明目疏脉片对眼氧化损伤大鼠抗氧化作用的影响

姜春英 李亚萍 杨 健 杨 丽 李银花 刘早霞

(吉林大学第二医院眼底一科，吉林 长春 130000)

白内障占世界致盲因素首位，也是我国第一位致盲眼病。国外学者提出晶状体氧化损伤是白内障形成的启动因素〔1〕。寻求有效的抗氧化物质拮抗晶状体的氧化损伤，延缓晶状体氧化损伤的发生、发展，已成为预防白内障的重要手段。本文采用实验性氧化损伤大鼠模型，以和血明目片为阳性对照药，进行明目疏脉片对实验性氧化损伤大鼠的抗氧化作用研究，以期为白内障的预防和治疗提供新的途径。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 Wistar大鼠，体重60～80 g，雌雄各半，动物合格证号:(吉)2003-0001，购自吉林大学医学部实验动物中心。常规饲料，自由饮水。

1.1.2 药物 明目疏脉片由当归、丹参、赤芍、牛膝、土鳖虫、水蛭组成，0.3 g/片，为本课题组研制，批号070401。临用前用蒸馏水配成含生药0.2 g/ml的混悬液。和血明目片，0.3 g/片，批准文号国药准字Z20025067，西安碑林药业股份有限公司，批号070901;美多丽(托吡卡胺)，10 ml，日本参天制药株式会社，制造号码MP0770，进口药品注册证号X970459。

1.1.3 试剂 D-半乳糖，上海恒信化学试剂有限公司(原上海试剂二厂)产品，批号20031030。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.1.4 仪器 紫外可见分光光度计(美国Beckman公司)，YZ-5E型裂隙灯显微系统(苏州医疗器械厂)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠实验性氧化损伤(白内障)模型的建立及给药裂隙灯显微镜检查后取双侧晶状体均无白内障的大鼠60只，随机分为正常对照组、模型组、明目疏脉片高、中、低剂量组(2、1、0.5 g·kg－1·d－1)及阳性药组(和血明目片 1 g·kg－1·d－1)，每组10只，雌雄各半。大鼠白内障模型的建立参照文献〔2〕方法，除正常对照组外，其余各组大鼠每日按15 g/kg腹腔注射50%D-半乳糖无菌液(分2次注射)，连续注射4 w，正常对照组腹腔注射等量生理盐水。

于诱发模型当日开始，正常对照组和模型组灌胃生理盐水，阳性药组、明目疏脉片高、中、低剂量组动物按上述剂量连续灌胃给药4 w。

1.2.2 晶状体检查 从实验开始起，除正常对照组外，其余各组大鼠每日用1%阿托品液散瞳，裂隙灯显微镜下检查晶状体混浊情况，并记录出现I级混浊的时间。

1.2.3 晶状体匀浆制备与生化指标测定 实验结束后，将大鼠处死，摘出眼球，分离出晶状体，用4℃PBS缓冲液(pH7.4)制备匀浆，离心15 min，取上清液，羟胺法测定SOD活性，二硫代二硝基苯甲酸法测定GSH-Px活性及GSH含量，硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量，上述生化指标均严格按试剂盒要求进行操作。同时取血，按上述方法测血清SOD活性和MDA含量。

1.3 统计学处理 采用秩和检验等级序值法，其他数据以x±s表示，进行 t检验。

2 结果

2.1 明目疏脉片对大鼠白内障晶状体混浊发生时间的影响见表1。明目疏脉片按高、中、低剂量灌胃给药能明显延缓大鼠晶状体混浊的发生时间〔分别为(19.3±2.76)、(18.4±2.65)、(17.2±2.35)d〕，与模型组〔(15.8±1.92)d〕比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。并且在同等剂量下(1.0 g/kg)，明目疏脉片的作用强于阳性药〔(16.2±1.86)d〕(P＜0.05)。

2.2 明目疏脉片对大鼠白内障晶状体SOD、GSH-Px活性及GSH、MDA含量的影响 见表1。明目疏脉片能明显降低大鼠白内障晶状体MDA的含量，明显提高白内障晶状体SOD、GSHPx活性及GSH的含量，与模型组比较有显著性差异;与阳性药(和血明目片)比较也有显著性差异。而和血明目片的上述作用不明显，表明明目疏脉片具有明显的抗氧化作用，并且上述抗氧化作用明显强于和血明目片。

表1 明目疏脉片对大鼠白内障晶状体SOD、GSH-Px活性及GSH、MDA含量的影响(x ± s，n=10)

2.3 明目疏脉片对白内障大鼠血清SOD活性和MDA含量的影响 见表2，明目疏脉片能明显降低白内障大鼠血清MDA含量，明显提高SOD活性，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.001);与阳性药(和血明目片)比较，也有显著性差异。而和血明目片的上述作用不明显，表明明目疏脉片的抗氧化作用明显强于和血明目片。

表2 明目疏脉片对白内障大鼠血清SOD活性及MDA含量的影响(x ± s，n=10)

3 讨论

许多研究表明，自由基氧化损伤是白内障的主要发病机制之一，自由基可造成晶状体细胞膜的脂质过氧化，破坏损伤晶状体纤维结构而形成白内障〔2〕;并且，脂质过氧化产物MDA是白内障病理变化的主要产物〔3〕。此外，白内障晶体中抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性和抗氧化剂(CSH含量)明显减少〔4〕。

本实验证明，明目疏脉片能显著延缓大鼠白内障的发生，显著降低白内障大鼠血清和晶状体MDA含量，增强血清和晶状体SOD活性，提高晶状体GSH-Px活性及GSH的含量，作用明显强于对照药(和血明目片)。表明明目疏脉片具有显著的抗氧化作用，很可能是其防治眼氧化损伤的作用机制之一。

1 Spector A.Oxidative stress-induced cataract mechanism of action〔J〕.Faseb J，1995;9(12):173-4，179.

2 季 晖，濮祖茂，龚国清，等.豚鼠D-半乳糖性白内障的实验模型研究〔J〕.眼科研究，1996;14(4):236-9.

3 Girao H，Mota C，Pereia P.Cholesterol may act as an antioxidant in lens membranes〔J〕.Cur Eye Res，1999;18(6):448-54.

4 韩秀娴，陈集敏，王 翔，等.探讨氧化应力与半乳糖诱导白内障之间的关系〔J〕.眼科研究，1999;17(1):34-7.