环氧化酶2抑制剂联合化疗药对人肺癌裸鼠移植瘤生长和淋巴转移的影响

王 娜 (邢台市人民医院急诊科，河北 邢台 054000)

研究表明环氧化酶-2(COX-2)，血管内皮生长因子-C(VEGF-C)，血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)，生存素(surviving)及 β-连环素(β-catenin)与肿瘤的发生、发展、侵袭及转移密切相关，故目前许多实验室通过对上述指标的监测来判定抗肿瘤药物的效果及肿瘤的发展情况〔1〕。动物实验表明COX-2抑制剂能够抑制肿瘤的生长与转移，并增强化疗药物的效果〔2〕。本次观察COX-2抑制剂联合化疗药对人肺癌裸鼠移植瘤的生长和淋巴转移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 选取30只BALB/c雄性裸小鼠，体重20～25 g，均购自天津天垚生物科技有限公司，均在无特定病原体的IVC环境中饲养，所用饲料及饮用水均无菌。

1.2 方法 将人肺癌A549细胞置于DMEM培养基，培养基中含小牛血清、青霉素及链霉素，培养基放置于温度恒定为37℃，CO2浓度为5%的温箱内。待70% ～80%细胞贴壁生长并融合时，使用胰蛋白酶进行消化传代。挑取处于对数生长期的细胞再次进行消化与洗涤，使用不含牛血清的培养基对其进行稀释，并将细胞密度调整至1×107/ml。将完成培养的细胞制成细胞悬液，使用注射器装载2 ml上述细胞悬液注射至裸鼠右侧腋部皮下。待所有小鼠的移植瘤的平均直径生长至约4 mm后，将30只小鼠按随机数字表法随机分成实验组与对照组，两组均为15只。实验组腹腔注射奥沙利铂甘露醇注射液，每次 10 ml/kg，同时采用尼美舒利灌胃给药，剂量20 mg·kg－1·d－1。对照组仅接受腹腔注射奥沙利铂甘露醇注射液，剂量与实验组相同。每6 d测量1次小鼠移植瘤的体积，用游标卡尺量出肿瘤的长径(a)、短径(b)，用公式V=ab2/2计算体积，并绘制移植瘤的生长曲线。30 d后，将所有小鼠处死，切除移植瘤，分别使用免疫组化法与实时定量PCR法测定裸鼠移植瘤组织中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及 βcatenin蛋白的积分吸光度值与mRNA的表达水平。

1.3 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行分析，数据资料以±s表示，组间比较使用t检验，计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 两组肿瘤生长情况对比 用药30 d后，实验组移植瘤体积为(562.84±197.43)mm3，对照组为(812.35±105.74)mm3，两组移植瘤体积的差异比较有统计学意义(t=4.315，P＜0.05)。见图1。

2.2 两组移植瘤中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及β-catenin蛋白积分吸光度值及mRNA表达水平比较 见表1，表2。实验组移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及βcatenin蛋白的积分吸光度值及mRNA表达水平均高于对照组(P ＜0.05)。

表1 实验组与对照组移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的积分吸光度值比较(±s，n=15)

表1 实验组与对照组移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的积分吸光度值比较(±s，n=15)

-catenin实验组 8 412±1 496 8 403±1 445 8 415±1 813 5 513±1 488 8 32组别 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 8±1 734对照组 16 205±2 195 15 392±2 189 14 397±2 317 9 825±1 791 10 227±2 031 t值 11.362 10.320 7.870 7.172 2.754 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.010

表2 实验组与对照组移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表达水平对比(±s，n=15)

表2 实验组与对照组移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表达水平对比(±s，n=15)

-catenin实验组 0.842±0.121 0.603±0.019 0.658±0.049 0.325±组别 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 0.075 0.394±0.029对照组 1.368±0.197 1.256±0.175 1.371±0.068 0.647±0.061 0.442±0.028 t值 8.812 14.363 32.947 12.900 4.612 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

