卫分证、气分证、营分证Th1／Th2漂移变化规律研究

刘旺华，刘建新 *，周小青 ，谢 静

（1.湖南中医药大学中医诊断学重点学科，中医诊断学精品课程，中医诊断学教学团队，中医诊断学实验室，病理生理实验室，中医病症实验室；2.湖南中医药大学中医学院，3.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007）

辅助性T淋巴细胞亚群Th1／Th2平衡影响细胞因子网络的平衡，与许多感染性疾病的发生、发展、转归有密切的关系。温病的发展存在卫气营血的传变规律，从Th1／Th2漂移变化与温病卫气营血动态传变两种动态变化寻找中西医结合的契合点，研究温病卫气营血证本质及其传变机制尚未见报道。本文从Th1／Th2细胞因子水平研究温病卫气营血证本质，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例来源于湖南中医药大学第一附属医院、第二附属医院。西医疾病诊断标准参照《现代临床医学诊断标准丛书·内科疾病诊断标准》［1］，传染性疾病参照《实用内科学》［2］。中医辨证标准参照《现代中医临床诊断学》［3］及《温病学》［4］。凡符合流行性感冒、肺炎、胸膜炎、脑膜炎、腹膜炎、流行性出血热、钩体病、急性细菌性痢疾、急性白血病西医诊断及辨证属卫分证、气分证、营分证者为纳入标准。凡不符合以上西医诊断或中医辨证不属卫分证、气分证或营分证者，合并有慢性心、脑、肺、肝、肾等重要脏器的严重器质性病变者，不纳入。所有患者治疗前1个月未系统使用糖皮质激素、免疫抑制剂。共收集符合条件的病例50例。

根据病情进行中医卫气营血辨证，分为3组。卫分证组20例，男性9例，女性11例，平均年龄（34.51±24.47）岁，体质量（49.86±21.19）kg；气分证组15例，男性 8例，女性 7例，平均年龄（30.51±22.62）岁，体质量（46.25±24.64） kg；营分证组 15例，男性 7例，女性 8例，平均年龄（37.51±27.35）岁，体质量（42.37±27.78）kg。另选择体检健康者16例为健康对照组，男性9例，女性7例，平均年龄（33.55±25.26）岁，体质量（45.86±24.48） kg。 各组间一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器和试剂

TGL16型台式高速冷冻离心机（湖南仪器仪表总厂），NU-6613W34超低温冰箱 （美国NUAIR公司），550 型酶标仪（日本伯乐公司）。 IL-2、TNF-β、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 检测试剂盒由博士德生物技术有限公司提供。

1.3 检测方法

1.3.1 标本采集 所有对象在入院24 h内或就诊当时抽取静脉血5 m L，3 000 r/min离心10 min后取上清液，-70℃冰箱冻存。

1.3.2 IL-2、TNF-β、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 测定方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定前置室温或冷水中复融，4℃ 3 000 r／min，离心5 min，取上清液测定。在492 nm处测定吸光度（A值），所有A值都应减除空白值后再行计算，绘出标准曲线，根据样品A值求出标本中各因子浓度。严格按照试剂盒说明操作。

1.4 统计学分析

计量资料数据用“x±s”表示，用 SPSS15.0 版统计软件统计。多组间比较用单因素方差分析，方差齐用LSD检验，方差不齐用Dunnett’s T3检验。

2 结果

与正常组比较，卫分证组、气分证组、营分证组IL-2、IL-6、IFN-γ 水平明显升高 （P＜0.05，P＜0.01），气分证组、营分证组 TNF-β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10水平显著上升（P＜0.01）；与卫分证组比较，气分证组IL-2、TNF-β、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 水平显著上升（P＜0.05，P＜0.01），营分证组 TNF-β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 水平显著上升（P＜0.01）；与气分证组比较，营分证组 IL-2、TNF-β、IFN-γ均有下降趋势，IFN-γ 下降差异有统计学意义 （P＜0.01）， 而IL-4、IL-6、IL-10 继续上升（P＜0.05，P＜0.01）。 见表 1～2。

表 1 卫、气、营各阶段 IL-2、TNF-β、IFN-γ 表达的比较（ng／L，x±s）

表 2 卫、气、营各阶段 IL－4、IL-5、IL-6、IL-10 表达的比较（ng／L，x±s）

3 讨论

温病是感受六气中的温热病邪，包括自然界“疠气”、“毒气”等特异病邪所引起的以发热为主要表现的各种急性外感热性疾病［5］。多因温邪从口鼻而入，侵入人体，在机体抵抗力低下的情况下，加上气候变化、寒温失常，如暖冬、寒春等“非其时而有其气”的原因，复因起居不慎、饮食不节等会增加人体患病的机会。由于生态环境的恶化、病原微生物的耐药、抗生素的不断升级换代，一些已经得到控制的传染病有卷土重来之势，新的传染病种亦不断出现，埃博拉病、变异的严重急性呼吸综合症（SARS）冠状病毒、人禽流感等时刻威胁着人类的生命和健康。感染所引起的全身炎性反应综合症（SIRS），尽管临床应用大剂量有效抗生素治疗，细菌被杀灭，血培养转阴，然而病情却继续恶化。在过度的炎症反应中，炎性介质的释放是呈瀑布样反应进行的，机体可能开始处于一种免疫激活状态，随着病情发展，可能进入免疫抑制状态，促炎／抗炎介质失衡所产生的一系列连锁反应，最终导致相当于中医营分证或血分证的多器官功能障碍综合征（MODS）或多系统器官功能衰竭（MSOF）［6］。

