冠心病患者焦虑情绪与载脂蛋白E 基因多态性研究

吕俊

吸烟、高血压、高脂血症、糖尿病作为冠心病(CHD)主要危险因子已为我们所熟悉［1］，随着人类对CHD 更深一步的研究发现，载脂蛋白E (ApoE) 基因多态性和CHD 患者的焦虑情绪也存着很大的关联。ApoE 作为脂蛋白中一种非常重要的成分，研究证明ApoE 基因是目前较为明确的CHD 候选基因，被认为是CHD 的遗传标记［2－3］。本研究将对于焦虑情绪与ApoE 基因多态性之间的联系做进一步的探讨和分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 研究组 选择2011 年6 月—2012 年2 月入住本院心血管内科病房的CHD 患者90 例，入选标准： (1) 通过心电图检查或是符合其他的一些诊断标准被明确诊断为CHD。(2)病情进入到一个比较稳定的阶段。(3) 所有研究对象不伴有其他方面的基础疾病，并且都来自同一个种族(汉族) ，组员之间无血缘关系。(4) 已经被告知此研究情况并自愿参与。(5) 无其他精神问题。采用汉密尔顿焦虑测量表(HAMA－14) 和焦虑自评测量表(SAS) ，将患者分为伴有焦虑情绪的CHD 组(焦虑组) 和不伴有焦虑情绪的CHD 组 (非焦虑组) ，各45 例。其中焦虑组，女20 例，年龄37 ～73 岁，平均(55.2 ±11.5) 岁； 男25 例，年龄36 ～72 岁，平均(57.4 ±12.1) 岁。非焦虑组，女22 例，年龄37 ～71 岁，平均(54.9±10.5) 岁； 男23 例，年龄39 ～73 岁，平均(56.7 ±10.8)岁。

1.1.2 对照组 入选标准： (1) 无情绪和精神等障碍； (2)临床和实验室辅助检查无能够诊断为CHD 的证据； (3) 对本研究的一些具体事情已经完全知晓； (4) 种族、文化程度、所在的居住地和所选取的研究对象相接近。选取同期本院符合要求的45 例为对照组，其中男24 例，女21 例； 年龄37 ～73岁，平均(55.8 ±10.1) 岁。

1.2 方法

1.2.1 情绪评定 研究对象在相同的指导语条件下，在无外界干扰的实验室内或是医院病房内做完HAMA、SAS 的测定。

1.2.2 采集所需的血液标本 对研究对象禁食12h 后于第2天早上采集肘静脉血5.0ml，对所采集的血进行抗凝，用离心机对血样在2h 内进行离心，再取离心所得的血浆成分进行血脂的测定。将血细胞储藏在－70℃的冷冻箱中保存，用来获取DNA。再将其整合起来分析ApoE 基因的多态性。

1.2.3 测定血脂 用氧化酶法对所有研究对象的三酰甘油(TG) 和总胆固醇(TC) 进行测定； 用均相法来测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C) 和低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C) ； 载脂蛋白A1 (ApoA1) 和载脂蛋白B (ApoB) 采用免疫法测定。

1.2.4 提取模版DNA 取受试对象的血细胞，将其中的白细胞分离出来，采用Znbenko GS 等方法提取人类基因组DNA。

1.2.5 ApoE 基因具备的聚合酶链反应－限制性片段长度多态性(PCR－RFLP) 分析 (1) PCR 扩增： 反应的体积是45μl，当中10 ×Buffer 4.5μl； 4 ×dNTPs3.5μl； MgCl23.5μl；引物1 和引物2 各为2.0μl； DMSO 4.5μl； 模板DNA 5.5μl。放置到热循环仪器里95℃预变性6min 后，再放入Tap DNA 聚合酶2 个单位，之后根据下面的程序进行5 次循环，即96℃变性10s、64℃退火40s、72℃延伸1.3min，再按以下程序循环25 次，既95℃变性9s，63℃退火35s、69℃延伸1.3min。最后于71℃再延伸9min。(2) 酶切： PCR 扩增所得的产物8.5μl，加入9.5μl Hhal 限制性内切酶与1.5μl Buffer，放在37℃恒温酶切消化过夜，聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳后进行银染［3］。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0 软件进行统计学分析，计量资料采用t 检验，计数资料采用χ2检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 焦虑组和对照组ApoE 基因型比较，差异有统计学意义(P ＜0.05，见表1) 。

2.2 对照组携带e4 等位基因的频率明显低于非焦虑组(χ2=4.44，P ＜0.05) ； 各组携带e2、e3 等位基因的频率比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表2) 。

2.3 携带e4 等位基因的CHD 患者和不携带e4 等位基因的CHD 患者的HAMA、SAS 评分及LDL、TC 水平比较，差异均有统计学意义(P ＜0.05，见表3) 。

