五味子粗多糖对脑胶质瘤细胞生长的作用

温 娜 唐泽波 袁 瑞 金 宏 王 爽 齐 玲 刘兴吉

(吉林医药学院医学实验中心，吉林 吉林 132013)

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，约占颅内肿瘤的45%〔1〕。恶性胶质瘤呈浸润性生长，边界不清，手术难以根除，具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的特点，目前尚缺乏满意的治疗手段。五味子粗多糖是从五味子干燥成熟果实中提取的总多糖，具有保肝、抗疲劳、抗衰老、增强免疫等功效〔2〕。目前，国内外对五味子多糖的研究多集中在粗多糖的提取及定量测定方面〔3，4〕，对脑肿瘤的治疗作用少有研究。本研究通过观察五味子粗多糖对体外培养大鼠脑胶质瘤C6细胞生长的影响，旨在探讨五味子粗多糖对脑肿瘤细胞生长的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 细胞培养基RPMI-1640(Thermo公司)，小牛血清(Gibco公司)，五味子粗多糖(北华大学提供)，胰蛋白酶(Gibco公司)，四甲基偶氮唑蓝(MTT，Sigma公司)，二甲基亚砜(DMSO，Thermo公司)。

1.2 大鼠脑胶质瘤C6细胞的培养 从液氮中取出冻存的大鼠脑胶质瘤C6细胞，迅速放入37℃水浴箱中摇动溶解，然后将细胞接种于培养瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，将其置入37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养，隔日换液。

1.3 MTT法检测药物对脑胶质瘤C6细胞生长的影响 将五味子粗多糖用85%乙醇溶解后，取适量液体加入含5%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，配制成终浓度为0、1.25、2.5、5 mmol/L的药物。取对数生长期细胞，用胰酶消化收集细胞，用含5%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液调整细胞悬液浓度为8×106/ml。取96孔细胞培养板，每孔中加入100μl，置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养24 h，使细胞同步化。分别于3、12、24、48 h弃去上清液，加入含不同浓度的五味子粗多糖，每个药物浓度重复5次。药物作用结束时，每孔加入MTT 20μl，37℃继续孵育4 h，终止细胞培养，弃去上清液，每孔分别加150μl DMSO，摇床振荡均匀使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶联免疫检测仪上490 nm波长处测定各孔吸光度(A)值，用不加细胞的空白孔调零。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，所有数据以x±s表示。

2 结果

在药物作用的不同时间，细胞的生长反应不一，但主要以抑制生长作用为主。当药物作用3、12、24、48 h时，五味子粗多糖各浓度对大鼠脑胶质瘤C6细胞均有抑制作用，抑制效应随药物浓度的增加而加强，表现为明显的浓度依赖性。在药物作用48 h时，1.25、2.5、5 mmol/L的测定结果与对照组相比，均具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。见表1。

表1 不同浓度五味子粗多糖对大鼠脑胶质瘤C6细胞生长的作用(x±s)

3 讨论

五味子抗肿瘤作用主要集中在木脂素和多糖成分〔5〕，其中，五味子多糖是其抗肿瘤的主要成分之一，初步药理研究表明，其具有抑制肿瘤、保肝、抗衰老、抗突变、清除氧自由基等作用〔6～11〕。通过研究发现，五味子多糖对S180荷瘤小鼠有较好的抑瘤作用，并能延长H22荷瘤小鼠的生存时间。另外，于赫等〔11〕研究发现，五味子多糖高、中剂量对小鼠H22肝癌移植瘤具有抑制作用，平均抑瘤率为52.83%;且高剂量五味子多糖可在器官水平上增强H22荷瘤小鼠的免疫能力，从而起到间接抗肿瘤作用。因此，五味子粗多糖具有预防和治疗肿瘤的潜在价值。

本实验观察了不同浓度五味子粗多糖对体外培养大鼠脑胶质瘤C6细胞生长的影响，结果发现，五味子粗多糖对大鼠脑胶质瘤C6细胞作用24 h和48 h时，可明显抑制肿瘤细胞的生长，并且表现为明显的浓度依赖效应。五味子粗多糖可能通过不同途径发挥其抗肿瘤的作用，本实验初步说明五味子粗多糖具有直接抑制肿瘤生长的作用，可能在治疗脑胶质瘤上发挥一定的作用。但其抗肿瘤的具体机制还不清楚，仍待进一步研究。

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3 安秀吉，景 旭，纪文泽.五味子多糖提取工艺及含量测定研究〔J〕.黑龙江科技信息，2007;11(11):7-10.

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11 于 赫，李 冀，齐 彦.五味子多糖对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其免疫学机理初探〔J〕.中医药信息，2010;27(2):26-7.