高效液相色谱法测定小儿清炎合剂中原儿茶醛的含量

涂 琼，卢庆红

（江西省儿童医院药剂科，南昌 330006）

小儿清炎合剂是江西省儿童医院的特色制剂，由白花蛇舌草、乌蕨、地锦、铁苋四味药经水煎煮、过滤、浓缩而成，具有清热解毒、抗菌、抗病毒及消炎等作用，临床上主要用于治疗小儿细菌性或病毒性感染，如支气管炎、肺炎、扁桃体炎及肠胃炎等，疗效确切，不良反应小，十几年被本院广泛运用于临床。乌蕨具有清热、解毒、利湿、止血的功效，为方中的主药之一，现有质量标准中乌蕨的有效成分原儿茶醛只用薄层色谱法进行定性鉴别，未作含量测定，为更有效地保证医院制剂的质量，本研究建立高效液相色谱法测定小儿清炎合剂中原儿茶醛的含量[1-2]，方法简便、可行、灵敏，结果准确，适用于小儿清炎合剂的质量控制。

1 仪器与试剂

SHIMDIU高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，Class-vp色谱工作站（日本岛津）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：110810-200505），小儿清炎合剂（江西省儿童医院制剂室，批 号 ：090515、090529、090610、090619、090626）， 甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm），流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（12∶88）；检测波长：280 nm，流速 0.9 mL·min-1；进样量 20 μL；柱温：35 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取原儿茶醛对照品适量，加甲醇溶解制成1.3 g·L-1的溶液，作为储备液，备用。

2.2.2 供试品溶液

精密量取小儿清炎合剂1 mL，置5 mL量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照液

按小儿清炎合剂处方比例及工艺制备方法，制备缺乌蕨的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含乌蕨的阴性对照液。

2.3 系统适应性及专属性考察

分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，阴性对照品溶液在原儿茶醛峰位置无吸收峰，原儿茶醛与其他组分峰基线分离良好，理论塔板数按原儿茶醛计算应不于低于5 000，分离度大于1.5，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4 线性关系考察

精密吸取原儿茶醛对照品储备液适量，用流动相稀释至 1.3、2.6，3.9、7.8、10.4、15.6 mg.L-16 个不同浓度，摇匀，分别吸取上述对照品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪进行测定。将所测得的原儿茶醛峰面积Y与浓度X进行回归，得方程：Y=6 3737.75X+15 198.57，r=0.999 6，n=6，表明原儿茶醛在 1.3～15.6 mg·L-1浓度范围内峰面积对浓度的线性关系良好。

2.5 精密度实验

精密吸取“2.4”项下对照品溶液（每1 mL含原儿茶醛 0.0104 mg）20 μL，在上述色谱条件下，连续进样5次，记录峰面积，结果测得原儿茶醛峰面积值为 663 243、659 577、677 131、665 055、665 680，RSD为0.60%，表明精密度良好。

2.6 重复性实验

取同一批号样品5份，按“2.2.2”项下供试品处理方法处理样品，按上述色谱条件测定，测得样品原 儿 茶 醛 含 量 分 别 为 36.20、35.85、36.15、36.47、36.02 mg·L-1，RSD 为 0.64%，表明重复性良好。

2.7 稳定性实验

取同一批号样品溶液，按供试品溶液制备方法制备样品，精密吸取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件测定，在0、2、4、8 h分别按上述色谱条件进样测定，测得峰面积的RSD为0.75%，结果表明，样品溶液在8 h内基本稳定。

2.8 加样回收率实验

精密移取已知原儿茶醛含量（7.34 mg·L-1）的小儿清炎合剂9份，分别加入高、中、低3个浓度的原儿茶醛对照品储备液各3份，按“2.2.2”项下制备样品溶液，分别进样20 μL测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率测定结果

2.9 样品含量测定

取小儿清炎合剂5批，按照“2.2.2”项下制配样品溶液，进样20 μL测定，记录峰面积，以外标法计算样品中原儿茶醛含量，其平均值分别为7.35、7.38、7.42、7.24、7.34 mg·L-1，RSD 值分别为 0.65%、0.82%、0.53%、0.78%、0.89%（n=3）。

3 讨论

在流动相的配比中曾采用不同浓度甲醇-水系统、甲醇-醋酸溶液进行分离，最终发现采用甲醇-1%醋酸溶液作为流动相能做到较好分离，且稳定性好。原儿茶醛对照品溶液用甲醇稀释，有拖尾峰出现，而以流动相稀释可得到较好的峰形。

提取方法考察采用将样品用盐酸调pH值为2～3，再用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，水浴上蒸干，残渣用流动相溶解、滤过、进样，结果与将样品直接用流动相稀释后，滤过，进样测定的结果相差不大。

小儿清炎合剂是经水煎煮浓缩而成，原儿茶醛为从乌蕨叶中分离得到的主要成分之一[3]，溶于水，所以本实验将样品采用流动相直接稀释，0.45 μm微孔滤膜过滤后测定，结果表明，本法分离效果好，重复性、回收率良好，方法简便，易于操作，适用于小儿清炎合剂的质量控制。

[1] 赵庆华，王宝全，王海龙.高效液相色谱法测定耳聪颗粒中原儿茶醛的含量[J].中国医院药学杂志，2008，28（12）：1039-1040.

[2] 齐永秀，曹明亮，万建建，等.高效液相色谱法测定白花丹参根、茎、叶中丹参素和原儿茶醛的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27（12）：1772-1773.

[3] 任冰如，李维林.乌蕨的研究进展[J].中国野生植物资源，2006,25（2）:12-14.