月矾中空栓体外抑菌作用研究

刘 蕊，袁 汀，王 美，张振秋

月矾中空栓是一种临床用于治疗妇科宫颈糜烂的中药制剂，是普通栓剂的改良剂型。与普通栓剂相比，具有药物更加稳定、药物一次性释放、药物速释、达峰时间短、起效快、吸收利用率高、用药方便等特点。月矾中空栓以苦参、蛇床子、儿茶、血竭、青黛等为主要成分，具有清热解毒、活血止痛、化腐生肌、收敛止血的功效。宫颈糜烂的过程常常伴有炎症或者不同程度的感染，本文研究了月矾中空栓和月宫普通栓对4 种妇科常见细菌的体外抑菌作用，并比较了2 种剂型的体外抑菌效力，为临床用药提供了实验基础和理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 YX-280AS 型手提式不锈钢蒸汽消毒器(上海三申医疗器械有限公司);DNP9162 电热恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司，太仓精宏仪器设备有限公司);SHP-450 生化培养箱(上海精宏实验设备有限公司，太仓精宏仪器设备有限公司);SW-CJ-2FD 型洁净工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)。

1.2 试验菌种 金黄色葡萄球菌(26003)、大肠埃希菌(44102)、铜绿假单胞菌(10104)、白色念珠菌(98001)均购自中国生物制品检定所，经活化、鉴定后取对数生长期菌液进行试验。

1.3 培养基 除白色念珠菌使用真菌液体培养基和改良马丁琼脂培养基外，其他3 种试验菌均使用营养肉汤培养基和营养琼脂培养基，各种培养基均按照中国药典自制，经121 ℃、0.1 mPa 灭菌30 min，备用。

1.4 药物及试剂 月矾中空栓剂和月矾普通栓剂均为自制(批号:20120106、20120107)，所用试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 供试品溶液的制备 取月矾中空栓和月矾普通栓各10 粒，分别精密称定后计算平均粒重，50 ℃水浴使10 粒栓剂熔融，趁热混匀，冷却至室温后精密称重(6.25 g)，以灭菌水55 ℃水浴熔融，完全冷却后过滤，取续滤液，定容至50 mL，流通蒸汽灭菌15 min 后，备用。

2.2 供试液浓度的筛选 分别取浓度为0.5、0.25、0.1、0.05 g/mL 的栓剂提取物进行预试验，浓度为0.1、0.05 mg/L 时，药物抑菌作用不明显;浓度为0.5 mg/L 时，栓剂体积过大，无法提取定容，故确定供试液浓度为0.25 mg/L，既可保证产生适度抑菌作用，又便于实际操作。

2.3 菌液浓度的筛选 分别试用含菌数约为102、103、104、105CFU/mL 的菌悬液预试4 种供试液的抑菌作用，发现不同供试液对104CFU/L 的菌悬液均有明显抑菌作用，并具有可比性，因此，将其作为菌液的试验浓度。

2.4 最小抑菌浓度MIC(二倍稀释法)的测定将2 种月矾栓剂供试液分别用液体培养基对倍稀释，初始药液浓度分别为0.25 g/mL，取12 ×75 mm具塞试管分4 组编号排列在试管架上，每组10 支，于每个试管中先加入无菌液体培养基2.0 mL，然后于第一管中加入灭菌的供试药液2.0 mL，混匀后取出2.0 mL 加入第2 管中，依次稀释，直到第8 管取出2.0 mL 弃去，每组前8 支稀释管中分别加1 × 104CFU/mL 新鲜菌液0.1 mL。第9 管只加相应菌液作为阳性对照，以便观察培养基是否适合菌种生长。第10 管中加入2.0 mL 供试药液，混匀后取出2.0 mL 弃取，不加菌作为阴性对照，以便观察供试药液是否有污染。白色念珠菌组于28 ℃培养72 h，其他3 组于37 ℃培养48 h，然后将培养物1 mL 分别接种于营养琼脂培养基和改良马丁琼脂培养基平板中，在阴性对照、阳性对照符合要求的前提下，分别观察各平板，以菌数突然明显下降的最低药物浓度为MIC。结果月矾中空栓剂和月矾普通栓对4 种实验菌均有抑菌作用，其中对白色念珠菌的抑菌作用最强，其他依次是大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌;中空栓剂与普通栓剂相比对铜绿假单胞菌的抑制效果无明显差异，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌效力提高1 倍左右，对白色念珠菌的抑菌效力提高4 倍左右，结果见表1。

表1 月矾中空栓的最小抑菌浓度MIC(g/mL)

3 讨论

根据月矾栓的功能主治范围，本试验选用妇科临床常见的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌4 种致病菌，试验中所用菌株均应为相应菌种冻干粉接种于适宜培养基后的5 代以内转种菌，以保证其未变异，并具有足够活力。稀释至适宜浓度的菌液，应为每次试验前新制，并保证配制后1h 内使用完毕，以便将环境对菌液浓度的影响降至最低。

由于月矾栓剂提取物颜色较深，导致判断试验管中液体是否澄清有一定难度，因此，进一步将液体培养物接终于适宜培养基平板中，通过菌数变化，更加直观和准确地评价样品的抑菌效力。

本研究结果表明，月矾栓制成中空栓剂后，总体抑菌效力加强，这是因为普通栓剂仅由药材原粉与基质加热混合制成，影响部分有效成分的溶出，进而影响药物抑菌性能的发挥［1］。中空栓剂中，除性质不稳定及矿物质类药物之外，大部分药材经过提取，有效成分溶解于液体中，更易于发挥抑菌作用［2］。月矾栓剂型改进后对不同菌种抑菌作用的影响有所差别，这可能与方中各药物主要抑菌成分的溶解性、稳定性等原因有关，还有待于进一步研究探讨。

［1］ 张美玲，魏莲花，田洹，等.甘肃黄芩、苦参、金银花对深部酵母样真菌感染的体外抑菌试验研究［J］.中华医院感染学杂志，2009，9(2):149-150.

［2］ 周新蓓，张志国.30%苦参不同溶剂提取物对白色念珠菌体外抑制作用的研究［J］.中国现代药物应用，2008，2(7):29-31.