龙胆泻肝丸薄层色谱鉴别方法的研究与改进

赵森铭

(河南省洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471023)

龙胆泻肝汤方出自清代汪昂《医方集解》[1]，由龙胆、柴胡、黄芩、栀子、炙甘草等10味药材组方[2]，是中医治疗肝胆实火、三焦湿热的重要良药[3]，临床应用广泛，治疗效果颇佳，剂型亦较多，其中龙胆泻肝丸是常用剂型。2010年版《中国药典(一部)》龙胆泄肝丸薄层鉴别前处理方法操作烦琐复杂，不利于日常快速监督检验。笔者发现，按2010年版《中国药典(一部)》龙胆泄肝丸薄层鉴别2方法操作，即使无龙胆药材的阴性样品，在龙胆苦苷对照品相应位置也会显相同颜色的斑点，经证明此斑点为栀子苷的斑点，说明该法专属性不强[4－5]。因此，笔者建立了一个可以同时鉴别龙胆与栀子的薄层鉴别方法。在此方法的基础上，依据全信息薄层鉴别理论，经过研究和优化，进一步优化色谱条件，建立了同时检测栀子、龙胆、甘草和地黄薄层鉴别方法。经过试验，还建立了同时测定柴胡和当归薄层鉴别方法。通过2个薄层色谱法做到了对6味中药材进行鉴别，可大幅度节约分析成本，全面、直接地反映药品的质量。现报道如下。

1 仪器与试药

Reprostar 3型薄层数码成像系统，TLC pLate HeaterⅢ薄层加热板，940型TLC紫外灯箱，均为Camag公司生产;瑞士普利赛XT型电子天平;F80型高速万能粉碎机;KQ2200B型超声清洗仪器;HH－6型恒温水浴锅;GF254薄层板(自制，10 cm×10 cm，10 cm×20 cm)。龙胆泻肝丸(样品1，洛阳顺势药业有限公司，批号20111203;样品2，北京同仁堂药业有限公司，批号2082067;样品3，陕西香菊药业集团有限公司，批号20110606);龙胆苦苷对照品(批号0770－20004)，栀子苷对照品(批号0749－9203)，梓醇对照品(批号 0808－9602)，柴胡皂苷 d(批号 110778－200404)，甘草对照药材(批号120904－200410)，当归对照药材(批号120927－200613)，均来自于中国药品生物制品检定所;试剂、试药均为分析纯(天津市化学试剂三厂)。

2 方法与结果

2.1 龙胆、栀子、地黄、甘草

取3个厂家样品各10 g，研细，加石油醚(60～90℃)40 mL，超声处理20 min，滤过，药渣加甲醇30 mL，超声30 min，滤过，浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。同法自制缺龙胆阴性对照品溶液、缺栀子阴性对照品溶液、缺地黄阴性对照品溶液、缺甘草阴性对照品溶液。取梓醇对照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取甘草对照药材粉末0.5 g，加甲醇5 mL，超声处理10 min，取上清液，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述11种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水(5∶5∶1∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇，在105℃加热至斑点显色清晰，在紫外光灯(365 nm)下观察。结果供试品溶液色谱中，与梓醇对照品溶液色谱相应位置显浅蓝紫色斑点，与栀子苷对照品溶液色谱相应位置显橙红色斑点，与龙胆苦苷对照品溶液色谱相应位置显灰蓝色斑点，在与甘草对照药材溶液色谱相应位置上至少显1个相同的黄色斑点(见图1)。

图1 龙胆、栀子、地黄、甘草的薄层色谱图

2.2 柴胡、当归

取3个厂家样品各5 g，研细，加甲醇30 mL，超声30 min，滤过，浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。同法自制缺柴胡阴性对照品溶液、缺当归阴性对照品溶液。取柴胡皂苷d对照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取当归对照药材粉末0.5 g，加甲醇5 mL，超声处理10 min，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述7种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，氯仿 －甲醇(8.5 ∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(254 nm)下观察。供试品溶液色谱中，与柴胡皂苷d对照品溶液色谱和当归对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点(见图 2)。

图2 柴胡、当归的薄层色谱图

3 讨论

受已积累的高效液相色谱法启示，通过筛选前人报道的薄层色谱法，寻找到同时分离和鉴别多种中药成分的薄层色谱方法，是一次有意义的尝试，增加了利用薄层色谱法解决相似化合物同时进行薄层鉴别的信心。

本次研究是实践全信息薄层鉴别理论的一次尝试。全信息薄层鉴别理论是期望充分发挥薄层板的多层次、多成分分离检出性能。即将硅胶GF254薄层板展开后，先置紫外光灯(365 nm)下观察具荧光的成分，再置紫外光灯(254 nm)下观察具荧光熄灭作用的成分，然后在日光下观察各种带颜色的成分，经增荧光处理后，再置紫外光灯(365 nm)下观察增荧光的成分或紫外光灯(254 nm)下的荧光熄灭成分，最后与显色剂反应显色后，再次在紫外光灯(365 nm)下观察反应后呈现荧光的成分，在日光下观察反应显色后的各种颜色成分。这样利用1块薄层板展开1次，性质不同的化学成分虽有重叠，但在各自的检视条件下却互不干扰，呈现各自的斑点特征，可以同时收集7个层次以上的不同信息量。本研究中同时分离和鉴别栀子、龙胆、地黄和甘草，显色后紫外灯(365 nm)观察，同时测定柴胡和当归(紫外灯254 nm下观察)，使每一次薄层色谱法都提供多个成分信息。

薄层色谱法作为鉴别方法，比显微鉴别更容易掌握，人才培养周期更短。按国家中药新药注册要求，要实现10味以上中药组成的处方中味味药材有鉴别，许多质量标准依靠显微鉴别，可以做到味味药材有鉴别，但如果无法做显微鉴别的品种就必须依靠薄层色谱法鉴别。依靠薄层色谱法鉴别做到味味药材有鉴别，就必须改变目前烦琐、费时的鉴别方式，建立多个一测多评的薄层色谱方法，结合特殊药材薄层色谱方法，才能覆盖多组分中药成方制剂的每个成分，否则检测速度将无法与生产速度相匹配[6－7]。为此，本次研究探索性地用2个薄层色谱法做到6味中药材的鉴别，是一次有意义的尝试，供同行参考。

通过建立同时检测栀子、龙胆、地黄和甘草的薄层鉴别方法与同时检测柴胡和当归的薄层鉴别方法，可与2010年版《中国药典(一部)》龙胆泄肝丸含量测定项下同时测定栀子苷、龙胆苦苷、黄芩苷的含量的方法，形成新质量控制模式。这既有于利用高端仪器同时测定多种中药成分，也有可应用于快速检验初筛选时测定多种中药成分。本研究以一种全新的理论基础与技术思路，将薄层鉴别提升到一个新水平，扩大了其应用范围和深度，可推动薄层色谱鉴别的发展。

[1]段富津.方剂学[M].上海:上海科学技术出版社，1995:82－84.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:636－637.

[3]孙国祥，张静娴.系统指纹定量法鉴别龙胆泻肝丸质量[J].分析化学，2009，37(8):1 183 －1 187.

[4]吕武清，龙新华.中成药中药材的薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社，1997:160－173，178－189，383－389.

[5]刘瑞新.HPLC同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量[J].中成药，2007，29(8):1 170－1 172.

[6]郝 福，蒋 晔，李艳荣，等.HPLC法测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷和栀子苷[J].中草药，2006(12):1 108－1 109.

[7]严 红.HPLC法同时测定中药多种有效成分含量的应用[J].天津药学，2010，22(1):67－70.