1991 年 Romagnani［7］发现人类 CD4＋T 细胞按CK产生的模式和生物功能可分为Th1／Th2两种不同的亚群。辅助性T淋巴细胞（Th）亚群Th1／Th2平衡影响细胞因子（cytokine，CK）网络的平衡，与许多感染性疾病的发生、发展、治疗、转归有密切的关系。正常情况下，Th1／Th2以相互拮抗的方式调节着机体免疫应答的平衡，Th1／Th2两者的平衡实际上反映了促炎和抗炎的平衡。Th1／Th2平衡失调并向Th1或Th2状态转化的趋势称为Th1／Th2的漂移，Th1／Th2漂移方向可反映SIRS（全身炎性反应综合症）－CARS（代偿性抗炎反应综合征）的失衡方向及程度。

Thl与Th2两种不同类型细胞由共同的前体细胞分化而来，并通过分泌细胞因子彼此进行相互交叉调节，相互抑制，以维持机体平衡。人类Th1细胞主要产生 IL－2、TNF－β、IFN－γ 等，称为 Th1 型 CK，以促炎CK为主，其中又以IFN－γ为代表；Th2细胞主要产生 IL－4、IL－5、IL－6、IL－10 等， 称为 Th2 型CK，以抗炎 CK 为主，其中以 IL－4 为代表［8-9］。IFN－γ和IL－4是一对互相拮抗的CK，被视为是Th1和Th2细胞的特征性CK［10］。反过来，细胞因子又能促进相应的辅助T细胞分化。

本实验结果表明，卫、气、营三阶段Th1细胞因子 IL－2、IFN－γ 均较正常组升高，提示卫、气、营三阶段机体Th1活化，分泌大量促细胞因子。气、营阶段 Th2 细胞因子 IL－4、IL－5、IL－6 均较正常组升高，提示气、营阶段机体Th2活化，分泌大量抑炎细胞因子。 Th1类细胞因子 IL－2、TNF－β、IFN－γ 随着卫气营阶段的变化出现先升高后降低趋势，在卫分证阶段就开始升高，由卫分，到气分逐渐升高，但进入营分之后开始有下降趋势。Th2类细胞因子IL－4、IL－5卫分证时没有显示升高，气分和营分阶段则呈持续上升趋势。在卫分证时，Th1类细胞因子就有升高，提示Th1类细胞因子启动较早，可能与卫分证时机体正气抗邪有关，Th2类细胞因子此时没有升高，启动较慢，可能有利于机体抗邪；气分证时，Th1类细胞因子、Th2类细胞因子都显著升高，促炎抑炎对抗达白热化，与此阶段邪正抗争剧烈有关；到营分证阶段时，Th1类细胞因子开始下降，Th2类细胞因子则继续上升，提示此阶段Th2类抗炎细胞因子占据上风，抑制了Th1类促炎细胞因子升高，不利于驱邪外出，可能与营分证营阴伤有关。

［1］贝政平.现代临床医学诊断标准丛书·内科疾病诊断标准［S］.北京：科学技术出版社，2001.

［2］陈灏珠.实用内科学 ［M］.第11版.北京：人民卫生出版社，2002.

［3］朱文锋，何清湖.现代中医临床诊断学［M］.北京：人民卫生出版社， 2003： 356， 357， 1109， 1112， 1122

［4］ 彭胜权.温病学［M］.上海： 上海科学技术出版社， 1996： 23－24.

［5］李银平.预防禽流感中西医结合是出路［J］.中国中西医结合急救杂志，2005，12（6）： 329－330

［6］程方平，刘松林，李云海，等.甘露消毒丹对温病湿热证大鼠SIgA、TNF－α、IL－1β 调控的实验研究［J］.中华实用中西医杂志，2007， 20（14）：1232－1233，1236

［7］ Romagnani S.Human TH1 and TH2 subsets： doubt no more［J］.Immunol Today.1991，12（8）：256－257.

［8］ Kidd P.Th1／Th2 balance： the hypothesis， its limitations， and implications for health and disease.［J］.Altern Med Rev，2005，8（3）：223－246.

［9］ 施维，张劲农.Th1／Th2 炎症极化与肺气肿和肺纤维化［J］.国际呼吸杂志，2007，27（7）：551－553.

［10］杨晖，刘伟，贺芹.支气管哮喘患者Th亚群及血清中免疫球蛋白的变化［J］.山东医药.2003， 43（4）：44－45.