HPLC法测定生脉颗粒(党参方)中五味子醇甲的含量

曹 阳，杨 眉，刘 燕，雷果平，李 敏，张 燕

(1.南充市食品药品检验所，四川南充 637000;2.成都中医药大学药学院，四川成都 611137;3.川北医学院第二临床医院，南充市中心医院中药房，四川南充 637000)

生脉颗粒［1］(党参方)是以党参、麦冬、五味子三味中药加工制成的复方中药制剂，具有益气复脉，养阴生津的功效。用以治疗气阴两伤，心悸气短，脉微虚汗病症。本产品收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册，没有进行含量测定。本文采用HPLC法［2］测定本产品中主药之一五味子中五味子醇甲的含量，方法简单可靠，重现性好。

1 材料与方法

1.1 材料

Waters2695型高效液相色谱仪;TU1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);电子天平(赛多利斯CP225D)。五味子醇甲对照品(中国药品生物制品检定所提供);水为超纯水(自制);甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

1.2 对照品溶液的制备

精密称取五味子醇甲对照品10.20 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。制成每1 mL含0.2 mg的溶液，摇匀，即得。

1.3 五味子醇甲检测波长的确定［3-4］

取五味子醇甲对照品溶液(10.20 mg定容于50 mL甲醇中)，在波长200～400 nm的范围内作紫外光谱扫描，根据扫描结果及峰谷检测值分析，选择最大吸收波长250 nm作为检测波长(图1及表1)。

表1 五味子醇甲紫外光谱扫描峰谷检测值

1.4 供试品溶液的制备

精密称取研细的样品约0.5 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率150 W，频率20 kHz)30 min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.5 色谱条件及系统适应性

1.5.1 色谱条件 色谱柱为十八烷基键合硅胶(Thermo BDS HYPERRSIL C18 250×4.6(Part28105-254630));流动相:甲醇-水(60∶40)，流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:250 nm;理论板数按五味子醇甲峰计算不低于2 000。

1.5.2 系统适应性试验色谱图 图2为对照品五味子醇甲高效液相色谱图;图3为样品五味子醇甲高效液相色谱图;图4为对照品与样品五味子醇甲高效液相色谱重叠图。可见保留时间为10.551 min处的五味子醇甲峰。

2 结果

2.1 线性关系考察结果

精密吸取1.2对照品溶液1 mL置于10 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10.0 μL，8.0 μL，6.0 μL，4.0 μL，2.0 μL，1.0 μL 测定峰面积。以五味子醇甲的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果五味子醇甲的回归方程为:Y=2 000 000X-7 931.8(r=0.999 9，n=6)。结果表明，五味子醇甲进样量在0.05～0.2 μg的范围内与色谱峰面积呈良好线性关系，见图5。

2.2 精密度试验结果

取2.1项下的对照品溶液，重复进样8次，测定五味子醇甲峰面积，并计算其相对标准偏差，结果RSD=1.1%(n=8)，表明仪器精密度良好(表2)。

表2 仪器精密度考察

2.3 重现性试验结果

对同一批样品重复取样6次，按1.4供试品溶液的制备方法处理后按前述色谱条件测定五味子醇甲的峰面积，结果RSD=1.0%(n=6)，见表3。

表3 生脉颗粒重现性考察

2.4 回收率试验结果

精密吸取1.2对照品溶液1 mL置于10 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为已知含量的溶液。精密称定6份已知五味子醇甲含量的生脉颗粒样品，每份约0.5 g，置25 mL量瓶中。分别加入已知含量的溶液3 mL(含五味子醇甲为0.061 2 mg)，按1.4供试品溶液的制备方法操作，得加样溶液，分别吸取10 μL进样测定峰面积，结果见表4。

表4 五味子醇甲回收率考察

2.5 样品测定结果

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪。测定峰面积，计算即得。测定4批样品，结果见表5。

表5 样品测定

3 讨论

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，含多种木酯素类成分，主要有五味子素(schizandrin)、去氧五味子素(de-oxyschizandrin)、新一味子素(neoschizan-drin)、五味子醇(schizan-drol)、五味子酯(schisantherin，gomisin)等。活性成分为五味子醇甲，故选用五味子醇甲为含量测定指标。从紫外光谱扫描图谱中选取干扰性小的主峰即λ=250 nm为HPLC测定波长。

五味子醇甲可溶于甲醇，而其他成分较少溶解，因此可用甲醇来提取样品，提取方法无需复杂的预处理，简化实验的操作过程。选用具有低粘度、与检测器兼容性好、低毒性的甲醇与水进行试验，得到液相色谱的分离结果，然后根据出峰情况调整甲醇的比例。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。直至各组的分离情况不再改变。最终确定流动相为甲醇-水(60∶40)。

本方法准确、快速、简便、重现性好，可作为该产品中五味子醇甲的含量测定方法。

［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准［S］.北京:中药成方制剂第十一册，1996.46

［2］ 国家药典委员会.中国药典一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.61

［3］ 张玉洁，黄海欣.生脉饮(党参方)质量标准研究［J］.中国药师，2005，8(7):37-39

［4］ 张朝民，黄海欣，张玉洁.五味子糖浆质量标准研究［J］.中国实验方剂学杂志，2005，11(6):18-19