低酶学水平的慢性HBV感染者肝组织学改变与CD28表达的相关性研究

刘 冰，李佩波，邓存良

（1.川北医学院第二附属医院（四川绵阳四0四医院）感染科，四川 绵阳 621000；2.泸州医学院附属医院感染科，四川 泸州 646000）

乙型病毒性肝炎简称“乙肝”，是由乙型肝炎病毒(HBV)感染人体后导致以肝脏损害为主的传染性疾病。慢性HBV感染者一般分为HBV携带者、慢性乙肝轻、中、重度和重型肝炎及肝炎肝硬化。我国现约有9 300万慢性HBV感染者[1-2]，该病严重威胁我国人民的身体健康。其发病机制十分复杂，国内外研究较多，但目前仍不十分清楚。本研究针对血清酶学(ALT)低水平(≤3 ulm)的HBV感染者肝组织学进行研究，检测其肝组织病理改变情况以及肝组织中CD28的表达情况，了解CD28的表达与肝组织的炎症活动及肝纤维化进程之间的关系。

1 材料与方法

1.1 病例来源 四川绵阳四0四医院感染科2007-2010年收治的慢性HBV感染患者共71例，男性60例，女性11例，年龄15～64岁，平均(35±17.4)岁。所有患者诊断符合2000年《病毒性肝炎防治方案》[3]的诊断标准。71例患者外周血中HBV-DNA定量≥103copies/ml，肝功酶学指标(ALT≤120 U/L)；均未接受抗病毒治疗，且排除合并其他嗜肝病毒感染及其他肝脏疾病。

1.2 分组情况 以肝功酶学指标(ALT)为标准分为三组，ALT≤40 U/L组(Ⅰ组)；40 U/L＜ALT≤80 U/L组(Ⅱ组)；80 U/L＜ALT≤120 U/L组(Ⅲ组)。

1.3 实验方法

1.3.1 血清学指标的检测 采用化学发光法检测乙肝病毒标记物(HBVM)(上海新波有限公司)，酶动力学法检测肝功酶学(上海德赛有限公司)，终点发检测胆红素和蛋白(上海德赛有限公司)，PCR荧光定量(瑞士罗氏公司)检测HBV DNA定量(深圳凯杰有限公司)。

1.3.2 肝组织病理检测 在B超引导下行肝穿采集活体肝组织标本，要求每条肝组织标本长度在1.5 cm以上。采用HE染色检测肝组织的炎症活动度和纤维化程度。免疫组化染色，SP法检测肝组织中CD28的表达。

1.4 结果判定 由两名经验丰富的病理科医生看片。炎症活动度分级用G0～G4表示；纤维化分期用S0～S4表示。免疫组化结果为肝细胞胞浆被染成棕黄色或棕褐色为阳性细胞，在高倍镜下(400×)每张切片选取5个不连续视野采集图片，使用Image-Pro Plus 6.0彩色图像分析系统对图片中阳性反应部位进行处理分析。采用积分光密度(IOD)值表示CD28的表达强度。

1.5 统计学方法 实验结果经SPSS13.0录入采用单因素方差分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 患者血清学指标结果 71例患者乙肝病毒标记物均为阳性，HBV-DNA定量＞103copies/ml。ALT≤40 U/L者17例(23.94%)；40 U/L＜ALT≤80 U/L者31例(43.66%)；80 U/L ＜ALT≤120 U/L者 23例(32.39%)。

2.2 肝组织病理学检查结果 71例患者中，肝组织学完全正常(G0S0)者3例(4.23%)，肝组织学存在不同程度损害者68例(95.77%)，其中早期肝硬化3例(4.23%)，见表1。

表1 71例肝组织病理学检查结果

2.3 CD28表达情况 CD28在所有患者的肝组织中均有表达，胞浆染色呈棕黄色或者棕褐色细胞为阳性细胞，主要集中在炎性坏死区和纤维化周围，见图1～图2。在不同炎症活动度和纤维化程度的肝组织中所测得阳性细胞的积分光密度(IOD)值不同，见表2、表3。总的趋势是，IOD值与肝组织炎症活动度和纤维化程度平行。

