改进饱和盐水漂浮法快速大量检测兔球虫

曾彦钦 陈 震 福建省福州市农业科学研究所 福州 350008

兔球虫是危害家兔最广、最严重的寄生虫。笔者以改进饱和盐水漂浮法快速检测418 只兔的球虫卵囊数。轮换添加抗球虫药的试验兔群仍检出7 种球虫，其中大型艾美耳球虫阳性率最高，斯氏艾美耳球虫阳性兔的卵囊平均数最高。现将详情报道如下。

1 材料和方法

1.1 制备饱和盐水 1 000 mL 冷开水中加入超过410 g 普通食盐，置于密闭玻璃瓶，用力摇匀，静置过夜，取用上清液。

1.2 其他材料 60 目小铜筛、大小与150 mL 小烧杯相似的玻瓶（内装6～10 mL 饱和盐水）、干净的青霉素瓶或疫苗瓶（内装0.2～0.5 g 食盐）、长镊子、干净的瓷砖（15 cm×20 cm）。

1.3 试验兔群 试验兔为35～90日龄黄兔，在每千克饲料中每4 d 轮换添加可爱丹125 mg、氯苯胍100 mg、地克珠利1 mg。91日龄以后不再使用任何抗球虫药。

1.4 取粪便 取粪前，先将笼底和集粪板冲洗干净，待兔笼晾干后，将干净的瓷砖密铺在兔笼里。3 h后可从瓷砖上取样，不管兔日龄大小，每只兔只取一粒粪。将样品在6～10 mL 饱和盐水中充分化开，粪液经60 目小铜筛过滤，把滤液装在备好的青霉素瓶中。每取完一次样品后，小铜筛、小烧杯和长镊子须先以流水充分冲洗干净，再进行第二次取样。

2 镜 检

选用带有圆形凹槽的载玻片。以吸管从前、后、左、右、中五个方向轻触样品的液面，吸取表面的粪液滴加于载玻片的凹槽中。先用10×12.5倍镜扫视（缓慢移动载玻片，同时以粗调调焦），球虫卵囊漂浮在液面。125倍镜下观察，卵囊呈椭圆形、西瓜子形、鸭蛋形，能明显看到蛋壳状结构，无色、淡黄色、金黄色等。以125倍镜对卵囊定位后，即以40×12.5倍镜进一步观察卵囊形状和结构。本试验观察到的卵囊都是未胞子化的。

以125倍镜观察，在液面顶部取9个视野，用红血球记数器记数，算出9个视野中球虫卵囊的数量。必要时，算出9个视野中球虫卵囊的数量后，将载玻片上的球虫卵囊以触片法重新制片，在500倍镜下进一步观察卵囊形状和结构。

3 结 果

共检测418 只兔的粪样，发现7 种球虫，包括穿孔艾美耳球虫、中型艾美耳球虫、大型艾美耳球虫、斯氏艾美耳球虫、无残艾美耳球虫、盲肠艾美耳球虫、长形艾美耳球虫。在各个日龄段中，大型艾美耳球虫阳性率最高，斯氏艾美耳球虫阳性兔的平均卵囊数最高，见表1，表中的卵囊数指阳性兔每一种球虫的平均卵囊数。

表1 不同日龄黄兔检出球虫卵囊的情况

大于100日龄的兔，检出的各种球虫卵囊数明显减少，从一粒粪中检出的球虫卵囊总数多在10个以内，见表2。

表2 与球虫卵囊总数区间对应的兔数

4 讨论与小结

1）试验兔于35～90日龄在每千克饲料中每4 d轮换添加可爱丹125 mg、氯苯胍100 mg、地克珠利1 mg。未发现球虫病死兔，说明该用药方案可行。从表1 可看出，在该用药方案下，黄兔仍感染多种球虫，并排出卵囊，只是药物控制了球虫的繁殖，减弱球虫对上皮组织的破坏。因此，虽有少数小兔出现短暂食欲下降、排软粪，但无腹涨等重症和死亡。兔既可以产生抗球虫免疫力，又不会死亡。

2）各种兔球虫卵囊的形态、大小、颜色、结构等资料，在网络、书刊上都易获得，文中不再重复描述，只谈本试验操作显微镜下观察体会。球虫卵囊漂浮在液面，可能会轻微晃动和移动，观察时要避免显微镜周围有风扇等空气流动的因素。125倍镜下，大型艾美耳球虫卵囊最好辩认，呈金黄色小西瓜籽状，卵膜孔的一端较平，有2个小突起（500倍镜下，卵膜孔明显，呈堤状突出于卵囊壁）；斯氏艾美耳球虫卵囊长度与大型艾美耳球虫卵囊相近，但较瘦，接近两端对称的椭圆形，淡黄色泽接近大型艾美耳球虫卵囊（500倍镜下，似橙红色鸭蛋，卵膜孔明显，位于一端的顶部）；中型艾美耳球虫在125倍镜下，形状近似75%大小的斯氏艾美耳球虫卵囊，色泽为比斯氏球虫更淡（近无色）的浅黄色（500倍镜下，有卵膜孔，短椭圆形，形状近似75%大小的斯氏球虫卵囊）；穿孔艾美耳球虫在125倍镜下呈无色透明短椭圆形，大小约为50%中型艾美耳球虫卵囊（500倍镜下，卵膜孔不明显，近圆形的短椭圆，有很浅的浅紫色）；125倍镜下无残艾美耳球虫卵囊比大型艾美耳球虫卵囊略大，二者色相近，但无残球虫卵囊无2个小突起；盲肠艾美耳球虫卵囊呈淡棕色；长形艾美耳球虫卵囊呈很长的瘦长椭圆形。

3）7 只小兔检出的球虫卵囊数≥200个，主要是斯氏艾美耳球虫，7 只小兔均成活。从一粒粪检出大型艾美耳球虫卵囊数≥100个的兔粪滤液都混浊；从一粒粪检出斯氏艾美耳球虫卵囊数≥100个的兔粪滤液多数较清。但兔粪滤液混浊的样品，也有只检出少量几个球虫卵囊的现象。

4）从一粒粪﹙70日龄﹚检出球虫卵囊数最多的达390个。取一粒粪就够了，无需多取，球虫卵囊的多寡也与粪粒的大小无关。只取一粒新鲜兔粪，既可节省取样时间，操作又简便，并可作定量比较。