2项对诊断儿童人巨细胞病毒活动性感染的比较

李 丽（广东省化州市人民医院检验科 525100）

人类巨细胞病毒（HCMV）感染在我国相当普遍，是最常见的宫内感染病原体，可经血液、唾液、精液、乳汁等分泌物传播[1]。HCMV对人类影响很大，尤其对免疫功能低下者，如孕妇、婴幼儿、器官移植、恶性肿瘤类患者还有放射损伤、获得性免疫缺陷综合征等。故对小儿CMV感染作早期诊断检测是十分必要的。HCMV感染可导致先天性畸形，智力低下，发育迟缓等，严重可引起肝炎、肺炎等胃肠道疾病[2]。本文对91例临床疑似CMV感染的患儿进行检测，并对其检测方法进行了比较，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年4月至2011年6月在本院住院治疗临床上怀疑为CMV感染的患儿共计91例，男47例，女44例。年龄1个月至10岁，其中1岁以内38例，占41.8%，大于1岁53例，占58.2%。

1.2 CMV pp65抗原血症检测 采用CMV BriteTMTurbo试剂盒检测，由北爱尔兰IQ公司提供。严格按照试剂盒说明操作。肝素或乙二胺四乙酸抗凝的空腹全血3～5mL，2h内送检。取蒸馏水1∶10稀释A液（红细胞裂解液），把2mL血与30mL稀释A液混合，置4℃5min，2 500r/min离心2min，弃上清液。若裂解红细胞不理想，再重复一次。把细胞团悬于30mL磷酸盐缓冲液（PBS）中，2 500r/min离心2min，弃上清液。PBS调整细胞浓度为2×106/mL。每份标本制备3张片，2张做检测，1张做背景对照。用PBS 1∶5稀释B液（固定液），用PBS 1∶5稀释C液（渗透液），将2张片插入B液5min，再将所有片子放入PBS洗液3min，然后放入C液1 min，洗片。加35μL单抗（D液），37℃20min，洗片，晾干，细胞片不能干透。加入35μL FITC标记抗体（E液），37℃20 min，洗2次后用自来水轻轻洗片，盖片。

用荧光显微镜观察结果，镜下观察全部细胞，pp65阳性细胞为均匀圆形/多叶核染色，绿色或黄绿色。阳性细胞大于5个/5×104为阳性。

1.3 CMV DNA检测 取同期患儿尿液，采用深圳匹基公司HCMV DNA荧光定量检测试剂盒，扩增循环条件按试剂盒的设定进行，聚合酶链反应（PCR）扩增循环次数为42个。检测系统由伯乐公司提供，同时连接计算机，对整个PCR过程中PCR产物荧光值进行实时检测，操作严格按说明书进行。

1.4 血清CMV IgM检测 取同期患者血清，采用微粒子酶免疫分析，严格按照试剂说明操作，试剂由美国Abbott公司提供。

1.5 统计学方法 采用一般χ2检验比较pp65与CMV DNA、CMV IgM之间的关联性，P＜0.05为有关联性；用配对设计的χ2检验（χm2）比较不同检验方法结果的差异性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3项共检测患儿91例，结果见表1。由表1可见，CMV DNA 阳性率最高，为49.5%，其次为CMV pp65，为37.4%。

表1 3项检测CMV感染结果

2.2 91例CMV患儿血pp65与尿CMV DNA和血CMV IgM检测结果 见表2。由表2可见，pp65抗原血症与尿CMV DNA两种方法阳性分别为34例和24例，均具有较高的检出率，两种方法所检测的结果有明显相关性（χ2＝9.70），且结果之间差异无统计学意义（χm2＝3.23，P＞0.05）。pp65与血CMV IgM检测结果之间无明显相关性（χ2＝0.77），两种方法结果差异有统计学意义（χm2＝12.03，P＜0.01）。pp65抗原血症与尿CMV DNA阳性符合率为75.6%（34/45），阴性符合率为80.7%，与IgM 阳性符合率为29.4%（10/34），阴性符合率为70.4%（57/81）。pp65相对于PCR的敏感性为75.6%（34/45），特异性为 70.6% （24/34），与 HCMV DNA 相比，pp65抗原的符合率为85.5%，与IgM抗体检测的符合率为70.3%。

表2 91例CMV患儿血pp65与尿CMV DNA和血CMV IgM检测结果

3 讨 论

CMV感染在我国相当普遍，大多在幼年时期发生。多数感染者无明显症状，但在婴儿期和有免疫抑制的个体可引起严重疾病[3]。CMV感染状态可分为潜伏感染和激活感染，由于健康人群中CMV潜伏感染也较常见，因此区分潜伏感染和激活感染是临床诊断CMV感染的关键。目前临床上常用检测CMV的项目有血CMVpp65、尿CMV DNA及血CMV IgM[4]。

本文结果显示，血CMVpp65和尿CMV DNA 2项检测结果均有较高的阳性率，阳性符合率也较高，且统计学显示结果上具有明显相关性，结果之间差异无统计学意义。CMV pp65是CMV－u183基因编码的即刻早期蛋白，在CMV DNA复制前就有合成，调控随后的病毒基因的表达及DNA合成，是体内活动性CMV复制的标志。因此，CMV激活感染时，pp65持续高水平表达，潜伏感染时表达极低，一般检测不到。而且pp65抗原血症可在激活感染早期即呈阳性。目前认为pp65抗原是HCMV感染时外周血白细胞中最容易被检出的CMV抗原，HCMV pp65抗原血症作为免疫组化法直接检测血液白细胞中的CMV抗原，不但具有快速、简便、容易操作的特点[5－7]，而且还能根据结果区 分患者 CMV 的感染状态，在CMV活动性感染及预后判断上有明显优势。有研究表明，可以根据CMV抗原血症水平来推断CMV感染的类型和时期，原发感染抗原血症水平高，继发感染抗原血症水平低；感染初期及恢复期水平低，发生进展性CMV疾病时水平迅速上升。PCR检测技术是近年来新兴的一种技术，具有简便、快速、敏感且检测标本要求低等特点，但是PCR要求有较严格的实验场所，否则极易出现假阴性或假阳性结果；并且PCR要求有一定的设备，如PCR扩增仪，还要求有合理的引物设计及需要购Tap酶等，花费较大。由于PCR的高灵敏性，存在敏感性虽高但特异性差的缺点，而且PCR检测阳性不能区分是潜伏感染还是激活感染，所以PCR的应用受到一定的限制。

本组实验CMV IgM的检出率较低。IgM的量不仅与病毒负荷有关，还与患者免疫功能状态有关。CMV感染患儿多有免疫功能低下，也影响其敏感性和特异性。另外检测血CMV IgM易受类风湿因子及特异性IgG的影响，灵敏度较低。因此，检测CMV IgM在诊断CMV感染中的价值受到限制。

对于CMV感染，pp65抗原血症法检测CMV pp65抗原是一种敏感、特异、快速的诊断方法；不仅能早期诊断，其量化结果有助于评价感染状态与判断预后，也是观察治疗后果的有效检测手段[8]。pp65抗原血症法方法学几经完善，已成为国际公认的活动性HCMV感染诊断的“标准”方法，以后相继建立的方法均以此方法作为对照。

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