图1 CD28在正常肝组织中的表达（SP,×400）

图2 CD28在G2S2肝组织中的表达（SP,×400）

表2 CD28在G0～G3肝组织中表达比较(±s)

表2 CD28在G0～G3肝组织中表达比较(±s)

注：总 F=14.77；G0/G1：F1=3.12、P＞0.05；G0/G2：F2=4.17、P2＜0.05；G0/G3：F3=4.49、P3＜0.05；G1/G2：F4=3.03、P4＞0.05；G1/G3：F5=4.10、P5＜0.05；G2/G3：F6=4.08、P6＜0.05。

炎症活动度分级总P值G0G1G2G3例数3 26 28 14 IOD值8.31±0.44 10.33±1.33 13.62±1.79 19.12±1.79 P＜0.05

表3 CD28在S0～S4肝组织中表达比较(±s)

表3 CD28在S0～S4肝组织中表达比较(±s)

注：总 F=19.01；S0/S1：F1=3.67、P＞0.05；S0/S2：F2=4.11、P2＜0.05；S0/S3～4：F3=4.41、P3＜0.05；S1/S2：F4=3.82、P4＞0.05；S1/S3～4：F5=4.15、P5＜0.05；S2/S3～4：F6=3.21、P6＞0.05。

纤维化分期总P值S0 S1 S2 P＜0.05 S3～4例数9 23 29 10 IOD值6.05±0.91 8.83±1.82 13.48±1.39 17.41±2.40

2.4 CD28在不同ALT组别肝组织中的表达差异 不同ALT组别的肝组织中CD28的表达强度不同，总的趋势随ALT的增高CD28的表达增强，见表4。

表4 CD28在不同ALT的肝组织中表达(±s)

表4 CD28在不同ALT的肝组织中表达(±s)

注：总F=14.48；Ⅰ/Ⅱ，F1=3.56、P1＞0.05；Ⅰ/Ⅲ，F2=4.13、P2＜0.05；Ⅱ/Ⅲ，F3=4.58、P3＜0.05。

组 别 例数IOD值 总P值17 31 23Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组9.88±0.89 11.78±1.31 21.19±3.36 P＜0.05

3 讨论

近几年，国内对慢性乙型病毒性肝炎肝组织学改变及其发病机作了大量研究，但是对血清酶学低水平(ALT≤3 ULN)的慢性HBV感染者研究较少。本课题针对该类人群肝组织病理改变、肝组织中CD28的表达状态进行了研究，探讨CD28的表达与肝组织学改变以及在低酶学水平状态下与酶学变化的关系。

3.1 CD28与肝组织学改变的关系 CD28分子是免疫球蛋白超家族成员之一。CD8+细胞一般分为特异性杀伤T细胞(Tc)和免疫抑制性T细胞(Ts)，这两类细胞对机体的免疫起着重要的调节作用[4-5]。目前，对外周血中CD28的表达研究报道较多。但在肝组织中检测报道不多。本研究发现，当肝组织炎症活动度和纤维化程度处于较低水平时，组织中的CD28表达水平也较低；当炎症活动增强和纤维化加深后，CD28表达明显增强。说明CD28的表达强度和肝组织病理损害程度具有同步性，这可能与人体免疫应答有关。当机体进入免疫耐受期时，CD28不表达或表达水平低，B7/CD28共刺激通路异常，T细胞活化差，抑制CD4+T细胞产生细胞因子，病毒不能清除，机体处于免疫耐受期；当机体处于免疫清除期时，CD28表达水平升高，Tc促进T淋巴细胞的增殖、活化[6-7]。由此证明，肝组织中CD28的表达在乙型病毒性肝炎的发病机制中起到非常重要的作用。

3.2 CD28表达与血清酶学(ALT)的关系 本文对低酶学(ALT)水平的慢性HBV感染者肝组织病理学及CD28表达强度进行检测，结果显示，在不同ALT组别的肝组织中CD28的表达强度存在差异，其趋势为随ALT的增高CD28表达增强，说明ALT在一定程度上可以反应出肝组织炎症活动度能力。可见，ALT目前仍是慢性乙肝患者肝脏病理炎症监测的一个重要的血清学指标[8]。

综上所述，CD28在病毒性肝炎的发生和进展过程中起到重要作用，但其机理还有待进一步研究。

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