牛奶中四环素类药物残留的快速检测

姜 波 时冉冉 王 涛

（1.山东省济南市畜产品质量安全监测中心，济南 250002；2.山东省济南市动物卫生监督所，济南 250002）

畜产品质量安全已成为我国乃至全世界共同关注的话题，尤其是近几年不断出现牛奶、奶粉的安全问题，更加大了监管部门的责任。如何控制药物残留，确保畜产品质量安全，保证人们能喝到“放心奶”，监督和检测就成为了至关重要的环节。畜产品质量安全包括“肉、蛋、奶”等很多方面，其中牛奶中药物残留始终备受关注。国家对牛奶中药物残留的控制使用、监督检查和检测方面都投入了相当大的人力、物力。对监督检测部门十分重视，检测方法也不断的更新发展。那么，我们需要更科学、高效、准确的检测方法来监督监测药物残留。下面就介绍了牛奶中四环素类的快速检测方法。

1 常见的四环素类药物

四环素类药物为广谱抗生素，主要包括四环素、土霉素、金霉素和强力霉素。其抗菌作用强，价格低廉，被广泛用于临床各种感染性疾病的治疗。其在动物性食品中的残留可导致诸多不良反应，如胃肠道反应及二重感染等。临床广泛应用也可导致对四环素类药物的耐药菌株迅速增加。因此，对动物性食品中四环素类药物的残留检测非常重要也很必要。

2 牛奶中四环素类药物残留快速检测方法

试纸条是一种快速筛选检测的方法，能快速检测出牛奶中是否含有四环素类药物，对监督检查牛奶药物残留工作提供了便利的条件，为保证食品安全提供了一种高效的检测手段。

2.1 优势与不足

牛奶样品不需要复杂的特殊处理，经过简单的水浴可以直接用于检测，监督检查人员和检测人员可进行现场检测，快速高效判断结果，节省人力和物力，提高了工作效率。但本检测方法的结果易受样品、温度、湿度等环境因素和其他条件影响，可能出现假阳性结果，所以需要积累经验，或做进一步的试验。

2.2 原理

牛奶中四环素类药物快速检测试纸条含有被事先固定于硝酸纤维素膜的抗原检测线（T线）和质控线（C线）。微孔中的金标抗体经牛奶样品复溶后在50℃水浴中温育3 min，将试纸条插入金标微孔中反应8～10 min，若样品为阴性，在T区出现一条紫红色条带；若样品为阳性，则T区不会出现紫红色条带。无论样品中有无四环素类药物的存在，C区都会出现一条紫红色条带。牛奶中四环素类药物的快速检测方法需要用到水浴锅或者是温育器、微量移液器。

2.3 灵敏度

金霉素的检测灵敏度为30 ppb；强力霉素的检测灵敏度为30 ppb；四环素的检测灵敏度为50 ppb；土霉素的检测灵敏度为100 ppb。

2.4 检测样品的制备和要求

牛奶中四环素类药物快速检测方法适用于原奶或者是混合奶样，检测前需要将牛奶样品混匀。被测牛奶样品要避免使用结块或者是感官性状有问题的液态奶，待测奶样应冷藏保存，保存时间不得超过4 d。

2.5 快速检测试纸条的存放

快速检测试纸条的存放要求不是非常严格，一般控制在温度15℃～24℃之内，密封、阴凉干燥、避光存放，严防受潮。并在有效期内使用，一般有效期为6个月。

2.6 检测方法

2.6.1 检测步骤

（1）将水浴锅或者是温育器打开，设置温度为50℃，待温度稳定后使用；（2）取待测牛奶样品600 ul加入到样品管中，充分混匀；（3）打开铝箔袋，取适量金标微孔，置于桌面上（注意：取出微孔后，立即将铝箔袋放入自封袋中密封，以防试纸条受潮）；（4）取150 ul处理好的奶样于金标微孔中，充分混匀至孔底的紫红色颗粒完全溶解；（5）将加入样品溶液后的金标微孔置于50℃水浴锅（或温育器）中，温育3 min；（6）从反应的铝箔袋中，取出适量的试纸条（注意：请勿用手触碰吸水纸外的其他区域），并在吸水纸上做标记；（7）将试纸条插入温育后的金标微孔中，使样品垫充分浸入样品溶液中，并将其置于50℃水浴锅（或温育器）中，反应8～10 min后，观察显色区，判断结果，其他时间判断无效。

2.6.2 结果判定

阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅都判为阴性。

阳性：C线显色，T线不显色，结果判为阳性。

无效：C不显色，无论T线是否显色，该检测卡均判为无效，说明操作不当或者是检测试纸失效。

结果如图所示：

2.7 影响因素和注意事项

2.7.1 奶牛个体差异

由于奶牛的个体差异，受年龄、品种、性别和养殖环境的影响，抽取牛奶样品略有所差异，在检测过程中，可能会影响检测线颜色深浅，一般并不影响结果的判断，只要检测线出现条带，不论深浅，就可以判定结果为阴性结果。

2.7.2 检测环境及条件

检测时，检测温度、湿度和检测时间都会对实验结果有所影响。试验过程中，环境的温度尽量控制在20℃左右进行；环境湿度不要太大；试纸条开封后1 h之内使用，观察结果时间也尽量控制在每个样品10 min之内，以保证试纸条不受潮，减少对检测结果的影响因素。

2.7.3 检测样品

牛奶样品为冷冻状态，应使其化冻回温再进行检测，以免影响检测结果，必须保证样品在正常温度之内；被测牛奶样品要避免使用结块或者是感官性状有问题的液态奶，待测奶样应冷藏保存，保存时间不得超过4 d。

2.7.4 牛奶样品吸管不可混用，以免交叉感染

如果样品中污染有杂物或呈浑浊状时要经离心或者过滤后再用于检测，严重污染或浑浊者不可用于检测。

2.7.5 假阳性

由于各种原因，牛奶样品检测时有可能会出现假阳性，对可疑样品或阳性样品，可重复实验（每支试纸只能使用1次），也可用酶联免疫法做进一步确定。

2.7.6 试纸条和金标微孔

不要混用来自不同批号的试纸条和金标微孔；应避免延误将试纸条插入和取出金标微孔的操作，以保证各样品温育时间一致。

2.7.7 废弃物处理

实验后的废弃物要妥善处理，试纸条也要严格按照保存条件保存，在有效期内使用。