基于不同检测方法的乙型肝炎病毒感染血清标志物模式分析

江雁琼，迟 琼，詹铀超（广州医学院第五附属医院检验科 510700）

乙型肝炎病毒（HBV）/感染的血清学标志物[HBV表面抗体（HBsAg）、HBV 表面抗体（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗体（抗－HBe）、HBV核心抗体（抗－HBc）] 检测是诊断HBV感染和判断病毒复制的重要指标之一[1]。目前酶联免疫吸附试验（ELISA）仍是乙型肝炎血清学标志物检测的主要方法，但是近年来有越来越多的临床实验室将电化学发光法（ECLIA）用于这些标志物检测[2－3]。由于 ECLIA 与 ELISA 检测原理和特性不同，因此ECLIA检测乙型肝炎血清学标志物会出现一些不同于ELISA检测的模式。本实验室对ECLIA与ELISA检测乙型肝炎血清学标志物会出现的各种模式进行了综合分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 检测对象 全部标本均来自本院的患者，共20 709例，年龄1d至97岁，其中男11 292例，女9 417例。20 709例标本中，有11 923例标本来自2010年3～5月住院患者，另外8 786例标本来自2011年3～5月住院患者。

1.2 方法 对2010年3～5月收集的11 923例患者标本采用ELISA检测5项（HBsAg、抗－HBs、HBeAg、抗－HBe、抗－HBc）血清学标志物，试剂购自上海科华生物工程股份有限公司。对2011年3～5月收集的8 786例患者标本采用ECLIA检测相应指标，试剂购自雅培诊断公司。均严格按说明书进行操作。

1.3 统计学方法 组间率的比较采用χ2检验，抗－HBs定量数据的组间比较采用Kruskal－Wallis H检验。全部统计分析均使用SPSS17.0统计软件完成。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HBsAg阳性患者性别分布 ELISA检测的11 923例患者中，男性HBsAg阳性率明显高于女性，二者差异有统计学意义（χ2＝6.298，P＜0.05），见表1。ECLIA检测的8 786例患者中，也发现男性HBsAg阳性率明显高于女性，二者差异也有统计学意义（χ2＝15.196，P＜0.05），见表2。

表1 ELISA检测11 923例患者的HBsAg阳性率

表2 ECLIA检测8 786例患者的HBsAg阳性率

2.2 两种不同方法检测乙型肝炎血清学标志物结果模式 见表3。由ELISA检测的11 923例患者乙型肝炎血清学标志物的结果汇总表现为20种不同模式，由ECLIA检测的8 786例患者乙型肝炎血清学标志物的结果汇总表现为19种不同模式。用ECLIA检测乙型肝炎血清学标志物后，出现4种新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5阳性模式，同时原先用ELISA检测可见的5种模式未能重现，这5种模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5阳性模式。

2.3 2，2、5，2、4、5这3种阳性模式阳性率的比较 见表4。2010年3、4和5月用ELISA分别检测4 357、3 768和3 798例住院患者的乙型肝炎血清标志物，统计分析发现模式2，2、5和2、4、5阳性率在3个月住院患者之间差异均有统计学意义。2011年3、4和5月用ECLIA分别检测2 990、2 791和3 005例住院患者的乙型肝炎表面标志物，统计分析发现2，2、5，2、4、5模式阳性率在3个月住院患者之间差异无统计学意义。2010年3个月11 923例住院患者和2011年3个月8 786例住院患者之间模式2，2、5和2、4、5阳性率比较差异均有统计学意义。

2.4 抗－HBs定量结果比较 见图1。对ECLIA测定抗－HBs浓度大参考区间上限的3组2，2、5，2、4、5 3种模式组抗－HBs定量结果进行统计分析，发现3组之间比较差异有统计学意义（χ2＝86.24，P＜0.01）。

