HPLC法同时测定对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C的含量

王明跃 叶晓林

（1.成都市都江堰市第二人民医院，四川 成都 611830；2.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137）

目前许多感冒药中含有多种药物成分，其含量的测定采用的方法也不同。如复方氨酚苯海拉明片（规格：每片含对乙酰氨基酚300mg、咖啡因30mg、盐酸麻黄碱715mg、盐酸苯海拉明715mg）国家药品标准采用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚和咖啡因［1］。小儿氨酚黄那敏颗粒系由对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏等组成的复方制剂，现行国家标准只建立了测定对乙酰氨基酚的含量的可见／紫外分光光度法［2］。维C 银翘片由金银花、连翘、荆芥、对乙酰氨基酚、维生素C、马来酸氯苯那敏等14味药制成，乙酰氨基酚的含量采用HPLC法测定，维生素C的含量用容量滴定法测定［3］。氨酚咖黄烷胺片主要成分为对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、人工牛黄、咖啡因，乙酰氨基酚的含量测定方法为容量法［4］。本文采用HPLC 法直接测定乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C 四种组份含量，专属性强，操作简捷，结果满意。

1 材料与方法

1.1 材料

Water 1525型高效液相色谱仪；Water 2487型双波长紫外检测器；Water 2487型自动进样器。RWEKA DT 800 型溶出度实验仪。乙晴（色谱纯，Korea SK）；庚烷磺酸钠为分析纯。复方氨酚咖麻片（韩国Komar公司）由对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C 组成。对照品对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C为Pharmcia产品。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Capcell-pak C18（5μm，4.6×150 mm，Shiseido）；流动相：乙晴／缓冲液=（30／70）；缓冲液：庚烷磺酸钠1.0g 加250ml超纯水，同时加入2ml高氯酸；每1000ml乙腈加入2ml高氯酸。检测波长为210nm；流速1.0 ml·min-1；进样体积10μl，柱温25℃。

1.2.2 对照品溶液制备

分别精密称取对乙酰氨基酚（60 mg）、咖啡因（25 mg）、盐酸麻黄碱（25 mg）和维生素C（180 mg）对照品，加100 ml的50%甲醇制成混合溶液，作为对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液制备

取本品20片，研细，精密称取适量（约相当于乙酰氨基酚60mg、咖啡因25mg、盐酸麻黄碱25mg、维生素C 180mg），置100mL量瓶中，加50%甲醇，超声处理10min，加50%甲醇至刻度。用0.45m 微孔滤膜滤过，取滤液，作为供试品溶液。取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

1.2.4 线性关系的考察

精密称取对乙酰氨基酚375mg、咖啡因156.25 mg、盐酸麻黄碱156.25mg和维生素C 1000mg置同一100ml量瓶中，加50%甲醇适量使溶解，最后稀释至刻度，摇匀。精密量取上述混合对照品溶液1、2、3、4、5、6、8ml分别置25ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。根据上述色谱条件分别进样10 μl，记录色谱图。以各组分峰面积之比为纵坐标，药物浓度为横坐标绘制标准曲线，并对所得数据进行回归分析，得回归方程。

1.2.5 精密度试验

取同一标准溶液按上述色谱条件连续进样6次，记录各组分的面积，计算RSD 值。

1.2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，间隔2小时进样一次，共计8h，记录各组分峰面积，计算RSD 值。

1.2.7 回收率试验

精密称取对乙酰氨基酚120 mg、咖啡因50 mg、盐酸麻黄碱50mg和维生素C 360mg置同一100ml量瓶中，加50%甲醇适量使溶解，最后稀释至刻度，摇匀。精密量取上述混合对照品溶液10、12.5、15ml分别置25ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别相当于处方量的80%、100%和120%。根据上述色谱条件分别进样10μl，记录色谱图，测定各组分峰面积，计算回收率，共进样6次，以平均值计算。

1.2.8 样品含量测定

精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积之计算含量，共测定3个样品。以下式计算分析含量百分比（Assay）：测定含量／标注含量（35 mg）×100%。

2 结果

2.1 线性关系的考察

结果表明，四种组分可以很好的分离，峰形对称、无拖尾现象（图1）。乙酰氨基酚在15mg·100ml-1～120mg·100ml-1范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，线性方程为y=287919x+187227，r=0.9999。咖啡因在6.25mg·100ml-1～50mg·100ml-1范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，线性方程为y=695624x-35886，r=0.9994。盐酸麻黄碱在6.25mg·100ml-1～50mg·100ml-1范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，线性方程为y=201088x+389167，r=0.9998。维生素C 在40mg·100ml-1～320mg·100ml-1范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，线性方程为y=27965x+188324，r=0.9994。

图1 对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C的色谱图

2.2 精密度试验

同一标准溶液按上述色谱条件连续进样6次，结果对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C 的RSD 分别是0.81%、0.71%、0.38%和0.22%。

2.3 稳定性试验

同一供试品溶液，间隔2h进样一次，共计8h，结果对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C 的RSD 分别是0.70%、0.83%、0.45%和0.56%。表明供试品溶液在8h内稳定，仪器性能稳定。

2.4 回收率试验

分别取供试液进样6次进行测定，相当于处方量的80%、100%和120%，测定各组分峰面积，计算回收率，以平均值计算。其回收率以及RSD 值，平均回收率非常接近100%，RSD在允许范围内，见表1。

表1 回收率测定结果

2.5 样品含量测定

精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积之计算含量，共测定3个样品。以下式计算分析含量百分比（Assay）：测定含量／标注含量×100%。结果显示，3个样品对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C的含量百分比均值结果见表2。

3 讨论

作者采用高效液相色谱同时检测复方氨酚咖麻片中对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸麻黄碱和维生素C 的含量，以210nm为检测波长，在同一条件下可以很好的分离四种药物成分，色谱图显示无拖尾现象，显示该法灵敏度高，准确度和精密度好，操作简便，可作为该类制剂的含量测定和质量评价监控方法。

表2 样品含量测定结果（%）

1 国家药品监督管理局.国家药品标准12册.复方氨酚苯海拉明片试行标准：WS2100012（HD21152）22.［S］／／国家药典委员会.国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准，2002：162.

2 国家药品监督管理局.小儿氨酚黄那敏颗粒试行标准：WS2100012（HD20214）22002［S］／／国家药典委员会.国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准，2002：53.

3 国家食品药品监督管理局国家药品标准WS32B2400029822003［S］.

4 国家药典委员会.国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准［S］.第七册.2002：7-240.