正交试验法优选消瘤丸的提取工艺

王文骊 刘军锋 高锦成 陕西中医学院附院（咸阳 712000）

消瘤丸由白花蛇舌草、半枝莲、茵陈蒿、黄芪等十一味中药材组成，主要用于治疗妇科肿瘤［1］。白花蛇舌草、半枝莲、茵陈蒿、黄芪、甘草五味药材作为水提工艺的主要药物，野黄芩苷作为半枝莲的主要代表成分。为了有效的控制该工艺，我们通过正交工艺设计，对消瘤丸水提工艺采用高效液相色谱法测定野黄芩苷的含量，结合干膏率两个指标，确定最佳工艺。

1 仪器与试药 1.1 仪器 日本岛津2010液相色谱仪，class－vp数据工作站；BP211D型电子分析天平（德国塞多利斯天平有限公司）d＝0.01mg；BS210S型电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）d＝0.1mg；LXJ－Ⅱ型台式离心机（南京第一医疗器械厂）；DK－98－ⅡA型水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药 白花蛇舌草、半枝莲、茵陈蒿、黄芪以上药材购于陕西省药材公司。野黄芩苷购于中国药品检验鉴定中心，批号：0421－212604甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

2 试验方法 2.1 检测方法的确定 2.1.1 干膏率的测定：精密量取离心滤过后的滤液100mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称重，计算干浸膏得率，结果见表2。

2.1.2 测定野黄芩苷含量［2］：供试品溶液的制备

精密量取相当于1g半枝莲离心过滤后的煎液，水浴蒸干，残渣用100mL甲醇转溶至三角瓶中，称重，超声提取30min，称重，补加减失的溶媒，精密量取25mL，置蒸发皿中蒸干，残渣用20%甲醇25mL溶解并定量至刻度，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含84.4μg的溶液，即得。

含量测定：依据中国药典2005年版一部附录ⅥD法，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，结果见表3。

2.2 正交试验 2.2.1 试验因素和水平设定：通过多因素的正交试验，优选水提取工艺的各项参数。以水提取干浸膏得率及野黄芩苷提取量作为考核指标，以选择最佳的工艺参数。影响水提取的主要因素有加水量、提取时间和提取次数，故我们选择正交方式进行设计研究。为了系统考察水提取的工艺参数，我们设计的因素与水平见表1。

表1 水煎煮工艺正交试验因素水平表

2.2.2 正交试验安排及结果具体见表2。2.2.3 将正交试验结果分析：结果见表3、表4。

表2 半枝莲等水提正交试验表

表3 浸膏得率方差分析

表4 野黄芩苷含量方差分析

直观分析（表2）显示，从野黄芩苷含量提取情况看影响提取效果因素顺序为加水量（A）＞提取时间（B）＞提取次数（C）；从干膏率方面来看影响提取效果因素顺序为提取时间（B）＞提取次数（C）＞加水量（A）。结合方差分析（表3、4）可知，提取次数、加水量、提取时间长短影响不大，以A2B3C2为最佳提取组合。考虑到药材质地及吸水率，确定最佳工艺为水提二次，加10倍量水，煎煮2次，第1次2h，第2次煎煮1.5h。

2.2.4 验证试验：根据正交实验优选的最佳水提工艺，验证三批，结果见表5。

表5 验证试验结果

由验证结果与正交试验数据基本一致，说明工艺稳定。

3 讨 论 本实验研究白花蛇舌草、半枝莲、茵陈蒿、黄芪的水提工艺，因其主要有效成分为野黄芩苷，故本实验以干膏率及野黄芩苷为考察指标，通过正交试验结合方差分析结果表明，水提影响干膏得率的主要因素是煎煮次数，加水量和煎煮时间较小。水提影响野黄芩苷得率的主因素是煎煮次数为节省工时，降低能耗，确定最佳工艺组合为为水提二次，加10倍量水，煎煮2次，第1次2h，第2次煎煮1.5h。

［1］徐华龙.消瘤丸治疗乳腺疾病30例［J］.陕西中医，1996，18（05）：202.

［2］国家药典委员会.中国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005：59.