表1 3 组ApoE 基因型的比较〔n (%) 〕Table 1 Comparison of ApoE genotype in the three groups

表2 3 组携带ApoE 等位基因情况比较〔n (%) 〕Table Comparison of carrying the ApoE allele status in the three groups

表3 CHD 患者是否携带84 等位基因的量表评分和血脂水平比较(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

表3 CHD 患者是否携带84 等位基因的量表评分和血脂水平比较(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

组别 例数 HAMA(分) SAS(分) ApoB(g/L) ApoA1(g/L) LDL(mmol/L) TG(mmol/L) TC(mmol/L)±0.9 1.4 ±0.8 5.3 ±0.8未携带e4 组 69 8.9 ±6.3 36.9 ±8.1 0.91 ±0.15 1.29 ±0.25 2.9 ±1.0 1.4 ±0.5 4.5 ±1.2 t携带e4 组 21 13.1 ±5.1 41.2 ±7.5 0.95 ±0.30 1.37 ±0.32 3.4 3.11 3.12 0.72 0.24 2.08 0.23 2.15 P 值值0.003 0.003 0.421 0.635 0.029 0.811 0.025

3 讨论

CHD 是常见的多发病，是心血管系统疾病常见的死亡原因之一［4］，CHD 不仅是一种生理疾病，同时也属于心理疾病。已经有很多研究报道及调查显示，一些社会上存在的对人类心理有影响的因素对CHD 病程的发生和发展都起着不可忽视的作用，而且也是引起CHD 恶性冠状动脉事件、导致猝死的重要危险因素［5］。相当一部分的CHD 患者在不同程度上伴有一定程度的焦虑情绪，其所占的比例比无CHD 的健康人高出很多，同时也比患有其他病的人群高出许多。CHD 患者普遍存在焦虑情绪，是比较常见的一种情绪问题。目前，关于ApoE基因和抑郁之间联系的报道已有许多，但是研究ApoE 基因和焦虑情绪的报道却是罕见。国外只有个别几个医学方面的专家在实验动物身上对其进行了一些研究，利用1 个简单化的迷宫对缺失C57BL/6 实验鼠与野外生存的C57BL/6 小鼠就与焦虑有关的一些行为进行了观察和分析，研究结果显示，前者实验鼠的焦虑水平远低于后者小鼠，说明焦虑的产生和ApoE 基因之间有比较紧密的联系［6］。

本研究发现CHD 患者抑郁与ApoE 基因e3/4 型和e4 等位基因多态性有一定关联［7－8］，非焦虑组患者的e4/4 基因型和其等位基因的频率显然低于焦虑组患者； 非焦虑组和对照组各等位基出现的频率和其基因型，无显著差异，说明CHD 患者产生焦虑情绪的原因中，e4/4 基因型和e4 等位基因有可能占有重要的位置，更进一步说明了CHD 患者焦虑情绪的产生与ApoE 基因的多态性之间存有很大的相关性。因此，对于CHD伴有焦虑情绪患者的相关临床表现及病因还需进行更深的探讨。

1 汗春红，周新，周光娣，等. 冠心病易感基因载脂蛋白E、低密度脂蛋白受体多态性与烟、酒的交互作用的研究［J］. 中华医学杂志，2004，84 (7) ： 554－558.

2 邹阳春，洪秀芳，胡大一，等. 国人载脂蛋白E 基因多态性与冠心病发病之间的相关性［J］ . 中国动脉硬化杂志，2005，13(3) ： 355－357.

3 季卫东，成俊祥，赵国安，等. ApoE 基因多态性与冠心病患者抑郁情绪的关系［J］. 中国心理卫生杂志，2005，19 (1) ： 1－4.

4 黄跃斌，何印蕾. ApoE 基因多态性、hs－CRP 与冠心病的相关性研究［J］. 中国老年学杂志，2009，11 (29) ： 2864－2866.

5 戚厚兴，冯学泉，张作记，等. 冠心病患者焦虑情绪与ApoE 基因多态性［J］. 中国心理卫生杂志，2010，24 (5) ： 329－333.

6 王敏，李先平，赵立玲，等. 载脂蛋白E 基因缺陷小鼠血液生化指标的变化［J］. 中国全科医学，2010，13 (8) ： 2700.

7 戚厚兴，张作记，冯学泉，等. 冠心病患者焦虑情绪与血清氧化低密度脂蛋白含量的关系［J］ . 中国行为医学科学，2006，15(4) ： 313－315.

8 张兰英，赵红侠. 冠心病合并抑郁症的治疗研究［J］. 实用心脑肺血管病杂志，2011，19 (5) ： 732.