气相色谱法测定茴香脑三硫酮中残留溶剂

陈璐

茴香脑三硫酮又名胆维他，是一种分泌性的利胆药，能明显增强肝脏谷胱甘肽(GSH)水平，显著增强谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)，谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)和谷胱甘肽硫转移酶(GSH-S-Tx)活性，降低谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性，从而增强肝细胞活力，使胆汁分泌增多。本品合成工艺中主要使用了二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇，前两种溶剂均为第二类溶剂，乙醇为第三类溶剂［1，2］，均应进行限度控制。参照《中国药典》2005年版二部附录ⅧP残留溶剂测定法的指导原则，采用气相色谱法测定上述三种溶剂，方法简便、快捷，结果准确、可靠。

表1 合成工艺中使用的主要有机溶剂

1 仪器与试药

Agilent 6890N气相色谱仪及工作站。FID检测器。二甲基甲酰胺、乙醇均为色谱纯，二甲苯为分析纯试剂。样品由四川某制药公司提供。

2 色谱条件

色谱柱:PEG-20000毛细管柱(15 m×0.53 μm×1 μm)，进样口温度190℃，检测器温度230℃;柱程序升温:初始温度为 40℃，保持 min，以每分钟15℃的速度升温至150℃，保持3 min。进样口分流比5∶1，载气为氮气，速度3.0 ml/min。

分别取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各适量，精密称定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺各200 μg的混合溶液，取1 μl照上述色谱条件试验，三个组分以及溶剂甲醇完全分离，出峰顺序依次为:乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺，三个待测组分的分离度依次为36.8，7.6和22.5;乙醇和溶剂甲醇完全分离，分离度为2.7。具体色谱图见图1。

图1 混合对照品溶液的GC色谱图

3 最低检出浓度

将二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇用甲醇逐级稀释，按上述色谱条件测定，最低检出浓度依次为 2.0ng、1.0ng和3.0ng。

4 线性关系

精密称取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇适量，用甲醇稀释制成每1 ml中分别含异丙醇和丙酮各约1000 μg的混合对照品储备溶液，再用取储备溶液加水稀释制成每1 ml中各约含 500 μg、200 μg、100 μg、10 μg、5 μg 的混合标准溶液，依法测定。以浓度为横坐标(μg/ml)X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，结果见表2。结果表明，这三种溶剂在测定范围内浓度和峰响应的线性关系良好。

表2 回归方程与线性范围实验结果(n=5)

5 加样回收实验

取已测定残留溶剂的茴香脑三硫酮0.2 g，精密称定，加已知浓度的混合对照品溶液4.0 ml，密塞，超声处理1 min，滤过，取续滤液依法测定，作回收率计算。结果二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇的回收率分别为98.0%、98.3%和102.2%，回收结果良好，能满足测定的需要。

6 精密度

取“4”项下浓度为100 μg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件进行检测，连续进样6次，计算乙醇、二甲苯、二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为0.56%，0.89%，1.12%。

7 样品的测定

取样品约0.2 g，精密称定，加甲醇4.0 ml，密塞，超声处理1 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液;另分别取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各适量，精密称定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇250 μg、二甲苯108 μg 和二甲基甲酰胺44 μg 的混合溶液，作为对照品溶液。照上述色谱条件试验，结果三批样品中二甲基甲酰胺和乙醇均未检出，二甲苯的残留量低于中国药典的限度规定，结果见表3。

表3 样品测定结果

8 讨论

8.1 由于采用了直接进样法，故药品本身也可能给试验带来影响，故进样口的温度不宜过高，以免药品本身破坏带来干扰，试验证明，在190℃既能保证溶剂的汽化而且茴香脑三硫酮也不会被破坏对测定造成影响。

8.2 由于茴香脑三硫酮在甲醇中溶解性有限，故供试品需要滤过来分离未溶解部分，但回收试验证明三个待测溶剂测定结果不受影响。

［1］国家药典委员会.中国药典(二部).北京:化学工业出版社，2005:(附录):54.

［2］ICH药品注册的国际技术要求，2007质量部分:Q3C.