一例猪圆环与猪瘟混合感染的诊治

任士飞 张林吉 （徐州生物工程职业技术学院 221006）

一例猪圆环与猪瘟混合感染的诊治

任士飞 张林吉 （徐州生物工程职业技术学院 221006）

2013年3月份，徐州沛县某猪场暴发了奇异的病，很多即将断奶的仔猪体温不升高，死亡前两天哆嗦，然后死亡。发病率62%，致死率83.3%，当地的兽医不能确诊，拿2只即将死亡的猪到本院寻求帮助。

1 临床症状

畜主送来刚死亡但仍有体温的猪。问诊：发病前饮食很好，发病后饮食欲降低，粪便量减少。体表观察：下眼睑肿大，体表有出血斑点，也有很多很大的圆形斑块，全部结痂，腹股沟浅淋巴结肿大。

2 病理变化

解剖检查：心包积液，液体澄清透亮、黄色，肝不肿大，胆囊呈黄色，脾脏肿大呈紫黑色，肺脏轻微肿大，少部分肉变，胃壁有出血点，肠系膜严重充血，肠系膜淋巴结肿大、出血，肠黏膜轻微出血，肾脏肿大，表面有小的出血点，皮质部呈土黄色，有出血点，膀胱储有黄色浑浊尿液。腹股沟浅淋巴结肿大、有浆液渗出，肩前淋巴结出血肿大。

3 实验室诊断

3.1 培养基 普通营养琼脂平板，鲜血琼脂平板，常用染色液由徐州生物工程职业技术学院动物微生物实验室提供。

PCV2F AAGG GCTG GGTTATGGTATG CSFV2R TGATGCTGTCACACAGGTGAA 508 PCV2R CGCTGGAGAAGGAAAAATGG 353 CSFV2F GCTCCTGGT TGG TAACCTCGG

3.2 酶和试剂 RNA 反转录酶、Taq酶、dNTPs、DNA Marker购自TaKaRa公司；琼脂糖凝胶电泳染色剂Goldview购自赛百盛生物公司；蛋白酶K、SDS、T rizol试剂购自上海生工；生化鉴定试剂盒购自杭州天和微生物试剂有限公司。苯酚、氯仿、异戊醇及常用化学试剂为分析级。进行：取总RNA7µl，加入20µl反转录体系中，包括4µl反转录溶液，6µl dNTPs，1µl下游引物(50pmol/L)，1µl反转录酶和1µl RNase Inhibitor，用DEPC水补至20µl，42℃水浴1h，95℃5min后，冰浴5min，置-20℃备用。50µl体系，蒸馏水37.5µl、10xPCR Buffer5µl、反转录产物4µl、Taq酶0.5µl、上游、下游引物各1µl、dNTPs 1µl。PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃变性30s，60℃退火1min，，72℃延伸1min，30个循环;72℃延伸7min。取5µl PCR扩增产物于1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。

3.5 PCV2PCR检测 （1）病毒总DNA的提取：采用酚氯仿抽提法提取病料中的DNA，室温干燥，加入20µl灭菌ddH2O，-20℃保存备用。（2）PCV2的PCR扩增：PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，58℃(PC V2)退火1min，72℃1min，30个循环，72℃延伸7min。取5µl PCR扩增产物于1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。

3.6 细菌分离鉴定 （1）病原分离培养及纯化将收集的猪的肝脏病料接种于鲜血培养基上进行增菌培养，然后划线接种在普通培养基上，于37℃温箱中培养18～24h，观察到菌落的形态及溶血类型。（2）生化试验对纯化细菌进行糖发酵试验(葡萄糖、鼠李糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、半乳糖、果糖)、脲酶试验、肌醇、触酶试验、氧化酶试验、VP试验，观察结果。

4 结果与分析

4.1 检测结果 PCR或RT-PCR检测结果表明，PCV2和CSFV扩增为阳性，片段大小与预期相符，约353bp和，其他病毒检测结果均为阴性(附图)。

3.3 引物 参照文献设计引物，引物由上海Invitrogen合成，用高压灭菌ddH2O溶解配成10pmo1/L，-20℃保存备用。

3.4 CSFV的RT-PCR检测 （1）1按Trizol试剂使用说明书提取样品总RNA进行，加入20µl适量DEPC处理过的水溶解沉淀，待RNA沉淀完全溶解后，-20℃保存备用。（2）RT-PCR：反转录反应按Promega公司的使用说明书

附图 PCR产物琼脂糖凝胶电泳图

4.2 细菌分离培养及染色、镜检结果 未检测到细菌。

4.3 生化试验结果 生化试验均为阴性。

5 防治措施

5.1 隔离病猪群 根据具体情况对病猪进行分群，无害化处理病死猪，及时打扫圈舍，彻底消毒，将污物、粪便等消毒后堆积发酵。消毒剂要轮换使用，2次/d，连用3d，再后改为1次/d，连用3d。

5.2 紧急免疫 一猪一针头，猪瘟兔化弱毒疫苗，25日龄内猪1头份/头，25日龄以上猪2头份/头，母猪4头份/头。药物治疗，一个治疗周期为5d。（1）采用抗菌药物，如氟苯尼考、丁胺卡那药物进行肌注；（2）采用黄芪多糖注射液配合维生素B1、B12和维生素C肌肉注射；（3）选用新型的抗病毒药物，如轻移因子、干扰素等进行治疗；（4）对尚有食欲的，投入多汁青绿饲料，用蒽诺沙星+黄芪多糖粉剂拌料，饲喂1周。

6 小结

（1）坚持自繁自养和全进全出制度，外购猪要严格检疫，隔离观察，隔离饲养1个月，检查确认无病后方可入群。（2）猪圆环病毒病、猪瘟为免疫抑制性疾病，目前尚无特效药物。因此，有一定规模的养猪户，必须坚持“预防为主，防重于治”的原则，并制定合理科学的免疫程序，严格按程序进行全面预防接种。（3）规模化养猪户必须健全兽医卫生防疫制度。一定要按照防疫要求，做好环境卫生工作，严格消毒、药物预防等综合性防治措施，才能有效避免疫病的侵入。（4）目前规模化养猪户疾病发生常常是多种疾病混合感染。作为规模化养猪户和技术人员，一定要了解国内外疫病的流行动态，及时掌握新的防治手段，才能做到防病于未然。

S858.28

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1007-1733(2013)09-0035-02

2013–06–27）