高效液相色谱法同时测定酱腌菜中的3种色素

谭建兵，周 亮（重庆市开县疾病预防控制中心 405499）

色素是指能被人适量食用的可使食物在一定程度上改变原有颜色的食品添加剂。其分为天然和人工合成两种。天然色素一般无毒害作用，而人工合成色素多以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、偶氮化等一系列有机反应化合而成，可影响人体细胞代谢、酶的活力，甚至能引起癌变，但由于其成本低廉，色泽鲜艳，着色力强，性质稳定，使用方便等特点使其在食品生产加工行业中被广泛应用［1-2］。目前我国允许使用的人工合成色素有苋菜红、胭脂红、柠檬黄、日落黄和靛蓝，在食品添加剂国家标准GB2760-2011［3］中规定了各种色素的允许使用量。本文结合日常工作实际，研究建立了一种简单、有效的样品纯水提取法，采用高效液相色谱，以0.02mol／L乙酸铵、甲醇梯度洗脱的方式同时测定酱腌菜中柠檬黄、胭脂红、日落黄，获得满意的实验结果。

1 材料与方法

1.1 主要仪器 高效液相色谱仪：岛津10AVP型附二极管阵列检测器，色谱柱：4.6mm×250mm，5μm（依利特）；IKA A11basic样品粉碎机（德国IKA公司）。

1.2 试剂与材料

1.2.1 材料 0.45μm水系微孔滤膜（津腾），5mL注射器。

1.2.2 试剂 甲醇（色谱纯，Merck公司），乙酸铵、柠檬酸为优级纯，实验室用水均为超纯水，电阻率18.25MΩ·cm（优谱公司超纯水制备）。

1.2.3 标准储备液 柠檬黄：中国计量科学研究院，批号：11001，浓度：0.50mg／mL，不确定度为1%，有效期至2014年4月，等级标准号为GBW（E）100001a。胭脂红：中国计量科学研究院，批号：11001，浓度：0.50mg／mL，不确定度为1%，有效期至2014年4月，等级标准号为GBW（E）100004a。日落黄：中国计量科学研究院，批号：10001，浓度：0.50mg／mL，不确定度为1%，有效期至2013年7月，等级标准号为GBW（E）100003a。

1.2.4 标准溶液的配制 准确吸取3种标准溶液各5.00 mL，用纯水稀释至刻度，混匀，分别配制成浓度为5μg／mL、10 μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、50μg／mL的标准工作曲线。

1.3 色谱条件 色谱柱：4.6mm×250mm，5μm HYPersil ODS2分析柱；流动相：A，甲醇，B，0.02mol／L乙酸铵，梯度洗脱（见表1）；流速：1.0mL／min；检测器：二极管阵列；检测波长：254nm，标准样品图谱如图1所示。

图1 标准样品色谱图（50μg／mL）

1.4 样品处理 称取1.00g已粉碎样品于10mL容量瓶中，加水至刻度，用柠檬酸溶液调pH＝6左右，振摇3min，静置3 h后置离心管中，2 000r／min离心5min，取上清液经微孔滤膜过滤后进样分析。

2 结 果

2.1 线性范围与检出限 3种色素的浓度与峰面积呈良好的线性关系，相关系数均可达到0.999 2以上，以3倍的噪音计算出最低检出量，再根据进样量换算为检出限，见表1。

2.2 精密度 取阴性样品，分别加入3种色素10μg／mL、20 μg／mL标准溶液，连续进行6次测定，计算相对标准偏差RSD值。RSD值在为1.10%～2.43%之间，精密度较好。

2.3 回收率试验 在已知含量的样品中加入一定量的色素标准溶液，进行加标回收测定，计算加标回收率，结果见表2。由表2可见样品加标回收率在88.3%～91.9%之间，回收率较理想。

表1 线性范围、线性方程及相关系数

表2 方法回收率实验结果

表3 两种方法回收率比较

3 讨 论

本研究的前处理方法为纯水直接提取法，而国标GB／T5009.35-2003［4］采用聚酰胺吸附法。国标方法所需器材及试剂多，成本高，操作过程繁琐，耗时长，损失大［5-6］。本法提取过程简单，准确快速，且少了很多中间抽滤、洗涤、解析、蒸发以及吸附等环节，减少了操作误差及不必要的损失，成本低，适应于大批量样品的测定。两种方法通过回收率实验，纯水直接提取法的柠檬黄、胭脂红、日落黄平均回收率分别为89.8%、89.0%、90.4%，聚酰胺吸附法的柠檬黄、胭脂红、日落黄平均回收率分别为85.4%、85.6%、85.3%（见表3）。

流动相梯度变化的选择和仪器及色谱柱有很大关系，甲醇的比例如果从一开始就过大，柠檬黄出峰太快，与杂质峰有干扰［7-8］，而是应逐渐增大甲醇的比例，以便获得更好的分离效果。

回收率实验证明纯水直接提取法提取效果更好，回收率更高，平行性、精密度更好，满足实验要求，能够同时检测酱腌菜中3种色素，适宜推广应用，为酱腌菜中色素的检测分析提供了依据。

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