厚朴叶总黄酮的超声提取工艺研究

吴锦玉，吴岩斌，吴建国，沈炳炎，吴锦忠

（1.福建中医药大学药学院，福建 福州350122；2.福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州350122；3.光泽县药材办，福建 光泽354100）

厚朴为木兰科植物厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）或凹叶厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.）的干燥干皮、根皮和枝皮，性温，味苦、辛。其功效燥湿消痰、下气除满，主治湿滞伤中、脱痞吐泻等［1］，主产于湖北、湖南、四川、浙江、安徽、福建等地［2］。现今厚朴的使用主要是通过砍树剥皮，但其是多年生落叶乔木且生产周期长，一般要求达到15a以上才能供药用。目前国内厚朴叶的资源量大且每年可以再生，目前仅少量出口日本用于日式料理的寿司饭及烧烤衬垫物，还未充分加以利用，一般是任其凋落腐烂，造成资源的浪费［3］。如能将厚朴叶开发利用，将有利于厚朴资源的综合开发利用和可持续发展，且具有一定的经济效益和社会效益。

现代化学和药理学研究表明：厚朴叶主要含有木脂素类、黄酮类、生物碱类和挥发油等成分［4-7］，具有抗菌、镇咳、抗氧化和血管舒张等作用［8-11］。目前，对于厚朴叶黄酮类成分的提取工艺相关研究较少。厚朴叶中的芦丁和槲皮苷具有多种生物活性，都是很好的天然抗氧化剂，对心血管系统疾病有较好的疗效［12］。本实验采用正交设计法，以总黄酮含量为指标，通过考察不同因素水平对总黄酮提取率的影响，优选最佳超声提取工艺，为厚朴叶的综合开发利用提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 药材 厚朴叶采自福建省南平市光泽县，经福建中医药大学药学院杨成梓副教授鉴定为凹叶厚朴叶。

1.2 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇、甲醇等皆为分析纯。

1.3 仪器AR233CN电子天平［奥豪斯仪器（上海）有限公司］；KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SH2-D（Ш）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；DLSB-5/25℃低温冷却液循环泵（荥阳市科瑞仪器厂）；UV-1800紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重芦丁对照品10mg，用80%甲醇溶解并移到50mL量瓶中，定容至刻度，即得0.2mg/mL对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 称取干燥的厚朴叶1g，精密称定，按一定的料液比加入不同浓度的乙醇，超声提取一定的时间，提取一定的次数，过滤，合并滤液，真空减压浓缩到5mL；然后移到25mL的容量瓶中，蒸馏水定容；再精密吸取1mL定容至5mL的容量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 标准曲线的制备［8］精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于25mL容量瓶中，各加入蒸馏水至6mL；加5%亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀并放置6 min；再加10%硝酸铝溶液1.0mL，摇匀并放置6 min；再加4%氢氧化钠溶液10.0mL，并用蒸馏水稀释至刻度，摇匀放置15 min。以6mL蒸馏水代替对照品溶液液作为空白，采用分光光度法在500 nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，相应浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝12.8750C－0.0273，R2＝0.9992，线性范围为：0.008～0.048mg/mL。

2.4 厚朴叶总黄酮的含量测定 取供试品溶液1mL，按“2.3”项下方法测定吸光度。根据吸光度值计算黄酮类化合物含量。

2.5 正交试验设计 采用L9（34）正交试验表设计，以总黄酮得率为指标，正交因素与水平设计见表1，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 正交试验因素水平表

表2 L9（34）正交设计及结果

表3 方差分析结果

由实验结果可见：乙醇浓度、提取时间和提取次数对厚朴叶总黄酮提取率的影响显著（P＜0.05），料液比无显著影响。最佳提取工艺为A3B3C3D2，即以35倍70%乙醇超声提取厚朴叶2次，40 min/次。此工艺下所得厚朴叶总黄酮提取率为5.01%。

2.6 验证实验 按照最佳提取工艺为A3B3C3D2，制备3份供试品溶液，按“2.3”项下方法测定吸光度，计算总黄酮得率。其结果分别为5.00%、4.93%和5.09%，平均提取率为5.01%，RSD为1.57%。结果表明该提取工艺条件稳定可行。

3 讨 论

厚朴叶资源丰富，价格低廉，多数产区作为废弃物未能得到有效开发利用。我国厚朴资源丰富，仅福建省就有约10万亩的种植面积，大量的厚朴叶为其深入开发利用提供资源保障。鉴于厚朴叶含有较高的黄酮类成分，开发利用厚朴叶将给厚朴产区带来较大的经济和社会效益。

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