2.5 HBsAg和抗－HBs同时阳性的比例 见表5。2011年3～5月用ECLIA检测8 786例住院患者乙型肝炎血清标志物发现HBsAg和抗－HBs同时阳性的患者77例，阳性率为0.88%。2010年同期用ELISA检测11 923例住院患者中仅测出11例患者为HBsAg和抗－HBs同时阳性，阳性率为0.09%。用Fisher精确概率检验证实两组之间HBsAg和抗－HBs同时阳性的比例差异有统计学意义。

表3 11 923例/8 786例患者20种模式乙型肝炎血清学标志物检测结果（ELISA/ECLIA）

表4 表面抗体阳性3种模式的阳性结果[n（%）]

图1 3种抗－HBs阳性模式组抗－HBs定量结果比较

表5 乙肝表面抗原和表面抗体同时阳性的比例

3 讨 论

HBsAg是HBV S基因编码的包膜蛋白，是机体感染HBV后最早出现的血清学标志物之一[4]。抗－HBs是HBsAg刺激机体产生的保护性中和抗体，有清除HBV防止再感染的作用。但抗－HBs滴度较低时，不能阻止或全部阻止 HBV DNA在体内复制。HBeAg和HBsAg都是HBV C基因前C区和C区翻译产物，它们的大部分氨基酸序列相同，但是前者是一种分泌型蛋白，由感染后的肝细胞分泌[4－5]。HBeAg和HBcAg分别有其特异的抗原表位，可分别诱导机体产生抗－HBe和抗－HBc。抗－HBe一般存在于无症状HBV携带者及非活动期慢性肝炎患者中，一般在HBeAg消失后出现，表示HBV在体内复制减少或终止，传染性减弱或消失，病情开始恢复[4]。抗－HBc是人感染HBV后第一种出现的抗体。

HBV血清学5项标志物同时检测可以出现不同的结果模式[4，6]。本文资料证实，ELISA检测的11 923例患者乙型肝炎血清学标志物的结果汇总表现为20种不同模式，ECLIA检测的8 786例患者乙型肝炎血清学标志物的结果汇总表现为19种不同的模式。由此提示ELISA和ECLIA检测住院患者乙型肝炎血清学标志物都可出现多种不同的结果模式。两种方法检测乙型肝炎血清学标志物都可出现的结果模式有15种。这15种包括全阴性及1，2，4，5，1、5，2、4，2、5，3、5，4、5，2、3、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5，1、2、4、5阳性模式。应用 ECLIA 检测乙型肝炎血清学标志物后，出现4种新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5阳性模式，同时原先用ELISA检测可见的5种模式未能重现，这5种模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5阳性模式。

在ELISA检测出现的20种结果模式中，阳性率大于1.00%的模式包括全阴性及2，2、4，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5阳性模式；在ECLIA检测出现的19种结果模式中，阳性率大于1.00%的模式包括全阴性及2，5，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5阳性模式。因此全阴性模式及2，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5阳性模式是HBV血清学5项标志物检测相对较常见到的结果模式。其临床意义总结如下：全阴性模式表明患者未受HBV感染或感染后未产生有效免疫应答；2阳性模式表明机体已经产生保护性中和抗体，但抗体滴度低于保护性水平时，需要及时追加乙肝疫苗免疫接种；2、5阳性模式表明机体既往感染HBV，处在恢复期；4、5阳性模式提示机体既往感染HBV，体内虽产生抗－HBe和抗－HBc，但是这两种抗体无任何保护作用，对患者病情的判断需要结合肝功能检测及病毒核酸检测结果；2、4、5阳性模式提示机体既往感染HBV，体内已经产生保护性抗－HBs，但是抗－HBe和抗－HBc仍然存在，对患者病情的判断除了评价3种抗体相对水平外，还需要结合肝功能检测及病毒核酸检测结果；1、3、5阳性模式是通常所说的“大三阳”，出现这种结果模式的患者一般处在HBV感染的急性期或慢性活动期，病毒在体内大量复制，传染性强；1、4、5阳性模式是通常所说的“小三阳”，这种结果模式见于急性感染后病情趋于好转或者见于HBV携带者。对于ECLIA检测HBV血清学标志物出现4种新的模式（3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5阳性模式），可能的解释如下：3、4、5阳性模式若能排除HBsAg的带现象，则提示患者感染HBV后处于HBeAg转换期，体内HBeAg和抗－HBe处于转换过程中的动态平衡状态[7]；1、2、3、5阳性模式提示患者体内有抗－HBs，但不足以完全中和HBsAg，可能因为不同HBV亚型感染或HBV S区基因突变导致 HBsAg和抗－HBs共同存在；1、3、4、5阳性模式提示患者感染HBV后处于“大三阳”和“小三阳”转换期，体内HBeAg和抗－HBe处于转换过程中的动态平衡状态，或者由于HBV的C区发生变异；1、2、3、4、5阳性模式是一种罕见模式，可能是患者处于多种抗病毒药物治疗过程中，病毒的S区或C区基因发生变异[8]。ECLIA检测发现的HBsAg和抗－HBs共同阳性模式的总阳性率要高于传统的ELISA，除了患者因素以外，检测方法学可能是造成此种差异的重要原因之一。

