高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量

武晓红，敬永生

（河南大学 药学院，河南 开封 475004）

乙肝扶正胶囊为中药成方制剂，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》［1］。原标准鉴别项只有显微镜下观察而无含量测定，不同厂家的药品疗效差异很大。乙肝扶正胶囊是按照中医辩证理论，根据多年治疗乙肝的临床经验研制出的纯中药制剂。乙肝扶正胶囊由何首乌、当归、人参、丹参、虎杖、麻黄、贯众等贵重药材精制而成，对改善肝炎患者的自觉症状，降低谷丙转氨酶，恢复肝功能和表面抗原转阴作用迅速，疗效显著。适用范围很广，即肝区隐痛不适，全身乏力，腰膝酸软，气短心悸，自汗，头晕，纳少等［2－6］。丹参为本方中的主药，丹参酮ⅡA是丹参的主要成分［7］。我们采用高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量，测定结果表明该法快速、简便、准确、重现性好。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津LC－10A型高效液相色谱仪（LC－10A 泵；SPD－10AVP紫外检测器；CS－Light Potrun Analysis数据处理系统），日本岛津制作所；法国UVIKON XL型紫外可见分光光度计；AE－240型电子分析天平，梅特勒－托利多仪器；HS3120超声清洗仪，天津恒奥科技发展有限公司；102型电热恒温鼓风干燥箱，山东潍坊医药集团股份有限公司医疗器械厂；ZDHW型调温电热套，北京市永光明医疗仪器厂。

1.2 试剂

丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所110766－200417）；乙肝扶正胶囊（哈药集团三精黑河药业有限公司，批号：070501），色谱纯甲醇。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：Shim－Paok CLC ODS柱（150 mm×6.0 mm）；流动相：甲醇－水（75∶25）；流速为1.0 mL／min；检测波长270nm；灵敏度：0.01AVFS；柱温30℃。在此条件下，丹参酮ⅡA和样品中其他相邻色谱峰分离度大于2.0，理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于7000。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品13.00mg，置250mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（52μg／mL）对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品20粒的内容物研细，分别精密称取相当于8粒内容物的量，置入2个100mL回流瓶中，各精密加入25.00mL甲醇，称定重量。加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 结果

2.2.1 阴性对照试验 按药品标准所载处方工艺，不含丹参，制成阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。在2.1.1项下的色谱条件下准确进样20μL。从图1 上可看出，图a对照品溶液，图b 供试品溶液的色谱图上，有相同保留时间（t）20min处的色谱峰，而图c阴性对照溶液的色谱图上未见。这表明在本试验条件下丹参酮ⅡA的测定不受其他杂质干扰。

图1 HPLC图谱

2.2.2 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.50、1.00、2.00、4.00、10.00 mL，分别依次置入25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别准确进样20μL，按2.1.1项下色谱条件测定，记录峰面积，结果见表1，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，回归方程为Y＝128603.8 X－2503.884，R＝0.9999（n＝5），RSD＝1.13%。在1.04～20.80μg／mL范围内呈现良好的线性关系。

表1 线性关系的考察

2.2.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液4.00mL置入25mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。得浓度为8.32μg／mL的对照品溶液，按2.1.1项下色谱条件测定，准确进样20μL，重复进样5次，平均峰面积为1071110.9，RSD＝0.32%，结果表明该方法精密度高。

2.2.4 重复性试验 取同一批号样品（批号：070501），按2.1.3项下的供试品溶液制备方法制得供试品溶液。按2.1.1项下色谱条件测定，准确进样20μL，平行测定5 次，记录平均峰面积372050.7，RSD＝1.46%，（n＝5）表明该方法重复性好。

2.2.5 稳定性试验 精密吸取对照品溶液2.00mL置入50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。得浓度为2.08μg／mL的对照品溶液，按2.1.1项下色谱条件测定，准确进样20μL，每隔2h进样1次，峰面积平均值为264210.6，RSD＝1.35%，（n＝6）结果表明对照品溶液在12h内稳定。

2.2.6 回收率试验 取已知含量的样品（批号：070501）3份，分别精密量取5.00mL，置入25mL棕色容量瓶中。再分别精密取5.00mL 2.2.3项下所得8.32μg／mL的对照品溶液置入上述棕色容量瓶中。按2.1.1项下色谱条件测定，准确进样20μL，记录实测量。数据见表5，平均回收率为99.39%， RSD＝1.32%。结果表明回收率高，准确度高。

表5 乙肝扶正胶囊中丹参酮的加样回收率

2.2.7 供试品中丹参酮ⅡA的含量测定 分别精密吸取按2.1.3项下所得的乙肝扶正胶囊供试品溶液20μL，按2.1.1项下色谱条件测定，测得丹参酮ⅡA峰面积，以外标法计算样品中丹参酮ⅡA的含量，结果见表6。

表6 乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定

3 讨论

丹参是乙肝扶正胶囊的主药之一，所以丹参酮ⅡA的含量也正面反映了其质量的优劣。经过多批样品中丹参酮ⅡA的含量测定表明，HPLC 测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量，简便，准确，准确度高，精密度高，重现性好，稳定性好，适于此制剂的含量测定，可作为该产品的质量控制方法。

［1］中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药 科技出版社，2010：70－71.

［2］路金瑞，赵军磊.丹参酮联合西药治疗寻常痤疮疗效观察［J］.河南大学学报：医学版，2011，30（2）：153－154.

［3］张小帆，王培娜，王文琳.高效液相色谱法测定不同产地丹参中丹参酮ⅡA的含量［J］.河南大学学报：医学版，2003，22（1）：67－68.

［4］吴德明，董茂臣，唐文君.高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.黑龙江中医药，2012，（2）：49－50.

［5］肖雯婧，于波涛，马婕.高效液相色谱法测定五参安神胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.西南国防医药，2011，12（12）：1294－1296.

［6］宋厚斌.高效液相色谱法测定降粘胶囊中丹参酮ⅡA含量［J］.中国新药与临床杂志2010，11（11）：874－876.

［7］孟建升，杨文文.高效液相色谱法测定五明丹胶囊中丹参酮ⅡA含量［J］.中国药业，2012，10（19）：40－41.