南平市延平区部分规模猪场猪伪狂犬病血清学初步调查

王有木 黄剑锋 李 鹤 卢华龙 陈 聪

（福建省南平市延平区动物疫病预防控制中心 353000）

猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一种高度接触性传染病，猪是该病的主要宿主和传染源，健康猪与患猪、带毒猪直接接触可感染该病。通常引起妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔；初生仔猪出现神经症状，感染率和死亡率可达100%，成年猪感染后多耐过，不发病呈隐性感染，造成长期带毒、排毒，成为最危险的传染源，严重影响种猪场生产。该病广泛分布于世界各地，已有50 多个国家和地区报道该病的流行，给养猪业构成很大威胁。我国自1947年首次报道该病以来，随着养猪业集约化规模化的发展，已有20 多个省市报道发生了该病，并在许多种猪场呈暴发流行趋势，给我国养猪业造成了巨大的经济损失［1］。

为了解延平区猪伪狂犬病的感染情况，笔者于2013年1～6月，抽取10个使用猪伪狂犬gE 基因缺失疫苗免疫的规模猪场共366 份血清样品进行了感染情况的检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 法国LSI 伪狂犬病gE 抗体检测试剂盒（ADC-gE-Ab），诊断试剂购自北京天之泰生物技术有限公司，诊断试剂盒（批号：2-PRVGEC-004、有效期：2014-06）。德国Transferpette 移液器；北京普朗DNM-9602 酶标仪和TECANM8/2R 洗板机；恒温水浴锅；离心机。

1.2 样品来源 耳静脉采集延平区免疫猪伪狂犬病gE 基因缺失疫苗的10个不同猪场猪血样共366 份，采集后直立摆放，放室温待血清析出分离血清，-20 ℃冷冻保存待检。

1.3 操作步骤与判定标准 首先将待检血清和猪伪狂犬病抗体检测试剂盒恢复到室温（18～25 ℃），然后按照产品说明书要求进行孵育和操作。

1）取预包被的微孔板，用样品稀释液将待检样品、对照血清1：1 稀释后加入板孔中，每孔100μL。其中阴性、阳性对照各设2 孔，对照孔内加入阴性、阳性血清各50μL，剩余孔内加待检样品50μL，每孔再加入稀释液50μL，轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37 ℃温育60 min。

2）用洗涤液洗板4 次，300μL/孔，最后一次在不掉屑干净吸水纸上拍干。

3）每孔加酶标二抗（抗猪IgG-HRP 结合物）100μL，置37 ℃温育30 min。

4）洗涤4 次，方法同2）。

5）每孔加底物100μL，混匀，18～25 ℃避光显色15 min。

6）每孔加入终止液100μL，混匀，置酶标仪450 nm 处测各孔OD 值。30 min 内测定结果。

7）结果计算：用INH%来说明检测结果。INH%=［（阴性对照平均值-样品OD450值）/（阴性对照平均值）］×100%。

8）试验成立标准：阴性对照OD450平均值-阳性对照OD450平均值＞0.6，阳性对照阻断值＞60%，试验结果成立。如果阴性对照OD450平均值-阳性对照OD450平均值≦0.6，试验结果不成立，样品应重新检测。

9）结果判断：INH%＜40为阴性，40≤INH%≤45为可疑，INH%＞45为阳性。

本次调查的血清大部分来自注射了基因缺失苗的规模化猪场，所以，PRVgE 抗体阳性可以判定为伪狂犬病野毒感染。在进行猪场结果判定和统计时，只要猪场有一个样品判定为阳性，则该场判定为伪狂犬病野毒阳性场。

2 结 果

检测10个规模猪场血清样品366 份，有7个猪场检出阳性，检出阳性样品66 份；猪场阳性率为70%，样品阳性率为18.03%，见表1。

3 结论与分析

1）延平区的猪群基本进行过该病的疫苗免疫，通过对10个规模猪场进行检测发现，该病阳性猪场数为7个，猪场阳性率为70.00%，检测样品数366份，样品阳性数66 份，样品阳性率为18.03%，说明猪伪狂犬病在延平区规模猪场中普遍存在。猪体内存在伪狂犬病病毒是潜在的发病因素，结果显示，延平区猪伪狂犬病野毒感染场阳性率从0%至61%不等。由此表明，疫苗接种虽然能有效降低该病的发生率、减少病毒的散播，但大部分猪场并没有彻底根除该病，部分免疫猪仍存在排毒的可能，给易感猪造成严重的威胁。

表1 延平区部分猪场猪伪狂犬病野毒抗体检测结果

2）该次调查为初次调查，缺乏本区对比数据，今后将继续开展该项调查，进一步摸清延平区规模猪场猪伪狂犬病野毒感染情况。但根据陈如敬等［2］2009年对福建省部分地区规模化猪场伪狂犬病感染情况调查结果，检测南平市猪伪狂犬病野毒抗体，猪场阳性率为100%（6/6），样品阳性率为52.00%（82/158），本试验与该结果相差不大，说明延平区规模猪场伪狂犬病野毒感染情况普遍存在。本次调查检测样品均为母猪和公猪，在猪群中，病毒可通过鼻分泌物传播，但另据报道经乳汁和精液传播也是可能的途径［3］。因此，PR的防疫和净化工作在延平区仍是任重而道远，在这种高伪狂犬病野毒感染率的情况下，对于猪场而言，特别是对外供应种猪和精液的种猪场，应将PR的防疫和净化工作及早纳入日程，同时，做好常规疫病防治，采取综合防治措施，加强生物安全和饲养管理等。

［1］李春华，王英，蒋凤英，等.猪伪狂犬病研究进展［J］.动物医学进展，2008，29（3）：68.

［2］陈如敬，王隆柏，魏宏，等.福建省部分地区规模化猪场伪狂犬病感染情况调查［J］.养猪，2010（1）：39-40.

［3］李国平，周伦江，王全溪.猪传染病防控技术［M］.福州：福建科学技术出版社，2012：128.