酒精肝以及药物性肝损害等疾病的治疗[1]。目前所有国标标准[2]均采用滴定法测定含量，本研究中首次建立的高效液相色谱法采用最常用的ODS柱，方法耐用性好，并且供试品溶液及对照品溶液的稳定性优于文献报道的方法[3]。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱系统(四元泵、紫外检测器、自动进样器、柱温箱及Chemstation工作站);Sartorius CP225D型分析天平。注射用硫普罗宁(批号为0110128，110205，110305)及辅料(甘露醇)均由南开允公药业有限公司提供，规格均为0.2 g;硫普罗宁对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为100991－200701);乙腈为色谱纯;磷酸为优级纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:水(用磷酸调节pH至2.2)－乙腈(90∶10);检测波长:210 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:20 μL。理论板数按硫普罗宁峰计算应不低于2 000。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取硫普罗宁对照品适量，用流动相溶解后稀释成每1 mL中约含硫普罗宁100 μg的溶液，即得对照品溶液。精密量取供试品适量，用流动相稀释制成每1 mL中约含硫普罗宁100 μg的溶液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取硫普罗宁对照品25.01 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取此溶液适量，用流动相分别稀释制成质量浓度为 25.01，50.02，100.04，200.08，400.16 μg/mL 的系列溶液;按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以对照品质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程 Y=15.124X+35.241，r=0.9999(n=5)。结果表明，硫普罗宁质量浓度在 25.01～400.16 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密量取同一对照品溶液，连续进样5次。结果硫普罗宁峰面积的 RSD=0.25%(n=5)，表明方法精密度良好。

稳定性试验:将对照品溶液及供试品溶液室温放置，在0，2，4，6，12，24，48 h 时取 20 μL 溶液进样。结果的 RSD 分别为0.84%和0.69%(n=7)，表明对照品溶液及供试品溶液在48 h内峰面积均无明显变化。

重复性试验:精密量取同一批样品(批号为110128)，依法制备供试品溶液6份，按含量测定方法稀释，测定。结果平均含量为98.1%，RSD=0.59% 。

加样回收试验:将空白辅料按处方比例混匀，备用。按80%，100%，120%3个不同浓度分别精密称取硫普罗宁对照品9份，按处方比例各加入上述备好的空白辅料中，混匀，照含量测定方法测定。结果见表1。

表1 硫普罗宁加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

依法制备对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算样品含量，结果批号分别为110128，110205，110305 的样品中含量分别为 98.1%，97.6% ，97.8%。

3 讨论

硫普罗宁及其降解产物均在210 nm附近有最大吸收，故检测波长选择210 nm。先后考察了3种流动相的适用性，即磷酸溶液(pH=3.2)－乙腈(90 ∶10)，磷酸溶液(pH=2.7)－乙腈(90∶10)，磷酸溶液(pH=2.2)－ 乙腈(90 ∶10)。结果表明，随着磷酸溶液pH的降低，主峰及杂质峰的峰形明显改善，分离度和理论板数均显著增大，由于流动相的pH应控制在2～8[4]，故选择文中系统为流动相。

文中采用的HPLC法，和文献方法[3]相比，能大大缩短主要杂质硫普罗宁的二硫化物的出峰时间，从而大幅度缩短了分析时间。

[1]张晓景.硫普罗宁的药理作用及临床应用 [J].中国药业，2005，14(8):91－92.

[2]YBH24242006，国家食品药品监督管理局标准[S].

[3]黄 静，尹燕杰，黄海伟，等.HPLC测定注射用硫普罗宁含量及其有关物质[J].中国药学杂志，2009，44(14):1 108 －1 111.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录28.