图1 实验组与对照组移植瘤的生长曲线

3 讨论

流行病学调查的结果显示全球每年的新发肺癌病例约为100万例，其中我国每年的新发病例约为21万例，且每年死于肺癌的国人约为60万〔3～6〕。由于中晚期肺癌常发生转移，故局部治疗的效果不明显，而化疗或靶向治疗等全身性的药物治疗在中晚期肺癌的治疗中占据了绝对的位置。

肺癌最常见的转移途径是淋巴转移，研究表明COX-2具有促进肿瘤细胞及内部血管的生成与增殖、加快肿瘤转移与侵润的作用，并能够将前致癌物质转化为致癌物质以此促进肿瘤的进一步恶化。大量研究表明长时间使用非甾体类抗炎药能够降低恶性肿瘤的发病危险，并能够抑制肿瘤细胞的生长〔7〕。目前针对抑制COX-2的分子靶向治疗在临床逐渐被普及，尼美舒利作为一种选择性较高的COX-2抑制剂被用于恶性肿瘤的预防与治疗。相比于传统的非甾体类抗炎药，尼美舒利不会抑制胃肠道黏膜前列腺素的合成，故患者的胃肠道副反应较少。奥沙利铂是带三代铂类抗肿瘤药，其毒性较卡铂及顺铂大大降低，对部分耐受铂类药物的肿瘤也有较好的作用。本研究结果与文献报道的结果相同〔8〕，提示COX-2抑制剂与化疗药物联合使用在抑制肿瘤细胞的生长中有协同作用。

VEGF-C与其受体VEGFR-3结合之后能够对机体内成熟淋巴管的生成进行调节，并介导肿瘤细胞的淋巴道转移。研究表明COX-2能够催化前列腺素E2与其受体结合并激活，继而促进人表皮生长因子受体磷酸化，最后增强VEGF-C基因的表达与转录，造成肿瘤的淋巴道转移〔9〕。survivin是目前为止发现的最强的凋亡抑制因子，能够通过与caspase结合而使其活性受到抑制，起到抑制细胞凋亡的作用。survivin在正常组织中几乎不表达，主要分布在恶性肿瘤组织中。研究表明COX-2的高表达使得survivin的泛素化得到抑制，并加强了survivin的稳定性，而当COX-2的活性受到抑制时，survivin的表达也随之发生下降。但当survivin受到RNA的干扰封闭后，COX-2的表达并不发生改变，故有学者推断COX-2位于survivin的上游，并能够调控survivin的表达〔10〕。β-catenin是一种在机体生长发育过程中具有指导作用的细胞骨架成分，但在肿瘤细胞中，其能够通过对下游靶基因c-myc与cyclinD1的调节来促进肿瘤细胞的浸润与转移。Noda等发现E-cadherin与β-catenin关系密切，而COX-2抑制剂可以对E-cadherin进行上调来抑制β-catenin，进而抑制肿瘤细胞的生长与转移〔11，12〕。综上所述，COX-2抑制剂联合化疗药具有协同抗肿瘤的作用，并抑制了肿瘤细胞的生长与淋巴转移，值得推广。

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8 段光军，吴曙华，胡华成，等.环氧化酶-2表达与老年人非小细胞肺癌临床病理特征的关系〔J〕.中华老年医学杂志，2009;28(2):133-5.

9 田 锋，王天佑，龚 民，等.非小细胞肺癌环氧化酶-2的增强表达及其临床意义〔J〕.中华外科杂志，2003;41(6):407-10.

10 陈丽昆，何友兼，黄 河，等.选择性COX-2抑制剂对非小细胞肺癌细胞株毒性及分子机制的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2007;14(12):901-4.

11 Zhan P，Qian Q，Yu LK.Prognostic value of COX-2 expression in patients with non-small cell lung cancer:a systematic review and meta-analysis〔J〕.J Thorac Dis，2013;5(1):40-7.

12 Ramer R，Heinemann K，Merkord J，et al.COX-2 and PPAR-γ confer cannabidiol-induced apoptosis of human lung cancer cells〔J〕.Mol Cancer Ther，2013;12(1):69-82.