对2010年和2011年3、4和5月住院患者2，2、5，2、4、5 3种模式阳性率分别进行比较分析，结果发现，ECLIA检测出的2，2、5，2、4、5 3种模式阳性率在2011年3个月住院患者之间差异均无统计学意义，而ELISA检测出的2，2、5，2、4、5 3种模式阳性率在3个月住院患者之间比较差异均有统计学意义。2010年3个月11 923例住院患者和2011年3个月8 786例住院患者之间模式2，2、5和2、4、5阳性率比较差异均有统计学意义。这些发现提示对于全部用ECLIA检测乙型肝炎血清学标志物或既开展ECLIA又保留ELISA的实验室而言，在审核和解释乙型肝炎血清学标志物结果时需要注意这些差异性。

如前文所述，抗－HBs是HBsAg刺激机体产生的保护性中和抗体，有清除HBV防止再感染的作用。本文研究对2，2、5，2、4、5 3种抗－HBs阳性模式进行分组，对3组间抗－HBs浓度水平进行比较分析发现其差异均有统计学意义，2、4、5阳性模式组抗体浓度水平要高于其他两组，提示机体抗－HBs浓度水平可能与抗－HBe和（或）抗－HBc是否存在有一定关系。

[1] 中华医学会肝病学分会、感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华肝脏病杂志，2005，13（12）：881－891.

[2] Hadziyannis E，Manesis E，Vassilopoulos D，et al.Performance characteristics of microparticle enzyme and chemiluminescence immunoassays for measurement of anti－HBc immunoglobulin M in sera of patients with HBeAg－negative chronic hepatitis B virus infection[J].Clin Vaccine Immunol，2008，15（2）：385－387.

[3] Huzly D，Schenk T，Jilg W，et al.Comparison of nine commercially available assays for quantification of antibody response to hepatitis B virus surface antigen[J].J Clin Microbiol，2008，46（4）：1298－1306.

[4] 何卫平，赵军.乙型肝炎病毒血清学标志物临床意义解读[J].中华全科医师杂志，2010，9（8）：516－518.

[5] 黄文林.分子病毒学[M].2版.北京：人民卫生出版社.2006：519－521.

[6] 刘媛媛，辛武，韩忠学.乙型肝炎血清学标志物特殊模式的分析[J].国际检验医学杂志，2011，32（4）：516－517.

[7] 邱振华，黄金波，曾在祥.乙肝血清学标志物HBeAg与抗HBe共存模式分析[J].临床和实验医学杂志，2010，9（12）：895－896.

[8] 徐兆珍，关伟，张淑静，等.乙型肝炎表面抗原抗体同时存在的血清学模式与病毒血症的关系[J].临床输血与检验，2010，12（3）：216－218.