糖尿病肾病早期测定同型半胱氨酸和高敏C反应蛋白的价值

陈 雨

（黑龙江省鸡西市人民医院输血科 黑龙江 鸡西 158100）

糖尿病肾脏病变包括感染性病变和血管性病变，感染性病变有肾盂肾炎和肾乳头坏死。血管性病变分微血管和大血管病变，大血管病变包括肾动脉硬化和肾小动脉硬化。微血管病变是指肾小球硬化，分结节性、渗出性和弥漫性三种，三者可单独可合并存在，上述改变中，最典型的是结节性肾小球硬化。我们通常说的糖尿病肾病是肾小球硬化。因此，早期诊断和肾脏微血管病变的判断对于糖尿病肾病的治疗具有重要意义。本文以尿蛋白／血肌酐值作为判断糖尿病患者肾脏微血管病变情况的标准，分析血清同型半胱氨酸（Hcy）和高敏C反应蛋白（hs－CRP）水平在糖尿病肾病早期诊断中的价值。

1 一般资料

选择2009年1月－2012年5月间我院住院糖尿病肾病患者58例病历资料，男38例，女20例，年龄48－76岁，选择同期在我院体检健康人最为对照组。患者生命体征：肾小球滤过率增高，为最早出现的功能性改变；蛋白尿是糖尿病肾病最主要的表现；约10%%糖尿病肾病在病程的某一阶段表现为肾病综合征，尿蛋白＞3g／／24h，血清白蛋白降低，浮肿，高胆固醇血症；明显高血压是糖尿病肾病晚期的表现；临床糖尿病肾病多发生在糖尿病病程15年之后，一旦出现明显蛋白尿，肾小球滤过率就逐步而恒定地下降，平均每月下降约lml／／min，进入终末期肾功能不全。

2 检测方法

患者采血时间皆选在入院后第二日清晨，空腹12h于肘部取静脉血5ml加入含有乙二胺四乙酸二钾（EDTA－K2）的试管中；对照组空腹12h于肘部取静脉血5ml加入含有EDTA－K2的试管中。将上述含有抗凝血液样品的试管分别以3 000r／min离心10min，静置后取上层血清，稀释10倍作待测样品备用。ELISA法测定血清Hcy水平：试剂盒内标准品浓度为200μmol／L，按2倍比系列稀释，稀释后浓度为100，50，25，12.5，6.25，3.125μmol／L。设置一个空白孔加入待测样品100μl，立刻加入终止液100μl，终止反应。取7种标准品和待测样品各100μl加入酶标板反应孔底部，混匀、加盖后于37℃下温育120min；弃液，在酶标板反应孔底部加入100μl生物素标记抗体工作液，混匀、加盖后于37℃温育60min；弃液后洗板5次，向酶标板反应孔底部加入100μl辣根过氧化物酶标记亲和素工作液，混匀、加盖后于37℃温育60min。弃液后洗板5次，在酶标板反应孔底部加入100μl TMB溶液，混匀、加盖后于37℃温育30min，加入50μl终止液终止反应。用酶标仪测出各孔在450nm处OD值，以标准品测定OD值绘制标准曲线，计算样品血清Hcy水平。血清hs－CRP水平测定：采用ELISA法测定，详细操作步骤参考血清Hcy水平测定。

3 结果

经过测定表明：糖尿病肾病患者血清Hcy和hs－CRP水平与患者性别、病程、体重指数、心血管疾病、抗生素使用情况有关；尿蛋白正常组、微量蛋白尿组和大量蛋白尿组血清同型半胱氨酸和高敏C反应蛋白都显著高于健康人组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。大量蛋白尿组血清同型半胱氨酸和高敏C反应蛋白浓度都显著高于微量蛋白尿组和尿蛋白正常组，微量蛋白尿组血清Hcy水平显著高于尿蛋白正常组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

4 讨论

引起血清同型半胱氨酸升高的主要原因有遗传和环境营养两种因素：遗传因素主要是一种命名为N5甲基四氢叶酸转甲基酶及胱硫醚－β－合成酶的基因发生突变，引起酶的活性降低，从而导致同型半胱氨酸血症。现在已经证明N5甲基四氢叶酸转甲基酶的缺陷，在体内叶酸缺乏的情况下，可以引起同型半胱氨酸浓度的明显升高。由遗传缺陷引起的胱硫醚－β－合成酶的活性降低，可导致血浆中同型半胱氨酸的浓度超过正常值的十倍左右。环境营养因素指代谢辅助因子如叶酸、维生素B6、B12缺乏，这些因子在同型半胱氨酸代谢反应中为必需因子，均可导致高同型半胱氨酸血症的发生。hs－CRP是一种由肝细胞合成和分泌的非糖基化聚合蛋白，作为一种急性损伤、感染或炎症刺激的急性时相反应蛋白，hs－CRP是一种非特异性的炎症血清生物标记因子。Jamaluddin MS等［1］在一个9年的前瞻性随访研究中，对328例糖尿病肾病患者的尿蛋白排泄率和血清hs－CRP水平进行了监测，发现二者具有相关性，进而提出糖尿病肾病是hs－CRP参与介导的长期慢性炎症反应病理过程的理论。因此，推断血清hs－CRP水平对于老年糖尿病早期肾脏微血管病变程度诊断的敏感性低于Hcy。分析认为可能与hs－CRP作为一种非特异性炎症标记因子有关，老年患者本身具有多方面的致使血清hs－CRP水平升高的因素存在，如高龄、长期抽烟、感染、合并心血管疾病等，这些使得血清hs－CRP在判断早期糖尿病肾脏微血管病变程度方面敏感性下降。因此，老年患者的血清hs－CRP水平升高与其病程、吸烟情况、体重指数、合并心血管疾病情况等密切相关。总之，血清同型半胱氨酸是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，评价心脑血管风险的指标，价值等同于血糖、血脂、血压，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子；血清同型半胱氨酸和高敏C反应蛋白水平与老年糖尿病肾病的发生和发展密切相关，二者检测将有助于进一步了解糖尿病肾病患者的发病机制，并对糖尿病的诊治提供新的线索。

［1］Jamaluddin MS，Yang X，Wang H.Hyperhomocysteinemia，DNA methylation and vascular disease〔J〕.Clin Chem Lab Med，2009；18：60